灵丹散对四氯化碳致肝损伤大鼠肝功能及肝纤维化的影响*

何颖颖 李 锋△ 马 亮 孙香蕾 石德祥

1第四军医大学西京医院（陕西西安710023）

2陕西省结核病防治院（陕西西安710023）

灵丹散是西京医院中医科经验处方，属于散剂、协议处方，具有扶正化瘀之功，用于多种原因所致肝硬化的防治和早期肝硬化的治疗，多年的临床应用表明其具有明显的疗效。本实验旨在通过对四氯化碳致肝损伤大鼠血清肝功能指标及肝纤维化指标的检测，观察灵丹散对肝纤维化的治疗作用。

1 材料与方法

1．1 动物 雄性 SD大鼠 40只，清洁级，体质量 140～160g，第四军医大学实验动物中心提供，第四军医大学实验动物中心清洁级饲养。

1．2 药物与试剂 灵丹散由灵芝、丹参、田基黄、苦参、当归、柴胡、五味子、鳖甲、山药、茯苓组成，经醇提、水提、打粉，再混合制成粉剂，由第四军医大学药物研究所制备。用前以生理盐水冲调。复方鳖甲软肝片，内蒙古福瑞中蒙药科技股份有限公司生产，批号20020501，用前研粉以生理盐水溶解。四氯化碳分析纯，购自天津市福晨化学试剂厂。

1．3 模型制备［1］大鼠分为正常对照组、模型组、复方鳖甲软肝片组、灵丹散组，每组10只。模型大鼠首次皮下注射60%CCl4橄榄油溶液5mL/kg，其后60%CCl4橄榄油溶液3mL/kg，每周2次，共8周，正常对照组皮下注射等量纯橄榄油。各组均为普通饮食，自由饮水。

1．4 给药方法 造模第4周起，复方鳖甲软肝片组灌胃复方鳖甲软肝片0．6g/kg（相当于成人临床用量的6倍）；正常对照组、模型组灌胃同体积生理盐水；灵丹散组灌胃灵丹散药粉0．6g/kg。每日1次，共给药5周。

1．5 检测方法 肝功能：西京医院检验科试剂盒方法检测。肝纤维化：透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）联合检测采用放射免疫分析法，试剂盒购自北京北方生物制品研究所，所用仪器由核工业部西安二六二厂生产，型号为：XH6080。肝脏病理学观察：HE染色，包括以下6个主要步骤：（1）取材；（2）固定；（3）脱水透明；（4）浸蜡、包埋；（5）切片和贴片；（6）染色和封片，然后在光镜下观察肝脏组织的一般形态结构，肝小叶及间质有无异常。

1．6 统计学处理 应用SPSS 12．0统计软件。计量资料以（x±s）表示，采用ANOVA程序进行单因素方差分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 大鼠存活情况 实验结束前，正常组10只大鼠全部存活，模型组大鼠存活7只，复方鳖甲软肝片对照组及灵丹散组各8只存活。

2．2 灵丹散对大鼠血清肝功能的影响 见表1。肝功能检测结果显示，模型组较正常组血清天门冬酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）活性升高（P＜0．05），总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、球蛋白（G）含量降低（P＜0．05）；灵丹散组与模型组比较，AST、ALT、ALP 活性明显降低（P＜0．05），TP、Alb、G含量升高（P＜0．05）。

表1 各组肝功能指标比较 （±s）

表1 各组肝功能指标比较 （±s）

与模型组比较，*P＜0．05。 下同。

（mg/L）36．54±0．56*28．66±2．79*30．80±1．70 20．13±2．89*复方鳖甲软肝片组 8 64．41±1．52* 36．87±0．68* 27．41±1．24*灵丹散组 8 57．45±1．06*35．28±0．68*23．17±0．80*ALT（U/L）19．50±1．29*191．40±18．82 47．17±6．80*40．40±12．92*组 别n Alb（mg/L）G正常对照组模型组10 7 AST（U/L）162．40±11．31*347．80±25．78 147．17±13．23*151．25±15．15*ALP（U/L）114．20±8．35*347．83±73．36 109．33±9．97*124．75±4．99*TP（mg/L）65．08±2．45*49．58±4．45

2．3 灵丹散对大鼠肝纤维化指标的影响 见表2。模型组较正常组血清 HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ均有明显上升（P＜0．05），正常对照组及灵丹散组与模型组比较，HA、LN、C-Ⅳ、PCⅢ有明显下降（P＜0．05），但正常对照组与灵丹散之间无明显差异。

2．4 病理组织观察 正常对照组肝脏肝小叶结构正常，肝细胞条索排列规则有序；模型组肝细胞弥漫性脂肪变性，炎症细胞浸润，可见肝细胞坏死区、汇管区有纤维结缔组织增生，肝细胞条索排列紊乱，肝小叶结构紊乱。复方鳖甲软肝片组及灵丹散组的镜下表现为轻度脂肪变性，胶原纤维沉积减少，有少量炎细胞浸润，两组肝组织病理变化相似。

表2 各组肝纤维化指标比较 （ng/mL，±s）

表2 各组肝纤维化指标比较 （ng/mL，±s）

C-Ⅳ PC-Ⅲ8．26±1．02*43．55±2．01*10．95±1．78 47．29±1．64复方鳖甲软肝片组 8 30．63±6．76*52．67±2．96* 9．37±0．88*44．11±1．57*灵丹散组 8 32．79±6．66*54．31±4．79* 9．22±0．79*43．03±2．45*组 别正常对照组模型组n 10 7 HA 33．41±1．24*57．49±22．94 LN 53．13±2．53*65．49±6．12

3 讨 论

中医学认为肝纤维化初起多为湿热、疫毒，或为气机不畅而致肝血瘀阻，血瘀日久又可致正气虚损，故治疗多从扶正化瘀入手，兼以清热解毒［2］。灵丹散组成药物中，灵芝［3］、当归补气养血，山药、茯苓健脾益气；当归补血活血；丹参［4］、鳖甲活血化瘀；柴胡疏肝理气；苦参、田基黄清利湿热，又有解毒之功，诸药相伍，可收扶正化瘀、清热解毒利湿之功。

本实验中，模型组大鼠存在明显的肝细胞脂肪变性，其原因在于CCl4在肝内的代谢裂解产物所导致的脂质过氧化反应，过氧化反应产物不但可破坏肝细胞结构，引起肝细胞脂肪变性，更可直接刺激肝星状细胞生成胶原，从而导致肝纤维化的病变。而复方鳖甲软肝片组、灵丹散组大鼠肝细胞脂肪变明显减轻，纤维化改变不明显，这可能是方剂整体抗肝纤维化的机制之一。本实验通过对实验动物血清学检测，肝纤维化病理学观察发现，灵丹散有保护肝脏细胞，降低肝细胞脂肪变性程度，改善肝纤维化病理状态，降低血清ALT、AST，促进白蛋白的合成等作用，说明其具有明确可靠的抗纤维化疗效，但其作用的具体机制尚有待进一步研究。

［1］ 金峰，张捷，张志坚，等．四氯化碳诱导大鼠肝硬化模型方法的研究［J］．中华实用医学，2003，5（16）：43-44．

［2］ 马健，左冬冬．中医药治疗肝纤维化的研究进展［J］．医学研究杂志，2008，5（37）：103-104．

［3］ 陈洁，史杨娟，罗琳，等．灵芝三萜对大鼠肝纤维化的保护作用及其机制研究［J］．中国医院药学杂志，2008，28 （9）：694-697．

［4］ 陶艳艳，刘成海．丹参及其化学成分抗肝纤维化作用机制研究进展［J］．中西医结合学报，2004，3（2）：145-148．