高效液相色谱法测定当归养血丸中丹皮酚的含量

陈玉秀 张胜

高效液相色谱法测定当归养血丸中丹皮酚的含量

陈玉秀 张胜

目的建立了高效液相色谱法测定当归养血丸中丹皮酚的检测方法。方法色谱条件为C18色谱柱;柱温为室温;流动相:甲醇-水(70∶30);流速1 ml/min;检测波长:274 nm。结果丹皮酚在0.0102～0.0510 mg/ml范围内具有良好的线性关系(r=0.9999)。加样回收率为99.12%(RSD为2.88%，n=9)。结论比种方法简便，准确度高。

当归养血丸;丹皮酚;高效液相色谱法

当归养血丸是中国药典载入品种，具有益气养血调经的功效。用于气血两虚所致的月经不调，症见月经提前、经血量少或量多、经期延长、肢体乏力。2010版中国药典一部中当归养血丸只有当归与丹皮的薄层鉴别而没有含量测定［1］。因此我们开发了丹皮酚的含量测定项目，进一步提升了该产品质量控制水平。现报告如下。

1 仪器与试药

PERKIN ELMER高效液相色谱系统:Series 200 LC四元低压梯度泵;Model 785A紫外检测器;NELSON 200 Series色谱工作站;200 Series自动进样器。丹皮酚对照品购自中国药品生物制品检定所，含量测定用，批号:0708-9704。当归养血丸由本厂提供(批号:1008261、1008271、1008281);阴性对照样品(按处方除去牡丹皮按制法工艺制成)。分析用甲醇为色谱纯，水为三重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent C18，250×4.6 mm 5μm(Agilent公司产);柱温:室温;流动相:甲醇-水(70:30);流速1 ml/min;检测波长:274 nm，进样量10μL。在此色谱条件下，丹皮酚可达到基线分离，见图1，2。理论板数按丹皮酚峰计算不低于3500。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液制备 精密称取干燥至恒重丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含丹皮酚对照品20 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品水蜜丸，研碎，取1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 m l，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率33 KHz)45 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3 线性关系的考察 精密称取丹皮酚对照品2.55 mg，置25 m l量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。精密吸取此溶液2 m l，置10m l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得丹皮酚对照品溶液(浓度为0.0204 mg/ml)。精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、25 μl(相当于浓度为 0.0102、0.0204、0.0306、0.0408、0.0510 mg/ml)，分别注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量x(g)为横座标，进样峰面积值Y(mv.s)为纵座标，绘制标准曲线，结果Y=81732x-4853.08，r=0.9999。表明丹皮酚在 0.0102～0.0510 mg/m l范围内具有良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10μl，重复进样6次，测定，记录峰面积，求得相对标准偏差 RSD为0.41%，结果说明仪器的精密度较好。

2.5 重现性试验 称取样品6份(批号:1008261)，每份1 g，精密称定，按供试品溶液制备方法操作，依法进样测定，计算含量，求得相对标准偏差RSD为1.56%，结果表明，本法测定具有良好的重现性。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，在室温下，分别于配制后0、2、4、6 h进行丹皮酚峰面积测定，每次进样 10μl，测得供试品溶液于6 h内的峰面积平均值RSD为1.79%，结果表明供试品溶液在6 h内稳定。

2.7 专属性试验 精密称取缺牡丹皮的阴性对照样品，按供试品溶液制备方法操作，依法测定，记录色谱图，结果见图3。对比图1、2、3，当归养血丸供试品在与丹皮酚对照品在相同保留时间处有色谱峰，而阴性对照样品在与丹皮酚对照品相同保留时间处无色谱峰。表明样品中无干扰丹皮酚检测的成分存在。方法的专属性强。

2.8 回收率试验 采用加样回收法，称取已知含量的同一批当归养血丸(批号:1008261;丹皮酚含量为0.513 mg/g)0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液，按照供试品溶液制备方法制备。按正文方法，进样，测定，计算，求得丹皮酚平均回收率为99.12%，RSD=2.88%，结果见表1。结果表明，本法回收率较好，方法可行。

2.9 样品测定 精密称取当归养血丸(批号:1008261、1008271、1008281)，照供试品溶液制备方法制备，分别精密吸取供试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，计算样品中丹皮酚的含量。结果见表2。

图1 丹皮酚对照品的HPLC图谱

图2 当归养血丸样品的HPLC图谱

图3 当归养血丸阴性样品的HPLC图谱

表1 丹皮酚回收率试验

表2 样品含量测定(n=3)

3 讨论

中国药典当归养血丸所载丹皮酚的薄层鉴别方法，我们在操作时发现有斑点不明显的情况出现。需要通过增大点样量或者对薄层板加热才使显色斑点变清晰。因此，作者是薄层鉴别检出限较高所致。此外薄层鉴别不能定量。如果改用高效液相色谱法，则可对产品质量有较客观的判断，同时也解决了该标准没有含量测定方法的缺陷。通过上述实验结果，我们认为该方法简便，准确，可用于当归养血丸的质量控制。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版社，2010:688.

Determ ination of Paeonol in Danggui Yangxue pills by HPLC

CHEN Yu-xiu，ZHANGSheng．Pharmic Secondary School of Hunan Province，Hunan，410014，China

ObjectiveTo establish a HPLC method for determining the paeonol content in Danggui Yangxue Pills.M ethods HPLC was used to detect Paeonol in Danggui Yangxue pills with C18column.The mobile phase consisted ofmethanol-H2O(70∶30).The flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 25℃.The detecting wavelength was at274 nm.ResultsThemethod was linear at the range of0.0102～0.0510 mg/m l for Paeonol(r=0.9999).The average recovery ratewas99.12%，RSD=2.8%，n=9).ConclusionThe method is convenient and accurate，which can be applied to the content determination of paeonol and the quality control of Danggui Yangxue pills.

Danggui Yangxue pills;Paeonol;HPLC

410014 湖南省医药中等专业学校(陈玉秀);湖南湘雅制药有限公司(张胜)