TOPⅡ表达与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系分析

张颖，郭杨，阎雪晶，郭阿垚，魏敏杰，金锋

（中国医科大学1.附属第一医院乳腺外科；2.第95期临床医学七年制；3.药学院药理教研室，沈阳 110001）

TOPⅡ表达与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系分析

张颖1，郭杨1，阎雪晶2，郭阿垚1，魏敏杰3，金锋1

（中国医科大学1.附属第一医院乳腺外科；2.第95期临床医学七年制；3.药学院药理教研室，沈阳 110001）

目的探讨乳腺癌新辅助化疗方案疗效及与化疗前后TOPⅡ表达的关系。方法 采用免疫组化方法检测乳腺癌患者（73例）新辅助化疗前后乳腺癌组织中TOPⅡ的表达，了解其与化疗方案及疗效的关系。结果 TOPⅡ的表达与疗效相关（P=0.015），TOPⅡ阳性表达患者对蒽环类药物敏感（P=0.005），多西他赛类药物疗效与TOPⅡ表达无相关性（P=0.495）。化疗前后TOPⅡ表达差异具有统计学意义（P=0.027），阳转阴者中获得pCR为35.3%，阴转阳或无变化者获得pCR为9.1%，两者比较差异具有统计学意义（P=0.017）。结论TOPⅡ阳性表达者对蒽环类化疗方案敏感，TOPⅡ可能成为预测疗效的指标，化疗后TOPⅡ表达由阳转阴者获得较好的病理缓解，TOPⅡ可能成为指导术后化疗方案选择的指标之一。

乳腺癌；新辅助化疗；蒽环类；多西他赛；TOPⅡ

乳腺癌新辅助化疗是较好的疗效预测模型，寻找能准确预测化疗效果的生物学标志物对指导临床选择个体化治疗方案非常重要。NSABP-B18实验显示病理完全缓解（pathologic complete remission，pCR）对于乳腺癌新辅助化疗患者是一个预后因子［1］。一些随机的临床试验数据报道乳腺癌新辅助化疗达到pCR概率为4%～34%［1，2］。为了获得高pCR率，寻找一个新的能够预测新辅助化疗疗效的生物学指标显得尤为重要。TOPⅡ可能是蒽环类药物的潜在作用靶点，也可能成为预测蒽环类化疗疗效的有效指标［3］。我们通过分析73例患者新辅助化疗前后TOPⅡ蛋白表达情况，来探讨其表达与化疗方案及疗效的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取中国医科大学附属第一医院乳腺外科2005年8月至2010年9月收治的乳腺癌患者73例。所有患者均为女性，年龄25～68岁，中位年龄52岁。T2期42例，T3期27例，T4期4例。浸润性导管癌72例，浸润性小叶癌1例。肿瘤最大径≥3cm，治疗前行双乳彩超及X线检查，并且粗芯针穿刺明确病理诊断。

1.2 化疗方案

用4周期的多西他赛联合铂类或CEF方案作为新辅助化疗方案，具体用药：表柔比星60mg/m2，d1，静滴；或多西他赛75mg/m2联合铂类150mg，d1，静滴，21d为1个周期。4周期化疗结束后休息2周行手术治疗。化疗期间给予抗肿瘤支持治疗。化疗方案依据患者病理情况、身体情况、药物毒副反应、经济条件以及经患者同意后而确定。

1.3 疗效评价标准

疗效按WHO制定的统一标准分为完全缓解（complete remission，CR）、部分缓解（partial remission，PR）、无变化（stable disease，SD）和进展（progressive disease，PD）。完全缓解又分为病理完全缓解（pathologic complete remission，pCR），临床完全缓解（clinical complete remission，cCR）。pCR定义为原发肿瘤及区域淋巴结均无残留浸润性癌细胞，其中残留原位癌也包括在pCR组。总有效率包括完全缓解和部分缓解。

化疗前及化疗4周后均由高年资临床医师和超声医师根据病灶临床反映及B超测量肿瘤大小来评定疗效。

1.4 试剂与检测方法

鼠抗人TOPⅡ单抗、免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。治疗前粗芯针穿刺以及手术切除的乳腺肿瘤组织，4%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片，脱蜡水化，3%H2O2室温孵育10min以阻断内源性过氧化物酶；PBS洗3min×3，于pH 6.0的柠檬酸缓冲液中微波修复15min，室温冷却20min；以非免疫动物血清封闭10min，PBS洗 3min×3，加一抗室温（24℃）孵育 1h，PBS冲洗 3min×3，加生物素标记的二抗，室温（24℃）10min，PBS冲洗，用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素复合物孵育10min，PBS冲洗，DAB染色，苏木素复染，脱水，透明，封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，用试剂盒已知阳性片作阳性对照。

1.5 免疫组化结果判定

TOPⅡ阳性表达主要见于细胞核，呈清晰棕黄色或黄色弥漫性分布。由两位病理医师在不知患者临床和病理资料的情况下对免疫组织化学染色结果进行评定。每张切片随机观察10个高倍视野，核呈棕黄色的细胞数≥10%，定为TOPⅡ表达（+）；<10%定为 TOPⅡ表达（-）。

雌激素受体（estrogen receptor，ER），孕激素受体（progesterone receptor，PR），人类表皮生长因子受体2（CerbB-2）依据来自本院病理科病理报告。

1.6 统计学处理

用SPSS 10.0统计学软件进行χ2检验或Fisher精确检验法分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TOPⅡ表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系

TOPⅡ在乳腺癌中的阳性表达率为57.5%（42/73），其表达状况的分布与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移以及激素受体状态等临床病理变量无关（P>0.05，表1）。

表1T O P I I表达与乳腺癌临床病理特征之间的关系T a b.1T h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nT O P I I e x p r e s s i o na n dc l i n i c a l f e a t u r e s f o r b r e a s t c a n c e r Parameter χ2 P TOPⅡexpression+－Year≤50 19 20 2.664 0.103＞50 23 11Node Non-metastasis 15 11 0.009 0.923Metastasis 26 20Tumor T2 25 17 0.204 0.903T3 15 12T4 2 2ER+16 12 0.003 0.957－26 19PR+20 11 1.075 0.300－22 20CerbB-2+or－ 31 19 1.295 0.255++～+++ 11 12

2.2 新辅助化疗疗效

73例患者中化疗总有效率67.1%，其中cCR占9.6%（7/73），PR 占 57.5%（42/73），SD 占 31.5%（23/73），PD占 1.4%（1/73），术后病理确诊为 pCR仅11例（15.1%）。

2.3 TOPⅡ表达与化疗疗效的关系

在TOPⅡ阳性表达者中78.6%（33/42）获得cCR或PR，高于TOPⅡ阴性表达者［51.6%（16/31）］，差异有统计学意义（χ2=5.874，P=0.015）。提示TOPⅡ的表达情况与化疗疗效具有相关性，TOPⅡ阳性表达患者对新辅助化疗较敏感。73例患者中有36例应用蒽环类药物进行化疗，其中22例TOPⅡ阳性表达者中有18例（81.8%）获得cCR或PR，14例TOPⅡ阴性者中有5例（35.7%）获得cCR或PR，差异有统计学意义（P=0.011），提示TOPⅡ阳性表达患者对蒽环类药物敏感。另外37例患者选用多西他赛药类物治疗，其中20例TOPⅡ阳性表达者中有15例（75%）获得cCR或PR，17例TOPⅡ阴性者中有11例（64.7%）获得cCR或PR，差异无统计学意义（χ2=0.466，P=0.719）。

2.4 化疗前后TOPⅡ表达的改变

化疗前TOPⅡ阳性表达41例，阴性表达31例，经化疗后TOPⅡ表达由阳性转为阴性17例，阴性转为阳性10例，化疗前后TOPⅡ表达情况的差异具有统计学意义（χ2=4.891，P=0.027）。另外进一步分析阳转阴者中获得pCR为35.3%（6/17），阴转阳或无变化者获得pCR为9.1%（5/55），两者比较差异具有统计学意义（P=0.017）。

3 讨论

TOPⅡ为催化拓扑结构改变的酶系，参与DNA的转录、翻译、复制及染色体分离等过程。化疗药物主要通过与TOPⅡ结合而造成DNA复制及转录异常，阻碍肿瘤细胞的增殖，是肿瘤化疗药物作用的主要靶酶。本实验结果提示TOPⅡ阳性表达者对化疗敏感（P<0.05），应用蒽环类的TOPⅡ阳性表达患者对化疗更为敏感（P<0.05），与应用多西他赛组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 Durbecq等［4］应用蒽环类或紫杉类治疗108例乳腺癌的回顾性分析发现，TOPⅡ蛋白表达对用蒽环类方案的疗效有预测价值，但对紫杉类方案的化疗无预测价值，由此推测TOPⅡ可能成为预测蒽环类化疗方案疗效的生物学指标之一。另外本实验结果提示化疗前后TOPⅡ蛋白表达改变，化疗后TOPⅡ由阳转阴者获得pCR有效率高于阴转阳或者无变化者，其中7名患者（63.6%）应用蒽环类药物治疗。现有文献报道经蒽环类药物新辅助化疗后TOPⅡ表达由阳转阴的患者能获得较好的病理缓解［5］。应用化疗药物后，肿瘤大小变化不同，说明肿瘤对药物不敏感或耐药，许多肿瘤产生耐药的生物学基础取决于肿瘤多药耐药基因的扩增，在肿瘤组织中产生GST-Pi、TOPO-Ⅱ和Pgp的含量升高，则对抗癌药物产生耐药性［6］。由此推测TOPⅡ阳转阴的患者更易获得pCR，TOPⅡ可能成为指导术后化疗方案选择的指标之一。

化疗前后患者TOPⅡ表达的改变可能是由于治疗过程中药物诱导了增殖的肿瘤细胞重新表达受体［8］，另外治疗期间肿瘤细胞的选择性克隆也是一个原因，即受体阳性或者阴性的细胞选择性存活［8］。本实验样本量少，对于所选用的化疗方案存在多种因素影响，并不能断言TOPⅡ可以作为预测蒽环类药物化疗疗效的预测指标，准确的数据需要大样本、多中心、随机的临床试验来进一步验证。

目前有研究表示TOPⅡ基因扩增以及缺失的患者应用蒽环类药物辅助治疗，可以改善疗效［9］，Kawachi等［5］研究认为 TOPⅡ/CEP17的比值也许会对乳腺癌蒽环类新辅助化疗疗效预测起到作用，成为一个预测因子。这为我们日后研究提供方向［10］，可能会获得更准确更有意义的结果，得到可靠的预测指标。

［1］Wolmark N，Wang J，Mamounas E，et al.Preoperative chemotherapy in patients with operable breast cancer：nine-year results from National Surgical Adjuvant Breast and Bowel Project B-18［J］.Natl Cancer lnst Monogr，2001，2001（30）：96－102.

［2］ Charfare H，Limongelli S，Purushotham AD，et al.Neoadjuvant chemotherapy in breast cancer［J］.Br J Surg，2005，92（1）：14－23.

［3］Konecny GE，Pauletti G，Untch M，et al.Association between HER2，TOP2A，and response to anthracycline-based preo perative chemotherapy in high-risk primary breast cancer［J］.Breast Cancer Res Treat，2010，120（2）：481－489.

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［5］Kawachi K，Sasaki T，Murakami A，et al.The topoisomerase II alpha gene status in primary breast cancer is a predictive marker of the response to anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy［J］.Pathol Res Pract，2010，206（3）：156－162.

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［9］Brase JC，Schmidt M，Fischbach T，et al.ERBB2and TOP2A in breast cancer：a comprehensive analysis of gene amplification，RNA levels，and protein expression and their influence on prognosis and prediction［J］.Clin Cancer Res，2010，16（8）：2391－2401.

［10］Tinari N，Lattanzio R，Natoli C，et al.Changes of topoisomerase II alpha expression in breast tumors after neoadjuvant chemotherapy predicts relapse-free survival［J］.Clin Cancer Res，2006，12（5）：1501－1506.

（编辑武玉欣，英文编辑刘宝林）

The Relationship of TOPⅡExpression and Neoadjuvant Chemotherapy in Breast Cancer

ZHANG Ying1，GUO Yang1，YAN Xue-jing2，GUO A-yao1，WEI Min-jei3，JIN Feng1
（1.Department of Breast Surgery,The First hospital,China Medical University,Shenyang 110001,China；2.The 95th Class，7-year System，Clinical Medicine，China Medical University,Shenyang 110001,China；3.Department of Pharmacology，China Medical University,Shenyang 110001,China）

ObjectiveTo investigate the relationship between expression of TOPⅡ and response of neoadjuvant chemotherapy in breast cancer.MethodsCore biopsy samples were obtained for assay of TOPⅡ expression before the chemotherapy and surgery.The TOPⅡ status was examined using immunohistochemistry（IHC）in 73pairs of pre-and post-chemotherapeutic breast cancer tissues.ResultsTOPⅡpositive expression showed a correlation with anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy response（P=0.005）.On the other hand,the difference between pre-operative and post-operative TOPⅡ expression was statistically significant（P=0.027）.The reduction of the TOPⅡ-positive cells correlated with a better pathological response to the neoadjuvant chemotherapy（P=0.017）.ConclusionThe results thus suggest that in breast cancer TOPⅡmay be a useful predictor of the effects of anthracycline-based neoadjuvant chemotherapy and guiding the choice of post-operative chemotherapy.

breast cancer；neoadjuvant chemotherapy；anthracycline；duoxitasai；topoisomerase Ⅱ

R737.9

A

0258-4646（2011）05-0462-03

doiCNKI：21-1227/R.20110523.1815.018

http：//www.cnki.net/kcms/detail/21.1227.R.20110523.1815.018.html

张颖（1983-）,女，硕士研究生.

金锋，E-mail：jinfeng66cn@hotmail.com

2010-11-22

网络出版时间：2011-05-1815：25