HPLC测定白芷药材中欧前胡素与异欧前胡素的含量

王云龙，杨立志，姜雪敏，许世伟，邵礼梅

鸡西市药品检验所，黑龙江鸡西 158100

白芷收载于《中国药典》2010年版一部，来源为伞形科植物白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan的干燥根。性温味辛，归胃、大肠、肺经。具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻渊、牙痛、白带、疮疡肿痛。《中国药典》2010年版一部[1]仅对白芷中欧前胡素进行了含量测定，文献报道[2-3]的方法虽对两种成分同时进行含量测定，但前处理方法繁琐。本文采用高效液相色谱法同时测定白芷药材中欧前胡素与异欧前胡素的含量，方法简便、快速、专属性强、分离度高，可作为白芷药材的质量控制方法。

1 仪器与试药

HP1100高效液相色谱仪，配置四元泵、紫外检测器、自动进样器、柱温箱、HP Chemstation色谱工作站；AG285电子分析天平、欧前胡素与异欧前胡素为中国药品生物制品检定所提供，水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯。白芷药材购于药店。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），检测波长：280 nm，流动相：甲醇-水（70∶30），流速：1 ml/min，柱温：35℃，进样量 20 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取欧前胡素与异欧前胡素9.48 mg、15.00 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品1粉末（过三号筛）约1.0 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇45 ml，超声处理（功率300 W，频率50 Hz）30 min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性关系考察

精密吸取欧前胡素和异欧前胡素的对照品混合溶液0.5、1.5、2.5、3.5、4.5 ml， 置 10 ml量瓶中， 用甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，注入液相色谱仪，记录峰面积，以浓度为横坐标X（μg/ml），相应成分峰面积为纵坐标Y，进行线性回归，欧前胡素0.094 8～0.853 2 μg/ml内具有良好的线性关系，回归方程为 Y=4.003×103X+16.5，r=0.999 6；异欧前胡素在0.150 0～1.350 0 μg/ml内具有良好的线性关系，回归方程为 Y=4.242×103X+16.917，r=0.999 8。

2.4 精密度试验

按上述色谱条件，以对照品混合溶液连续进样5次，以峰面积计算，欧前胡素的RSD=0.3%，异欧前胡素的RSD=0.5%。

2.5 稳定性试验

取供试品溶液，在室温下放置，按上述色谱条件，分别在0、2、4、6、8 h 测定，以峰面积计算，欧前胡素的 RSD=0.4%，异欧前胡素的RSD=0.8%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.6 重复性试验

同一批白芷，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液5份，在上述色谱条件下测定，测得欧前胡素的RSD=1.8%，异欧前胡素的RSD=1.7%。

2.7 回收率试验

取已知含量的供试品5份，每份0.5 g，精密称定，置5个25 ml量瓶中，分别精密加入上述对照品溶液5 ml，加甲醇稀释至刻度，在上述色谱条件下测定，计算回收率，欧前胡素的平均回收率为98.0%，RSD=1.0%；异欧前胡素的平均回收率为99.0%，RSD=0.5%，结果见表1。

表1 欧前胡素与异欧前胡素的加样回收试验结果（n=5）

2.8 样品的测定

取5批供试品，按“2.2.2”制备供试品溶液，在上述色谱条件下测定，结果见表2，典型色谱图如图1所示。

表2 白芷中欧前胡素与异欧前胡素的含量测定结果

3 讨论

3.1 提取方法的选择

本研究比较了超声提取法与回流提取法对欧前胡素与异欧前胡素提取率的影响，回流提取与超声提取无明显差异，因超声法简便，故采用超声提取法。

3.2 色谱条件的选择

对流动相甲醇-水的比例进行的考察结果表明，甲醇-水（80∶20）时，欧前胡素、异欧前胡素与其他组分分离效果不好；甲醇-水（50∶50）时，洗脱时间较长。 故选择甲醇-水（70∶30）作为流动相，分离度良好，保留时间适宜。柱温分别考察了25℃、30℃、35℃，结果表明35℃时柱压较小，分离效果好。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：97-98.

[2]邓捷圆,高广慧,赵春杰,等.HPLC法同时测定不同产地白芷中2种香豆素的含量[J].中草药,2004,33(5)：354-357.

[3]贾敏如,王梦月,金曲嫫,等.HPLC测定13种白芷中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].华西药学杂志,2003,18(5)：361-362.

[4]胡华杰,楼招欢,吕圭源,等.HPLC测定不同产地白芷饮片中欧前胡素和异欧前胡素的含量[J].浙江中医药大学学报,2010,34(3)：418-419.

[5]樊平,孙宁,刘冰,等.HPLC法测定白芷酊中欧前胡素的含量[J].中国药房,2010,21(23)：2179.

[6]张慧,海广泛,尹志奎,等.高效液相色谱法测定不同产地白芷中欧前胡素和异欧前胡素含量[J].新乡医学院学报,2009,26(2)：138-140.