藏药湿生扁蕾提取物的止泻作用及其急性毒性研究

景 明， 罗永皎， 刘喜平， 蔺兴遥

(甘肃中医学院，甘肃兰州730000)

湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.的干燥全草，多生长于甘肃、青海、四川、西藏等藏区林缘草地和高山草地，藏名机合滴，藏医习用。具有清热解毒、健脾止泻等功能，藏医用全草治疗肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、肠胃炎等，用湿生扁蕾制成的颗粒剂对小儿腹泻有显著的疗效［1］。对湿生扁蕾提取物的止泻作用及其急性毒性的研究目前尚未见报道。本实验采用番泻叶诱导的小鼠腹泻模型，以腹泻潜伏期和湿便总数为指标评价湿生扁蕾提取物的止泻作用，同时测定灌胃给药的半数致死量(LD50)，评价湿生扁蕾的急性毒性，为湿生扁蕾的临床用药提供实验依据。

1 材料

1.1 仪器 HWZ10-B微波干燥机(天水华园制药设备有限公司);AR-140电子天平(上海奥豪斯公司);CXT-64-01电动离心机(北京医疗仪器厂);R-200旋转蒸发仪(瑞士布奇)。

1.2 试药 湿生扁蕾药材采自甘肃省甘南藏族自治州临潭县冶力关镇，经甘肃省药品检验所宋平顺主任中药师鉴定为龙胆科植物湿生扁蕾Gentianopsis paludosa(Munro)Ma.的干燥全草。

1.2.1 湿生扁蕾提取物(GTP)的制备 取湿生扁蕾干燥全草，粉碎，过三号筛，称取286 g，加10倍量水煎煮2次，每次1.5 h，滤过，滤液放冷，以3 000 r/min离心分离10 min，上清液备用;药渣加10倍量95%乙醇回流提取2次，每次1.5 h，滤过，滤液放冷，以3 000 r/min离心分离10 min，上清液减压回收乙醇后与水提液合并，微波干燥，粉碎，用HPLC法［2］测定提取物中含主要成分木犀草素和1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮分别为2.93 mg/g和5.59 mg/g。在给药前将浸膏粉用0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成不同浓度的混悬液作为样品溶液。

1.2.2 番泻叶煎剂的制备 取番泻叶20 g，剪碎，加入200 mL蒸馏水，加热保持微沸5 min，滤过，滤液60℃以下减压浓缩至20 mL，质量浓度为1.0 g/mL。

1.2.3 思密达混悬液的制备 取思密达(博福-益普生天津制药有限公司，批号s0468)2 g，加入10 mL蒸馏水，搅拌使其混合均匀，质量浓度为0.2 g/mL。冰箱冷藏，用时恢复至室温。

1.3 动物 SPF级昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半，由甘肃中医学院科研实验中心提供，实验动物质量合格证SCXK(甘)2004～0006。动物颗粒饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。

2 方法［3-5］与结果

2.1 对番泻叶所致小鼠腹泻的影响 昆明种小鼠50只，雌雄各半，按性别、体质量随机分为模型组，阳性对照组，GTP大、中、小剂量组，每组10只。模型组灌胃等容量生理盐水，阳性对照组灌胃给予思密达混悬液(5 g/kg)，GTP大、中、小剂量组分别灌胃1.8 g/kg、0.90 g/kg、0.45 g/kg。给药体积均为0.2 mL/10 g体质量。30 min后分别灌胃给予番泻叶煎剂(1 g/mL，0.2 mL/10 g体质量)。将小鼠单个罩于钢丝网上，网下垫上滤纸，每隔1 h换垫纸，记录小鼠腹泻潜伏期以及6 h内的湿粪总数。GTP各剂量组对番泻叶所致的小鼠腹泻有明显的对抗作用，表现在使腹泻潜伏期延长和在相同时间内累积腹泻次数减少，而且有一定的量效关系。结果见表1。

表1 GTP对番泻叶所致小鼠腹泻的影响(±s，n=10)

表1 GTP对番泻叶所致小鼠腹泻的影响(±s，n=10)

注:与模型组比较，﹡ P＜0.05，﹡﹡P ＜0.01。

组 别 剂量/(g/kg)腹泻潜伏期/min 湿便总数/个模型对照 —116.00±18.88 6.66±1.22 GTP低剂量 0.45 123.56±19.88 5.78±1.27 GTP中剂量 0.90 150.78±24.19﹡ 4.22±1.32﹡GTP高剂量 1.80 154.44±49.37﹡﹡ 1.66±1.45﹡阳性对照 5.0 190.67±21.05﹡﹡ 0.88±0.73﹡﹡

2.2 半数致死量(LD50)测定 取小鼠50只，随机分成5组，雌雄各半，给药前禁食，不禁水，各组小鼠灌胃给予不同质量分数的GTP 2次，间隔时间为6 h，给药后自由饮水，连续观察14 d。给药后的第2天，各组小鼠均表现为萎靡、竖毛、拱背、懒动、厌食，第4、5组小鼠均出现不同程度的腹泻、便血、呼吸困难等症状，第5组有一只小鼠死亡;第3天，第1、2、3组小鼠均出现不同程度的腹泻、便血、呼吸困难等症状，第3、4组各有一只小鼠死亡;第4天，第2组有一只小鼠死亡。用Bliss法计算LD50及95%的可信限，GTP小鼠灌胃给药的 LD50为127.4 g/kg，其95%的可信限为(116.6～139.4)g/kg。结果见表2。

表2 小鼠灌胃GTP的死亡率

3 讨论

本实验结果表明，湿生扁蕾提取物对番泻叶所致的小鼠腹泻有明显的对抗作用。表现在腹泻潜伏期延长和在相同时间内累积腹泻次数减少。LD50为127.4 g/kg，其95%的可信限为(116.6～139.4)g/kg。湿生扁蕾提取物有一定毒性，但毒性较低，表明浸膏口服安全可靠，为湿生扁蕾的开发提供了一定的理论依据。

［1］米 琴，曹长年，王慧春，等.湿生扁蕾有效成分抑菌活性的测定［J］.青海大学学报:自然科学版，2004，22(2):84.

［2］景 明，李季文，樊 秦，等.HPLC测定湿生扁蕾中木犀草素和 1，7-二羟基-3，8-二甲氧基酮的含量［J］.中国中医药信息杂志，2008，15(3):43.

［3］陈 琦.中药药效研究思路与方法［M］.北京:人民卫生出版社，2005:427.

［4］王丽娟，张明春，闫 超，等.酸枣仁提取物急性毒性实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20(7):1610.

［5］楼宜嘉主编.药物毒理学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2008:176.