喉咽清口服液中蜕皮甾酮测定法的改进

何选林， 王群英

(湖南省永州市药品检验所，湖南永州425100)

喉咽清口服液主要由土牛膝、马兰草、车前草、天名精等中药组成，辅料为蔗糖、防腐剂，具有清热解毒、利咽止痛的作用［1］。土牛膝中含有黄酮苷、氨基酸、有机酸、酚类、挥发油及生物碱等成分［2］，《中国药典》2010版一部该品种采用高效液相色谱法测定喉咽清口服液中蜕皮甾酮，该方法提取时杂质太多，影响蜕皮甾酮的分离，导致测定的含量偏低，本实验修改了提取的溶剂，该法简单、快速、结果直观。并通过生产厂家提供的6批样品进行了比较。结果表明改进法准确有效。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱系统1525泵，2996紫外检测器(美国)，Empowers工作站。蜕皮甾酮对照品(中国药品生物制品检定所，批号11638-200402)，喉咽清口服液样品(规格每支10 mL，为某公司生产的6批产品080605、080607、080608、080704、080706、080801);乙腈为色谱纯、重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(20 ∶80)为流动相;检测波长为 248 nm;柱温 室温，进样量 20 μL。在此条件下［3］67，［4-9］，色谱图见图1，蜕皮甾酮的保留时间为7.8 min，理论塔板数按蜕皮甾酮计算为6 800。

图1 高效液相色谱图

2.2 对照品溶液制备 精密称取蜕皮甾酮对照品30 mg，置50 mL的量瓶中，加乙醇适量，振摇使蜕皮甾酮溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品25 mL，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备 精密称取处方中除土牛膝的细粉(约相当于蜕皮甾酮3 mg)，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察 精密量取对照品溶液贮备液1、2、3、5、10 mL溶液分别置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，注入液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，求得回归方程:Y=7 680.2+674 256.4X，r=0.999 96，结果表明，当进样量为 20 μL 时，蜕皮甾酮在12～120 μg/mL质量浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.6 精密度考察 取2.2项下质量浓度为60 μg/mL的对照品溶液，依法测定，记录连续5次的峰面积，RSD为0.98%。

2.7 重复性试验 取同份样品按2.11项测定蜕皮甾酮5次，含蜕皮甾酮质量浓度为62.4 μg/mL，RSD为0.66%;结果表明重复性好。

2.8 稳定性试验 取同份样品分别在0、4、8、12、16 h测定蜕皮甾酮，质量浓度为59 μg/mL，RSD为0.61%;结果表明稳定性好。

2.9 阴性对照试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按本实验条件进样为20 μL，色谱图见图1，在本实验条件下阴性对照无干扰。

2.10 回收率试验 精密称取已测定的同一批样品9份，分别精密加入对照品适量，按2.3项制备样品，依法测定回收率，结果见表1。

表1 样品的回收率测定结果

2.11 样品测定 取本品25 mL，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。分别吸取供试品溶液与对照品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图见图1B，按外标法以峰面积计算质量浓度与法定方法质量浓度［3］1159比较结果见表2。

表2 样品测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 色谱条件的选择 本实验选用了较为常用的C18柱和以乙腈-水(20∶80)为流动相;检测波长为248 nm，得到良好的分离效果，且配置简单。

3.2 检测波长 经紫外扫描蜕皮甾酮在247.6 nm处有最大吸收故选择在248 nm测定。

3.3 溶剂的选择 本测定，先采用法定方法只用乙醇稀释，测定分离不太好，后采用甲醇、50%甲醇、50%乙醇及本法采用正丁醇提取，乙醇溶解。经试验，本实验配制的溶液在16 h内进样并无任何变化且分离好。

3.4 检测浓度 根据线性范围的计算，本实验选择了60 μg/mL，在此质量浓度条件下定量测定。

［1］国家食品药品监督管理局.WS3-036(Z-009)-2005(Z)咽清口服液质量标准［S］.2005.

［2］张丹雁.广东土牛膝化学成分的初步研究［J］.中国民族民间医药杂志，1999，(4):232-234.

［3］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［4］刘志刚，邓伟杰，孙维峰，等.HPLC测定泄浊除痹方中薯蓣皂苷元、蜕皮甾酮含量［J］.中成药，2010，32(2):243-246.

［5］张翠英，梁生旺，张广强.不同产地牛膝中蜕皮甾酮的含量测定［J］. 中国药学杂志，2001，36(10):699-700.

［6］宋闫军，尚聪敏.牛膝及三妙丸中脱皮甾酮的薄层扫描测定［J］.河南中医药学刊，2000，15(6):9-10.

［7］张 英，韦 异，粟 晖，等.超声提取反相高效液相色谱法测定牛膝中蜕皮甾酮［J］.光谱实验室，2002，19(5):668-671.

［8］李文莉，汪文涛，雷玉萍，等.RP-HPLC测定脉络宁注射液中蜕皮甾酮的含量［J］.华西药学杂志，2001，(16):382-383.

［9］刘 姣，周亚球，彭超怀.怀牛膝蜕皮甾酮的含量测定［J］.安徽中医学院学报，2005，24(3):43-44.