香附醋炙前后总黄酮含量研究

李英霞， 韩 莉， 藏 晔， 武玉婷

(1.山东省中医药研究院，山东 济南250014;2.淄博市中心医院，山东淄博25500)

香附异名莎草根、香附子，是中医常用的中药之一，尤其在妇科用药中使用广泛，《本草纲目》称之为“气病之总司，女科之主帅”［1］。其植物来源为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎，味辛、微苦、性甘、平。能理气解郁，调经止痛。治疗肝郁气滞，胸肋胀痛，消化不良，月经不调，经闭育经之症［2］。香附历代炮制方法甚多，目前临床常用的炮制饮片多为醋炙香附，2010版《中国药典》只收载了醋香附一种炮制规格［3］。香附中主要化学成分有挥发油类、三萜类、生物碱类、黄酮类、甾醇类等［4-5］。以往香附炮制方面的研究多侧重于挥发性成分，如炮制对挥发油及α-香附酮含量的影响等［6-10］，对其它化学成分影响研究尚未见报道。近年来，对香附非挥发性成分的研究逐渐得到重视，国外报道香附总黄酮和乙酸乙酯提取物或水醇提取物均具有较强的药理活性［11-12］。本研究采用紫外分光光度法，对醋炙前后香附饮片中总黄酮的含量进行了测定，旨在全面探讨香附炮制的目的，为揭示香附炮制的科学内涵提供理论依据。

1 仪器与材料

UV-265FW紫外可见分光光度计(日本岛津)，XS205DU电子天平(上海梅特勒—托里多仪器有限公司)。芦丁对照品(购于中国药品生物制品检定所，批号10008-200306，供含量测定用)。香附药材购于山东泰安、潍坊及浙江、河南等7个产地，经山东省中医药研究院李英霞副研究员鉴定为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎。龙门米醋(北京王致和味滋康食品有限公司)，总酸≥3.95 g/100 mL。其余试剂均为分析纯。

2 炮制方法

生品香附:取香附药材，除去杂质，以水浸润后，切片，干燥。

醋炙香附:取香附切片适量，加米醋拌匀，润闷1 h至吸尽，置锅中文火炒至微带焦斑，取出，摊晾。

3 含量测定

采用紫外分光光度法对香附醋炙前后总黄酮含量进行了测定。

3.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品适量，置100 mL量瓶中，加95%的乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL含0.100 mg的对照品溶液。

3.2 供试品溶液的制备 取香附粉末1 g，精密称定，置三角瓶中，加70%乙醇25 mL，80℃水浴回流提取2次，每次2 h，放冷，过滤，滤液合并，减压回收乙醇，分别以石油醚(30℃ ～60℃)萃取以除去挥发油，再以乙酸乙酯萃取6次(15、15、15、15、10、10 mL)，减压回收乙酸乙酯，残渣以 70% 乙醇溶解，定容于10 mL量瓶中，作为供试品溶液。

3.3 波长的选择 取对照品溶液2 mL，供试品溶液2 mL，在5%亚硝酸钠溶液0.3 mL存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液，在400～600 nm波长范围内扫描，结果对照品与样品均在507 nm左右有最大吸收，故确定测定波长为507 nm。

3.4 线性关系考察 精密量取芦丁对照液(质量分数为0.100 mg/mL)0.3、0.5、3、6、9、12、15 mL 分别置于 10 mL 量瓶中，分别加5%亚硝酸钠0.3 mL，摇匀，静置6 min，再加10%的硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min，再加4%的氢氧化钠4 mL，用水稀释至刻度，摇匀，静置12 min。以试剂作为空白参比液，于507 nm波长处测吸光度。以浓度(C)为横坐标，以吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归分析，得回归方程为:A=0.084 7C-0.004 8，相关系数r=0.999 8。结果表明，芦丁在3.0 μg/mL ～150.0 μg/mL 范围内线性关系良好。

3.5 精密度、稳定性、重复性试验及回收率试验 详见有关文献［13］。

3.6 样品测定 取香附粉末1 g，精密称定，按3.2项下方法制备样品溶液，按3.1项下方法制备对照品溶液，精密吸取0.5 mL供试品溶液于10 mL量瓶中，加显色剂显色，以试剂为空白参比液，于507 nm处测定吸光度，计算含量。结果见表1。

表1 不同地区生品香附与醋炙香附总黄酮含量测定结果(n=3)

(续表1)

4 讨论

4.1 在测定香附总黄酮过程中，发现挥发油对测定有一定影响，未去除挥发油的溶液加亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠显色时，会产生红色絮状沉淀，影响吸光度的测定。作者对比了两种去除挥发油方法的显色效果，即先以石油醚索式提取脱除和以石油醚萃取去除，结果两种方法效果基本一致，故选取了后一种去除方法。

4.2 不同产地香附生品和醋炙品中总黄酮含量均较高，其中河南社旗的最高，生品为2.33%，醋炙品为2.64%。大多数地区含量在1.00%以上。

4.3 各地香附经醋炙后总黄酮含量均明显升高，按炮制后收率计算，多数升高率在12.45% ～19.84%，说明醋炙能增加香附有效部位总黄酮的溶出。本研究从非挥发性成分方面为探讨香附醋炙的目的提供了一定参考。

［1］明·李时珍.本草纲目［M］.北京:人民卫生出版社，1982:888-894.

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［3］中国药典［S］.一部.2010:241-242.

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［13］李英霞，刘春农，张 泰，等.不同地区市售香附饮片中总黄酮含量测定［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16(14):73-75.