超微藿香正气散对急性腹泻大鼠肠黏膜保护及水电解质的调节作用研究

罗尧岳 ，龙景文 ，王宇星 ，谢谨光 ，邓宁昆 ，伍参荣 ，李 雅

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙410007；2.湖南中医药大学湘杏学院2007级中西医临床医学班，湖南 长沙 410007）

超微藿香正气散对急性腹泻大鼠肠黏膜保护及水电解质的调节作用研究

罗尧岳1，龙景文2，王宇星2，谢谨光2，邓宁昆2，伍参荣1，李 雅1

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙410007；2.湖南中医药大学湘杏学院2007级中西医临床医学班，湖南 长沙 410007）

目的 探讨超微藿香正气散对急性腹泻大鼠肠黏膜保护和水电解质的调节作用。方法 50只大鼠随机分为空白组、模型组、超微粉组、细粉组、口服液组。采用番泻叶煎液加寒冷刺激灌胃复制大鼠急性腹泻模型，观察大鼠腹泻次数、粪便含水量的变化，用光镜观察大鼠结肠HE染色黏膜形态学变化，电极法检测血清K+、Na+、Cl-浓度，酶联免疫法检测血浆环磷酸腺苷（cAMP）水平。结果 模型组大鼠腹泻次数、粪便含水量明显增加，血浆Na+、K+浓度降低、Cl-浓度升高，血浆cAMP水平升高，超微粉、细粉、口服液组与模型组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；超微粉组与细粉组比较，在降低大鼠腹泻次数、粪便含水量，升高血浆Na+、K+浓度，降低血浆Cl-浓度、cAMP水平方面差异有统计学意义(P<0.05)；超微粉组与口服液组比较，在降低大鼠腹泻次数方面差异有统计学意义(P<0.05)。结论 超微藿香正气散能调节急性腹泻大鼠水电解质平衡，降低血浆cAMP水平，对肠黏膜有保护作用，其作用优于藿香正气散细粉。

藿香正气散；超微颗粒；腹泻；肠黏膜；水电解质；大鼠；藿香；白芷；紫苏；大腹皮

藿香正气散出自《太平惠民和剂局方》，由藿香、白芷、茯苓、大腹皮、半夏曲、桔梗、甘草、紫苏叶、陈皮、厚朴、白术、生姜、大枣等13味组成。具有解表化湿，理气和中的作用。广泛运用于治疗急性腹泻、胃肠疾病、四时感冒等病症。本研究采用粉体工程工艺对中药实施细胞破壁加工而成的超微藿香正气散，探讨其对急性腹泻大鼠肠黏膜保护和水电解质的调节作用，现将实验方法及结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 采用SD大鼠清洁级，体质量200～220 g，雌雄各半，湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物合格证号：SCXK（湘）2009-004。

1.1.2 药物 藿香正气散由大腹皮、白芷、紫苏、茯苓各30 g，法夏、白术、陈皮、厚朴、桔梗各60 g，藿香90 g，炙甘草75 g组成。上述药物由湖南中医药大学第一附属医院药剂科一次性购齐中药饮片，制备实验用药。超微粉（粒径平均15.4 μm）、细粉（粒径平均55.8 μm）先加药材10倍体积90℃生姜、大枣煎液，搅拌，静止10 min，再加10倍体积水，2次液混合，浓缩、冷藏备用。藿香正气口服液，太极集团重庆涪陵制药厂有限公司生产，批号：10040268，10 mL/支。

1.1.3 仪器 酶标仪为Sunrise Remote/Touch Screen型，产地：奥地利；Roche Modular pp全自动生化分析仪，产地：德国；光学显微镜motic，产地：厦门。

1.1.4 试剂 大鼠环磷酸腺苷（cAMP）试剂盒，编号：DZE30574，购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠购回后，将大鼠适应性饲养1周，再用随机数字表法随机分为5组：即空白对照组、模型组、超微粉组、细粉组、阳性对照(口服液)组，每组各10只。雄雌各半，单笼饲养。

1.2.2 造模方法 空白组：灌胃生理盐水1 mL/100 g，其余各组灌胃番泻叶浸液1 mL/100 g（含生药1.80 g/kg，相当于临床等效剂量20 g）；空白组灌胃后归笼，其余各组灌胃1 h后，冰水浴30 min，1次/d，共6 d。观察大鼠的粪便情况，超过25%的糊状、水样便，少于25%块状、质地坚硬的便视为造模成功。

1.2.3 给药方法 造模成功后，空白组和模型组给予灌胃生理盐水1 mL/100 g。阳性对照组：灌胃口服液1 mL/100 g（含藿香正气口服液1.80 mL/kg，相当于临床等效剂量20 mL）；超微粉组：灌胃藿香正气超微粉1 mL/100 g（含生药1.61 g/kg，相当于临床等效剂量18 g）；细粉组：灌胃藿香正气细粉1 mL/100 g（含生药1.61 g/kg，相当于临床等效剂量18 g）。1次/d，均灌胃3 d。动物给药剂量按动物与成人（70 kg）表面积比计算。

1.2.4 一般情况及肠黏膜的形态学观察 观察给药后各组大鼠毛发的光泽度及有无脱落，肛周的污秽情况等。最后1次给药5 h后，处死动物，无菌条件下取结肠，用中性甲醛固定。常规石蜡切片，HE染色，光镜观察肠黏膜形态学变化。

1.2.5 大鼠腹泻次数的测定 观察时间：每次给药后的5 h内，记录各组稀便的次数，共观察3 d。干便与稀便的区分：以滤纸上有无污迹为标准。粪便次数以每粒或每堆(不能分清粒数者)为1次。比较各组动物腹泻次数的差异。

1.2.6 粪便含水量的检测 收集各组给药后5 h内的大鼠粪便，称量粪便湿质量，粪便放进烤箱的时间均为15 min，恒温恒压，称干质量，粪便湿质量减去干质量，得到含水量，共观察3 d，取平均值。比较各组大鼠粪便含水量的差异。

1.2.7 血浆Na+、K+、Cl-及cAMP水平检测 在3%戊巴比妥钠(1 mL/kg腹腔注射)麻醉下，分离颈动脉，插入颈动脉导管，经导管取血4 mL，注入抗凝试管中，混匀，3 000 r/min离心10 min分离血浆，分装，-20℃保存。采用电极法检测血浆Na+、K+、Cl-的浓度；采用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血浆cAMP浓度，按试剂盒说明书操作。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 各组大鼠一般情况及肠黏膜的形态学观察

实验结果表明，灌服番泻叶浸液加冰水浴的造模可引起大鼠排稀便次数明显增加，稀便或水样便增加，毛发失去光泽，说明造模成功。给药3 d后，上述表现在各给药组与模型组相比有明显好转。空白组大鼠肠黏膜上皮完整，排列整齐；模型组大鼠肠黏膜上皮不完整，脱落明显，黏膜固有层松散，空泡样改变；超微粉组大鼠肠黏膜上皮基本完整，有轻度脱落；细粉组大鼠肠黏膜上皮部分脱落，染色变浅，肠腔内有脱落细胞；口服液组大鼠肠黏膜上皮部分脱落。见图1。

图1 各组大鼠肠黏膜的形态学变化光镜图（HE染色，10×40）

2.2 各组大鼠腹泻次数的变化

第1天给药后，超微粉、细粉、口服液组与模型组比较大鼠腹泻次数减少，其中超微粉组有统计学差异（P<0.05）；第2天给药后，超微粉、细粉、口服液组与模型组比较大鼠腹泻次数明显减少，差异均有统计学意义（分别为P<0.01、P<0.05、P<0.01）。 第3天给药后，超微粉、细粉、口服液组与模型组比较大鼠腹泻次数明显减少，均差异有统计学意义（P<0.01）；细粉组与超微粉、口服液组比较差异有统计学意义(P<0.01)，超微粉组与口服液组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 各组大鼠腹泻次数的比较 （n=10，）

表1 各组大鼠腹泻次数的比较 （n=10，）

注：与模型组比较△P<0.05，△△P<0.01；与超微组比较*P<0.05，**P<0.01。

组 别空白组模型组超微粉组细粉组口服液组药物剂量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80第1天0 6.4±1.3 5.1±1.2△5.5±0.9 5.5±1.1第2天0 5.3±1.2 3.3±0.8△△4.3±0.7△3.8±0.8△△第3天0 4.2±1.1 1.3±0.5△△3.0±0.7△△**2.0±0.7△△*

2.3 各组大鼠粪便含水量的变化

超微粉、细粉、口服液组与模型组比较，粪便的含水量明显减少（P<0.01）。细粉组与超微粉组、口服液组比较差异均有统计学意义 (分别为P<0.01)。见表2。

表2 各组大鼠粪便含水量的比较 （n=10，）

表2 各组大鼠粪便含水量的比较 （n=10，）

注：与模型组比较△△P<0.01；与超微组比较**P<0.01。

组 别空白组模型组超微粉组微粉组口服液组药物剂量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80干质量（g）19.17±2.77 23.31±1.60 19.86±1.90 20.23±2.62 19.70±1.93湿质量（g）22.14±2.90 36.97±2.39 25.12±1.42 28.28±2.34 25.72±2.55含水量（g）2.97±0.88 13.59±2.51 5.26±1.66△△8.05±1.88△△**6.02±1.47△△

2.4 各组大鼠血浆Na+、K+、Cl-及cAMP水平

超微粉、细粉、口服液组大鼠血浆Na+浓度与模型组比较明显升高，差异有统计学意义（分别为P<0.01、P<0.05），超微粉组与细粉组比较差异有统计学意义（P<0.05）；超微粉、口服液组差异大鼠血浆K+浓度与模型组比较明显升高，差异有统计学意义（分别为 P<0.01、P<0.05），超微粉组与细粉组比较有统计学意义（P<0.05）；超微粉、细粉、口服液组大鼠血浆Cl-浓度与模型组比较明显降低，差异有统计学意义（分别为P<0.01、P<0.05）；超微粉、口服液组大鼠血浆cAMP水平与模型组比较明显降低，差异有统计学意义（分别为P<0.01、P<0.05），超微粉组与细粉组比较差异有统计学意义（P<0.05）。 见表 3。

表 3 各组大鼠血浆 Na+、K+、Cl-及 cAMP 水平的比较 （n=10，）

表 3 各组大鼠血浆 Na+、K+、Cl-及 cAMP 水平的比较 （n=10，）

注：与模型组比较△P<0.05，△△P<0.01；与超微组比较*P<0.05。

组 别空白组模型组超微粉组细粉组口服液组药物剂量（g/kg）— —1.61 1.61 1.80 Na+(mmol/L)143.14±10.36 122.55±9.79 138.83±6.06△△130.53±9.57△*131.11±7.02△K+(mmol/L)7.54±1.25 5.53±1.09 7.07±0.92△△5.88±0.94*6.61±1.15△Cl-(mmol/L)95.58±6.72 124.03±10.53 104.92±13.24△△112.82±14.81△111.34±12.32△cAMP(nmol/L)18.99±2.55 24.23±3.19 19.09±2.47△△22.19±3.11*21.40±2.88△

3 讨论

据国家疾控中心报道，我国每年急性腹泻的发病率高达12%，给人们的健康、经济、生活质量带来严重影响。临床研究表明，藿香正气散治疗急性腹泻具有较好的疗效[1-2]。因此，发挥中医药优势，研究和寻找临床治疗急性腹泻安全、有效、使用方便的中药制剂，具有重要意义。

藿香正气散最初的制剂为散剂，现在临床运用的剂型有多种，如藿香正气丸、藿香正气水、藿香正气液、藿香正气片、藿香正气软胶囊、藿香正气滴丸等剂型，各有其特点和不足（如藿香正气液有吸收快的作用，但所含的酊剂大部分患者不易接受；藿香正气片吸收速度较慢；藿香正气软胶囊、藿香正气滴丸制作工艺较复杂，制作成本高）。超微藿香正气散是利用粉体工程工艺对中药实施细胞破壁加工而成的粉剂，不但保持了原药材的特性，且能提高有效成分的释出和生物利用度，节省药材等独特的优势[3-4]。

目前，关于急性腹泻的发病机制，研究认为：主要是致病因素激活腺苷酸环化酶，细胞内的ATP转变成cAMP，使肠黏膜细胞cAMP含量迅速增加，Na+-K+-ATP酶活性改变，从而促使肠黏膜细胞中液中K+溢出，Na+，Cl-等水分进入细胞内，细胞肿胀坏死，肠腔水分的分泌明显增加而导致腹泻，引起机体电解质紊乱，甚至造成腹泻患者生命危险。

本研究表明：采用经灌胃番泻叶煎剂加寒冷刺激诱导大鼠急性腹泻模型，大鼠腹泻次数、粪便含水量明显增加，血浆 Na+、K+浓度降低、Cl-浓度升高，血浆cAMP水平升高。藿香正气超微粉、藿香正气细粉、藿香正气口服液均能不同程度调节急性腹泻大鼠水电解质平衡，降低血浆cAMP水平，对肠黏膜有一定保护作用。其中藿香正气超微粉功效优于藿香正气细粉。

[1]吕明惠.藿香正气散加味治疗急性腹泻疗效分析 [J].天津中医，1997，14（5）：214.

[2]顾琰东.藿香正气散煎剂保留灌肠治疗小儿夏季腹泻例析[J].实用中医内科杂志，2002，16（4）：217.

[3]梅全喜，梅笑风.中药新型饮片的特点与存在问题探讨[J].亚太传统医药，2009，5（4）：1-4.

[4]蔡光先，杨永华.单味中药超微饮片研制与开发[J].医学研究通讯，2005，34（4）：31，54.

（本文编辑 彭芝配）

Effects of micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder on protection of intestinal mucosa and regulation of water electrolyte in rats with acute diarrhea

LUO Yao-yue， LONG Jing-wen,WANG Yu-xing， XIE Jing-guang，DENG Ning-kun， WU Can-rong， LI Ya
(TCM University of Hunan， Changsha， Hunan 410007， China)

Objective To investigate the effect of micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder on protection of intestinal mucosa and regulation of water electrolyte in rats with acute diarrhea.Methods 50 ratswere randomly divided into blank group,modelgroup,micro-pieces pow der group,powder group and oral solution group.The gavage senna decoction combined with cold stimulation was used to induce the rat models,the changes of diarrhea times and water content in fecal were measured,the HE staining colon mucosa morphology was detected with light microscopy,the serum concentration of K+,Na+and Cl with electrode and plasma level of cAMP with enzyme-linked immunosorbent.Results In model group,the diarrhea times and fecal water content were significantly increased,plasma K+，Na+concentration decreased,Cl concentration and plasma cAMP levels increased;compared micro-pieces powder group,powder group and oral solution group with model group，the differences were significant(P<0.05)； compared superfine pow-der group with the powder group,the differences of decreasing diarrhea times and fecal water content,increasing plasma K+，Na+concentration,decreasing plasma Cl-concentration and cAMP levels were significant(P<0.05);compared superfine powder group with oral solution,the difference of reducing diarrhea times was significant(P<0.05).Conclusion The micro-pieces Huoxiang Zhengqi powder can regulate water and electrolyte balance in rats with acute diarrhea,decrease plasma cAMP levels,is effective to protect the intestinal mucosa,and is better than traditional powder.

Huoxiang Zhengqi powder;micro-pieces；diarrhea;intestinal mucosa；water and electrolyte；rats；rugosa；Angelica；basil；pericarpium arecae

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2011.05.005.016.04

2011－02－21

湖南省中医药管理局科研项目（2009014）；2009年度湖南省大学生研究性学习和创新性实验计划项目（2009）。

罗尧岳（1973-），男，湖南沅陵人，副教授，主要从事方剂学实验研究。