微柱凝胶法在不规则抗体筛检中的应用

戴 芳 李建武

（北京大学深圳医院输血科，广东深圳 518036）

不规则抗体是指不符合ABO血型系统Landsteiner法则的血型抗体，即血清中抗A、抗B以外的其他血型抗体。此类抗体可引起交叉配血困难及迟发性免疫性溶血性输血反应，有时还会导致急性溶血性输血反应。输血前不规则抗体筛检有助于血液选择，从而有充分的时间来选择不含有针对某抗体的响应抗原的血液，防止因为输注含有某抗体相应抗原的血液而引起溶血性输血反应，保证输血安全。笔者采用微柱凝胶法对笔者所在医院申请输血的患者进行不规则抗体筛查，对阳性结果利用谱细胞同时采用微柱凝胶法和改良聚凝胺法进行鉴定，现将检测结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院2007年2月～2010年2月各科室申请输血的住院患者3279例，其中男1609例，女1670例，年龄1～85岁。留取受检者不抗凝管静脉血4mL。

1.2 仪器和试剂

西班牙Diana公司提供的全自动配血系统仪器、微柱凝胶孵育器、微柱凝胶离心机、低离子溶液和微柱凝胶Coombs卡；上海血液生物医药有限责任公司提供的筛选细胞Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号及鉴定谱细胞；珠海贝索生物技术有限公司提供的凝聚胺试剂盒。

1.3 检测方法

1.3.1 微柱凝胶法不规则抗体筛查 启动全自动配血系统仪器，双击操作系统图标。先将筛选细胞Ⅰ号、Ⅱ号和Ⅲ号用低离子溶液按1∶5稀释成0.8%浓度，放置于仪器试剂槽中。然后取出微柱凝胶Coombs卡，编号后放置在仪器卡栏上。把标本编号，离心后放置在标本槽中。试剂、标本放置好后，关门，在电脑中点击选择不规则抗体筛查程序，程序启动后编号，仪器自动稀释、加样、温育、离心及结果判读。

1.3.2 微柱凝胶法不规则抗体鉴定 筛选为阳性的标本用1～11号谱细胞采用手工微柱凝胶法进行抗体鉴定。先将11套鉴定谱细胞对应加入标记有1～11的微柱凝胶卡中各50μL，然后再各加入被检血清25μL，同时取一孔加入受检者自身红细胞和血清作为自身对照；接着将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内孵育15min；将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶离心机内，以1000r/min离心10min。取出Coombs微柱凝胶卡，根据微柱凝胶卡结果判读标准判读并记录结果，最后对照谱细胞反应格局表判断出不规则抗体特异性类型。

1.3.3 改良凝聚胺法不规则抗体鉴定 筛选为阳性的标本用1～11号谱细胞同时采用改良凝聚胺法进行抗体鉴定以作比较。先取11支小试管编号，各加被检血清2滴，然后每管对应各加入1～11号谱细胞1滴，另取一支试管做自身对照；接着各管加LIM 0.65mL，混匀后再各加Polybrene溶液2滴，并混匀；用离心机3400r/min离心10s，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1mL液体轻轻摇动试管，可看到管底有凝集；最后加入Resuspending溶液2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果，有凝集判为阳性，无凝集为阴性，根据谱细胞反应格局表判断出不规则抗体特异性类型。

表1 不规则抗体阳性患者抗体特异性分布（n）

2 结果

2.1 不规则抗体筛查结果

经检验，3279例申请输血者中检出不规则抗体阳性11例，阳性率为0.34%。其中男3例（27.27%），女8例（72.73%），有输血或妊娠既往史9例，无输血或妊娠既往史2例。

2.2 不规则抗体鉴定结果

手工微柱凝胶法与改良凝聚胺法相比，两者鉴定结果一致。不规则抗体阳性患者抗体特异性分布见表1。

3 讨论

受血者体内存在不规则抗体接受含相应抗原血液制品时，可能发生严重的免疫溶血性输血反应，重则危及性命[1]。不规则抗体的产生在输血人群中所占比例不高，但它是引起迟发性免疫反应的主要原因。如何对血源进行抗体检测，选择合适的血液输注，从而确保输血安全变得至关重要。我国卫生部临床输血技术规范要求对交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内需要接收多次输血者必须作不规则抗体筛选实验[2]。欧美地区大部分发达国家已经对所有献血员及受血者均进行不规则抗体筛查工作，以避免由于不规则抗体导致的输血不良反应发生。

近年来发展起来的微柱凝胶技术（MGT）是在经典的抗人蛋白试验基础上发展起来的新型检测方法，被广泛应用于血型鉴定、交叉配血及不规则抗体筛查中。微柱凝胶试验是红细胞抗原与相应抗体在凝胶介质中发生聚集反应，利用微柱凝胶的过滤作用和免疫化学抗原抗体特异反应，通过离心技术将发生聚集反应的红细胞阻滞于凝胶之内，未聚集的红细胞则通过微孔过滤到达微柱的底部从而区分有无聚集[3]。微柱凝胶技术已经广泛应用于全自动配血、血型鉴定或不规则抗体筛查等试验，具有灵敏度高，结果准确，便于自动化、标准化等优点。本研究在不规则抗体鉴定时还采用了目前技术成熟的凝聚胺法进行比较，检测结果具有一致性。

本研究中，不规则抗体筛查阳性率为0.34%，说明不规则抗体在人群中的检测率比较低，与国内学者曹荣祎等报道相符[4]。被检出的11例不规则抗体阳性患者中9例有输血史或妊娠史，提示反复输血或多次妊娠可以使患者受到免疫刺激而产生不规则抗体。因此，输血前对有输血史、妊娠史的患者进行不规则抗体筛查非常必要，有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体并可在配血前鉴定此抗体，以获得充足的时间来选择缺乏相应抗原的相配合的供者，确保输血安全。不规则抗体鉴定结果提示大部分不规则抗体属于Rh血型系统，Rh血型系统是红细胞血型系统中最复杂的一个系统，Rh血型系统相应抗原抗体在体内发生反应常可导致溶血反应。因此，对不规则抗体筛查阳性的受血者，进一步做不规则抗体鉴定后选择性输血具有重要的临床意义。

[1] 王培华. 输血技术学[M]. 第2版. 北京：人民卫生出版社，2003：222-225.

[2] 中华人民共和国卫生部. 临床输血技术规范[S]. 2000-10-01.

[3] 武峰，刘亚玲. 微柱凝集技术在血型免疫学相关检测中的应用进展[J].临床血液学杂志，2008，21（1）：101-104.

[4] 曹荣祎，刘凤华，于洪敏. 微柱凝集检测不规则抗体的临床应用[J].临床血液学杂志，2010，12（2）：149-151.