适合结核病实验室检查的替代策略研究

赵红玉 李 颖

1.甘肃省灵台县疾病预防控制中心，甘肃灵台 744400；2.甘肃省平凉市第二人民医院，甘肃平凉 744000

结核病是国家防控的重点传染病之一，如何早发现、早诊断、早治疗是结核病防控的主要措施，提高诊断的阳性率具有较高的实用价值。目前，县级实验室多采用经典的痰涂片显微镜检查法，但由于该方法与检验人员的业务素质和水平、操作方法、痰液的采集，标本的处理，取材制片，显微镜检查等诸多因素有关，阳性率也比较低；因此，研究适合实验室显微镜检查结核杆菌的替代策略，是一项很有意义的事情。结核分支杆菌是胞内感染菌，属带菌免疫，只有当机体细胞内存在结核分枝杆菌或其组分时才有免疫力，一旦结核分枝杆菌被完全杀灭，其组分完全被清除后，相应的免疫力也随之消失。近年来的研究表明活动性结核患者体液免疫随病变加重而増强，产生特异性结核抗体也随之升高[1]。因此，用ELISA检测患者血液标本中是否存在特异性结核杆菌抗体及其含量，从而诊断结核病和观察疗效。笔者对230例确诊的活动性肺结核患者和60例非结核性患者用ELISA法检测血液中结核杆菌抗体与直接厚涂片检测患者痰中结核杆菌进行对比，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

世行贷款/英国赠款灵台县结核病控制项目2007年7月1日～2009年6月30日临床确诊的230例活动性肺结核患者，在230例患者中，涂阳59例，涂阴171例；初治173例，复治57例。另选择临床诊断非结核病患者60例作为对照，其中慢性支气管炎合并肺气肿者31例，支气管扩张症11例，肺炎6例，肺癌并咯血者12例。

1.2 仪器及试剂

酶联免疫吸附试验（ELISA）快速测定结核杆菌抗体试剂盒由珠海丽珠生物技术有限公司提供，（试剂批号：20080521，有效期：2008-05-20）；美国Stat Fax 2600型洗板机，美国Stat Fax 2100型酶标仪比色。

1.3 标本来源

血清标本由2007年7月～2009年6月世行贷款/英国赠款灵台县结核病控制项目确诊的230例活动性肺结核患者提供，抽取患者早晨空腹静脉血标本5 mL，分离血清，及时检测；痰标本由患者早晨彻底清洁口腔后，深咳出1～2口痰液（如果咯血取脓血痰）留于加盖无菌容器内立即送检。

1.4 检测方法和结果判断

1.4.1 ELISA试验 230例活动性肺结核患者血清，ELISA法检测结核杆菌抗体，严格按说明书操作，显色后应用美国Stat Fax 2600型酶标仪比色，结果以说明书给定的公式设置的酶标仪判断结果为准。阴性：提示待检标本中结核抗体含量未升高，即近期可能无结核菌感染；阳性：提示待检标本中结核抗体含量升高，即近期可能有结核菌感染或结核病存在。

1.4.2 显微镜检查 取合格痰直接厚涂片以抗酸染色，干燥后显微镜检查100个视野，有3～9条抗酸杆菌为阳性，镜检300个视野未见抗酸杆菌为阴性。阴性：说明痰液中结核杆菌量少或无，传染性低或无传染性；阳性：说明痰液中结核杆菌有结核杆菌，传染性强。

1.5 统计学处理

应用SPSS13.0统计软件进行统计分析；计量资料用均数±标准差（）的形式表示，采用t检验，计数资料用x2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

230例活动性肺结核患者，ELISA法检测血清结核杆菌抗体阳性196例，抗体阳性率为85.2%；230份痰标本直接痰厚涂片显微镜检查，阳性59例，痰检阳性率为25.6%，这59例涂阳患者ELISA法检测其血清抗体全部阳性。171例涂阴患者中ELISA检测血清结核杆菌抗体阳性133例，抗体阳性率77.8%。60例非结核病患者中，ELISA检测结核杆菌抗体阳性6例（肺癌2例，慢性支气管炎3例，支气管扩张1例），痰直接厚涂片未检出阳性。经x2检验，ELISA检测结核杆菌抗体阳性率明显高于直接涂片法阳性率（P＜0.01）。ELISA法检测患者血液中结核杆菌抗体是实验室显微镜检查结核杆菌最好的替代策略方法。见表1。

表1 ELISA检测血清结核杆菌抗体与痰显微镜检查结核杆菌结果比较

3 讨论

由于结核病诊断缺乏“金标准”，确诊只有通过临床标本痰直接厚涂片显微镜检查和X线胸片确定。对早期结核，痰涂阴和肺外结核病往往无法明确诊断。而且显微镜检查与检验人员的业务素质和水平，操作方法，痰液的采集，标本的处理，取材制片等诸多因素有关，阳性率也比较低；应用ELISA检测活动性肺结核患者血清结核杆菌抗体，标本易采集，方法简单，仪器判定结果误差小，阳性率高；而且可检测结核早期感染，细菌量少或肺外结核病时更明显。文献报道ELISA法检测肺结核患者血清中的结核杆菌抗体阳性率明显高于痰涂片和培养，尤其在结核早期感染，细菌量少或肺外结核病时更明显[2-3]。因此ELISA特别适合结核病的早期或肺外结核诊断。

[1] 中华医学会结核病分会.肺结核病诊断与治疗指南[J].中华结核和呼吸杂志，2001，24（3）：70.

[2] 杨诺，马涤辉.酶联免疫点化验法在结核性脑膜炎诊断中的应用及展望[J].临床和实验医学杂志，2007，6（12）：183-184.

[3] 夏洪娇，刘剑荣，彭可君.噬菌体生物扩增法结合荧光染色法快速检测结核分枝杆菌[J].临床和实验医学杂志，2008，7（11）：80-81.