顶空气相色谱法测定洛伐他汀原料药中的有机溶剂残留量

姜建国，宋更申，张西如，高燕霞

（河北省药品检验所，石家庄市 050011）

顶空气相色谱法测定洛伐他汀原料药中的有机溶剂残留量

姜建国＊，宋更申，张西如，高燕霞

（河北省药品检验所，石家庄市 050011）

目的：建立测定洛伐他汀原料药中乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯4种有机溶剂残留量的方法。方法：采用顶空气相色谱法。色谱柱为DB-624石英毛细管柱，柱温采用程序升温，检测器为氢火焰离子化检测器，检测器温度为280℃，进样口温度为160℃。结果：乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的检测浓度的线性范围分别为10.0～250（r＝1.0000）、10.0～250（r＝0.9999）、10.0～250（r＝0.9999）、1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997）；平均回收率为97.6%～99.1%（RSD＝0.9%～1.9%），定量限为0.22～5.61μg·mL－1；4批样品中4种有机溶剂残留量均符合《中国药典》2005年版要求。结论：该方法操作简便、精密度好，结果准确、可靠。

洛伐他汀；顶空气相色谱法；有机溶剂；残留量

洛伐他汀原料药（Lovastatin）是微生物来源的羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂类降胆固醇药物，其主要的产生菌为土曲霉、桔青霉和红曲霉。在从发酵液中萃取洛伐他汀和重结晶时，笔者根据不同的生产工艺所涉及的、《药品注册的国际技术要求·质量部分》（ICH）规定应控制的有机溶剂的品种，将乙醇、丙酮、乙酸乙酯和甲苯等4种有机溶剂作为检测对象。本文根据ICH[1]的指导原则和《中国药典》2005年版[2]的相关规定，并参考有关文献[3～5]，采用静态无溶剂顶空气相色谱法，同时测定上述4种溶剂在原料药中的残留量。该方法可有效避免溶剂不纯导致的对测定结果的干扰，经验证，该方法操作简便、精密度好，结果准确、可靠。

1 仪器与试药

6890 型气相色谱仪、7694E型顶空进样器（美国Agilent公司）；BP 211D型电子天平（德国Sartorius公司）。

洛伐他汀原料药样品（由国内4家公司提供，批号分别为091006、20080203、E1003101、091102，含量分别为 99.2%、99.4%、99.5%、99.0%）；乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均为色谱纯（美国Fisher公司）；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为DB-624石英毛细管柱（60m×530μm×3μm），柱温：82℃维持6.5min，以20℃·min－1的速率升至160℃，维持6min；氢火焰离子化检测器，检测器温度：280℃；分流进样，分流比：1∶1；进样口温度：160℃；载气：氮气，流速：5.5mL·min－1；顶空进样，平衡温度：90℃，平衡时间：30min，顶空定量环体积：1mL，定量环温度：100℃，传输线温度：110℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液。精密称取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg、甲苯89mg，置于同一100mL容量瓶中，加DMF溶液25mL使溶解，再用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 对照品溶液。精密量取对照品贮备液5mL，置于50mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5mL，置于20mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，即得。

2.2.3 供试品。精密称取本品约0.5g，置于15mL顶空进样瓶中，密封，即得。

2.3 系统适用性试验

照“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录色谱图，见图1。

图1结果显示，4种溶剂分离良好，理论板数均不低于5000。

2.4 线性关系

精密称取甲苯89mg，置于100mL容量瓶中，加入DMF 25mL使溶解，再用水稀释至刻度，摇匀。精密量取10mL，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。再分别精密量取5、25、15、5、2、1mL分别置于10、100、100、100、100、100mL容量瓶中，分别用水稀释至刻度，摇匀。

精密称取乙醇500mg、丙酮500mg、乙酸乙酯500mg，置于同一100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再分别精密量取5、3、2、1、0.5、0.2mL分别置于100mL容量瓶中，分别用水稀释至刻度，摇匀。

图1 气相色谱图A.对照品；B.供试品；1.乙醇；2.丙酮；3.乙酸乙酯；4.甲苯Fig1 GC chromatogramsA.reference substances；B.test sample；1.alcohol；2.acetone；3.ethyl acetate；4.methylbenzene

分别精密量取上述各溶液5mL，置于20mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（c）为横坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n＝6）Tab1 Linear ranges of organic solvents（n＝6）

2.5 重复性试验

精密称取本品（批号：091006）约0.5g，置于15mL顶空进样瓶中，共6份，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，检出本品中乙醇为0.04%（RSD＝0.9%），乙酸乙酯为0.02%（RSD＝1.1%），丙酮、甲苯均未检出。

2.6 回收率试验

精密称取已知各溶剂含量的样品（批号：091006）0.5g，置于15mL顶空进样瓶中，共9份，分别精密加入对照品贮备液0.40、0.50、0.60mL，各3份，密封，摇匀。按“2.1”项下的色谱条件进样分析，按外标法计算。结果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的平均回收率分别为98.8%、98.2%、99.1%、97.6%，RSD分别为1.6%、1.2%、0.9%、1.9%。

2.7 稳定性试验

精密量取“2.2.2”项下的对照品溶液，于室温下放置0、1、2、4、8、12h，分别按“2.1”项下的色谱条件进样分析。结果，乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯在12h内测定的峰面积的RSD分别为1.1%、1.8%、1.5%、1.3%，表明本溶液在12h内稳定。

2.8 检出限与定量限

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算检出限，以信噪比约为10时计算定量限。结果乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯的检出限分别为1.81、1.02、0.25、0.07μg·mL－1，定量限分别为5.61、3.08、0.76、0.22μg·mL－1。

2.9 样品中有机溶剂残留量的测定

为了考查基质效应对待测溶剂活度的影响导致的测定结果的差异，本文将无溶剂法测定结果与以水为溶剂的测定结果进行了比较，结果如下。

2.9.1 无溶剂法。取4批样品，按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，按外标法计算4种有机溶剂的含量。

2.9.2 以水为溶剂法。取4批样品，分别精密称取约0.5g，置于20mL顶空进样瓶中，精密加水5mL，使均匀分散，密封，即得。按“2.1”项下的色谱条件进样分析，按外标法计算4种有机溶剂的含量。

2种方法的测定结果见表2。表2结果表明，2种方法测定结果基本一致。

表2 2种方法的测定结果比较Tab2 Comparison of results determined by two kinds of methods

3 讨论

目前残留溶剂测定大多数是针对1个企业的产品而建立的方法，由于不同的生产企业采用的生产工艺可能不同，从而使用的有机溶剂的种类也可能有所不同，导致同一品种不同来源的样品中残留溶剂的种类可能不尽相同。另外有的生产企业出于保密的目的或其他原因，提供的生产工艺或许不完整，这就使残留溶剂测定具有很大的不确定性，因此应该广泛收集样品取得不同的生产工艺信息，根据试验建立相应的多种溶剂的检测方法。此次试验涉及的样品覆盖了国内几乎所有的洛伐他汀生产企业，而不是针对某一个生产企业的样品，故而所建立的方法具有普遍性。

ICH[1]和《中国药典》2005年版[2]都规定，甲苯属第2类在药品中应限制残留量的溶剂，限度为0.089%；乙醇、丙酮、乙酸乙酯均属第3类低毒性残留溶剂，应控制其残留量，限度均为0.5%。结果本试验4批样品残留溶剂的测定结果均符合规定。

本方法4种有机溶剂的定量限为0.22～5.61μg·mL－1，灵敏度完全可以满足洛伐他汀中有机溶剂残留量测定的需要。

有机溶剂残留量测定中，水是较理想的溶解介质，应尽量采用；对于水不溶性待测有机溶剂，在制备对照品溶液时，可先用高沸点、无干扰的中极性溶剂溶解后再溶于水。本试验将待测溶剂先溶于DMF后，再用水稀释，结果表明DMF不干扰测定。

本文采用无溶剂法测定洛伐他汀中的残留溶剂，由于加入顶空瓶中的对照品溶液的体积为5mL，采用20mL顶空瓶，而供试品未加溶剂，为了使顶部气体的浓度保持一致，采用15mL顶空瓶。经无溶剂法与以水为溶剂方法测定结果的比较，两者测定结果基本一致，表明基质效应对待测溶剂活度的影响导致的测定结果的差异在可接受的范围之内，说明该方法可行。

[1] 周海钧.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2001：343.

[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：54-57.

[3] 宋更申，姜建国，刘红莉，等.顶空气相色谱法测定美罗培南中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2010，21（5）：447.

[4] 宋更申，姜建国，张西如，等.毛细管气相色谱法测定罗库溴铵中8种有机溶剂残留量[J].中国药学杂志，2010，45（7）：93.

[5] 宋更申，周 丽，孙玉静.顶空气相色谱法测定羟乙基淀粉中的残留溶剂[J].中国药业，2010，19（8）：31.

Determination of Residual Organic Solvents in Lovastatin by Headspace Gas Chromatography

JIANG Jian-guo，SONG Geng-shen，ZHANG Xi-ru，GAO Yan-xia
（Hebei Institute for Drug Control，Shijiazhuang 050011，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of residual organic solvents in lovastatin，i.e.alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene.METHODS：Headspace GC was adopted.The determination were separated on DB-624capillary column using temperature programming.FID was used as detector with a temperature of 280℃，and the inlet temperature was 160℃.RESULTS：The linear ranges of alcohol，acetone，ethyl acetate and methylbenzene were 10.0~250μg·mL－1（r＝1.0000），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），10.0～250μg·mL－1（r＝0.9999），1.78～89μg·mL－1（r＝0.9997），respectively.The average recoveries ranged from 97.6%to 99.1%with RSD of 0.9%～1.9%.The determination limits were 0.22～5.61μg·mL－1.The residual levels for the 4organic solvents in 4batches of samples were all up to the standard stipulated inChinese Pharmacopeia（2005edition）.CONCLUSION：The method is simple，precise，accurate and reliable.

Lovastatin；Headspace gas chromatography；Organic solvents；Residual

R927.11；R972+.4

A

1001-0408（2011）17-1607-02

＊主任药师，硕士。研究方向：药物分析。电话：0311-85212008-8037。E-mail：JiangJG216@yahoo.com.cn

2010-07-02

2010-08-23）