不同类型的磷脂对三氧化二砷脂质体外观稳定性的影响Δ

王晓瑜，马满玲，杨丽杰，陈 岩

（哈尔滨医科大学附属第一医院药学部，哈尔滨市 150001）

不同类型的磷脂对三氧化二砷脂质体外观稳定性的影响Δ

王晓瑜＊，马满玲#，杨丽杰，陈 岩

（哈尔滨医科大学附属第一医院药学部，哈尔滨市 150001）

目的：研究不同类型的磷脂对三氧化二砷（As2O3）脂质体外观稳定性的影响。方法：采用A、B厂家生产的浓缩磷脂和C、D厂家生产的粉状磷脂，分别应用薄膜分散法、乙醚注入法、逆相蒸发法制备脂质体，以样品是否发生分层凝聚现象为指标观察其在1、7d，1、6、12个月内的外观稳定性。结果：A、B 2厂家磷脂制备的As2O3脂质体在1年内全部出现分层凝聚现象，C、D厂家磷脂制备的As2O3脂质体保存1年仍未见分层凝聚现象。结论：C、D 2个厂家所生产的磷脂制备的As2O3脂质体稳定性更好，不同类型的磷脂对所制备的脂质体的外观稳定性具有一定影响。

三氧化二砷；脂质体；磷脂；类型；外观稳定性

2000年三氧化三砷（As2O3）作为治疗急性早幼粒细胞白血病的Ⅱ类新药通过美国食品和药品管理局（FDA）的审批后，国内、外学者对其进行了更深入的研究。越来越多的体内、外研究[1]提示As2O3的抗瘤谱非常广泛，有着广阔的临床应用前景。但由于其毒性大的缺点，限制了其应用。

马满玲等[2]将As2O3制备成具有较好包封率的脂质体，为进一步研究其在临床中的应用奠定了基础。As2O3脂质体的成功研制，减少了药物的使用剂量、降低了药物的毒副作用、改变了药物的体内分布，并具有靶向释药特点[3]。在脂质体的制备中，磷脂是常用的载体材料，不同类型的磷脂对制备的脂质体的包封率、稳定性等各方面均具有不同的影响[4]。为此，在本文中，笔者初步研究不同类型的磷脂对制备的As2O3脂质体外观稳定性的影响。

1 仪器与试药

1.1 仪器

R-215旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；KQ-100E型超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）；FA2004N型电子天平（上海民桥精密科学仪器有限公司）。

1.2 试药

As2O3（湖南衡阳市凤凰化学工业厂，批号：0606088，纯度：99.9%）；As2O3脂质体（自制，规格：1mg·mL－1）；卵磷脂（A，批号：20071202，产地：上海；B，批号：20010206，产地：上海；C，批号：20021025，产地：北京；D，批号：20060428，产地：上海）；胆固醇（天津虔诚伟业科技发展有限公司，批号：20080512）。

A、B厂磷脂为浓缩磷脂，C、D厂磷脂为粉状磷脂，4厂家磷脂外观和技术指标情况见表1。

表14 厂家磷脂外观和技术指标情况Tab1 Appearance and technological index of phospholipids from 4factories

2 方法与结果

2.1 制备方法

精确称取As2O30.2g，置于200mL的烧瓶中，加入NaOH（0.25mol·L－1）水溶液，充分摇匀；加热20min，待其全部溶解，放至室温，盐酸调节使其pH值为7.0，然后加入蒸馏水至200mL，过滤后制成药物溶液，备用。为了排除制备方法对其外观稳定性结果的影响，分别采用以下3种方法制备脂质体。

2.1.1 薄膜分散法。将磷脂与胆固醇质量比为4∶1的脂质成分溶于适量的氯仿中，于35℃水浴的条件下减压旋转蒸发，使有机溶剂挥发，脂质混合物在圆底烧瓶底部形成均匀的薄膜，加入浓度为0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0）充分水化，超声使膜完全脱落后得到脂质体混悬液，再用水浴超声法获得粒径较小的As2O3脂质体溶液[5]。

2.1.2逆相蒸发法。将磷脂与胆固醇质量比为4∶1的脂质成分溶于适量的氯仿中，再加入浓度为0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0），充分混匀，经超声波清洗仪超声形成W/O乳液，再于35℃水浴的条件下减压旋转蒸发成胶状，后继续减压蒸发至彻底除去氯仿，即得As2O3脂质体混悬液。用生理盐水调节体积后超声40min，使其形成均匀的乳状溶液，即为As2O3脂质体溶液[6]。

2.1.3 乙醚注入法。将磷脂与胆固醇质量比为4∶1的脂质成分溶于乙醚中，所得的类脂溶液缓慢匀速注入恒温40℃的、浓度为0.1g·L－1的As2O3水溶液（pH 7.0）中，含有脂质的乙醚溶液被大量的As2O3水溶液所稀释，油相在水相中不溶从而迅速形成小的脂质体颗粒，继续恒温搅拌至乙醚完全除尽，得到As2O3脂质体混悬液，再水浴超声30min使粒径达到要求，即得As2O3脂质体[7]。

采用4厂家磷脂分别用上述3种方法制备脂质体，制备的样品各取10个，在4℃的条件下保存1、7d，1、6、12月，观察其分层凝聚现象。

2.2 结果

稳定性较好的脂质体在外观上应长时间呈现均匀混悬的状态，若短时间内出现分层凝结现象，可以证明其稳定性不好。在确保制备的脂质体可以长时间的保持均匀混悬状态的前提下，下一步再考察载药量、包封率、渗漏率等其他指标。

以观察时间点为横坐标，以未分层凝聚的样品数/总的样品数×100%为纵坐标（r），绘制外观稳定性曲线图，结果见图1。

图14 厂家磷脂采用不同方法制备脂质体的分层凝聚情况（n＝10）Fig1 Hierarchical clotted appearance of liposome prepared by phospholipids from 4factories（n＝10）

图1结果显示，C、D 2个厂家所生产的磷脂制备的As2O3脂质体在1年内未出现分层凝聚现象，A、B 2个厂家所生产的磷脂制备的As2O3脂质体在1年内全部出现分层凝聚现象，表明C、D 2个厂家磷脂制备的As2O3脂质体比A、B 2个厂家磷脂制备的As2O3脂质体的外观稳定性好。

3 讨论

本试验所使用的磷脂均为大豆磷脂，这类磷脂是精制植物油时经脱胶过程除去的物质。磷脂本身为一种混合物，其主要成分包括磷脂酰胆碱（PC）、磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰肌醇（PI）和磷脂酸（PA），同时磷脂中还包括其他几种酯类如糖脂、非极性脂，以及极少量的其他物质如糖类和杂质等。脱胶过程的目的是降低油中磷脂的含量，经过脱胶得到的是粗制磷脂，油料种子的质量和来源对卵磷脂粗品的组成和质量具有重要的影响[8]。得到粗制磷脂后，还需对磷脂进行进一步的加工，如标准化、卵磷脂的修饰、溶剂提取等。

根据中华人民共和国行业标准中磷脂通用技术条件规定[4]判断，A、B 2个厂家生产的磷脂应为浓缩磷脂，C、D 2个厂家生产的磷脂为粉状磷脂。浓缩磷脂为水化磷脂经真空脱水、浓缩等工序而制成的塑状或黏稠状产品，粉状磷脂为浓缩磷脂经脱脂、分离、干燥等工序而制成的粉粒状产品。粉状磷脂是以浓缩磷脂为原料，根据中性油脂和游离脂肪酸易溶于丙酮而磷脂难溶于丙酮的原理，经丙酮萃取除去油脂得到。丙酮分离萃取后，得到的粉状磷脂在乳化能力和水中的分散力都得到大大的改善。

另外，经过丙酮去油的过程后，磷脂中成分的含量也有一些变化。粉状磷脂因丙酮去油后其中性脂质的含量大量降低的同时，PC、PE、PI、PA的含量的百分比相应升高，在脂质体的制备中，PC、PE、PI、PA的含量对制备的脂质体的性质有主要的影响[9]。脂质体的Zeta电位绝对值的大小会影响脂质体的稳定性，制备出的脂质体Zeta电位的绝对值较大时脂质体相对稳定。当磷脂中的PA和PI含量较高时，其制备出的脂质体Zeta电位的绝对值比较大，这是由于PC和PE是电中性，PA和PI带有负电荷，因此磷脂中PA和PI含量较高时其制备的脂质体Zeta电位的绝对值较大，脂质体的稳定性也比较好。粉状磷脂中的PA和PI的含量要高于浓缩磷脂中的PA和PI的含量，这是C、D 2个厂家所生产的磷脂制备的As2O3脂质体外观稳定性好的原因之一。

本试验中使用A、B、C、D 4个厂家的磷脂，分别用薄膜分散法、乙醚注入法、逆相蒸发法3种方法制备As2O3脂质体，在4℃的条件下保存12个月观察其外观稳定性。结果显示，采用C、D 2个厂家的磷脂制备的As2O3脂质体比A、B 2个厂家的磷脂制备的As2O3脂质体外观稳定性好，表明在制剂过程中选用磷脂时应注意其产品类型。

[1] 白建刚，李汉生.三氧化二砷抗肿瘤研究进展[J].中国药事，2008，22（12）：1105.

[2] 马满玲，陈 岩.三氧化二砷脂质体的制备及其包封率的测定[J].中国药师，2008，11（9）：1019.

[3] 王广义，刘晶玉，张 旭，等.三氧化二砷脂质体透过载瘤大鼠血脑屏障的实验研究[J].现代生物医学进展，2008，8（10）：1816.

[4]SB/T 10206-1994，中华人民共和国行业标准——磷脂通用技术条件[S].

[5] 张跃珍，林 军.天然药物脂质体制备研究进展[J].中国药房，2007，18（21）：1671.

[6] 穆筱梅，梁世强.脂质体的制备方法及其研究进展[J].时珍国医国药，2008，19（7）：1784.

[7] Meure LA，Foster NR，Dehghani F.Conventional and dense gas techniques for the production of liposomes：a review[J].AAPS PharmSciTech，2008，9（3）：798.

[8] 张卓勇，罗 茜.吉林大豆中卵磷脂的成分提取与分析[J].东北师大学报（自然科学版），2001，33（2）：38.

[9] 穆筱梅，钟振声.大豆磷脂脂质体的制备[J].大豆科学，2007，26（3）：386.

Effect of Different Types of Phospholipids on the Appearance Stability of Arsenic Trioxide Liposome

WANG Xiao-yu，MA Man-ling，YANG Li-jie，CHEN Yan
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Harbin Medical University，Harbin 150001，China）

OBJECTIVE：To study the effect of different types of phospholipids on the appearance stability of Arsenic trioxide（As2O3）liposome.METHODS：The liposome was prepared using concentrated phospholipids produced by factory A and B and powdered phospholipids produced by factory C and D by film dispersion method，ether injection method and reverses phase evaporation method.The appearance stability at 1d，7d，1month，6months and 12months was observed according to stratified clotting of samples.RESULTS：Arsenic trioxide liposome produced by phospholipids from factory A and B appeared stratified clotting during 1year while that produced by phospholipids from factory C and D not.CONCLUSION：Arsenic trioxide liposome produced by phospholipids from factory C and D has better stability，and different types of phospholipids affect the appearance stability of liposome.

Arsenic trioxide；Liposome；Phospholipids；Type；Appearance stability

R943；R979.1；R927.11

A

1001-0408（2011）17-1587-02

Δ黑龙江省科学技术厅基金资助项目（GB05C401-04）

＊硕士研究生。研究方向：药理学。E-mail：wxy19841223@126.com

#通讯作者：主任药师，硕士研究生导师。研究方向：药理学、临床药学。电话：0451-53642755。E-mail：mamanling@126.com

2010-07-23

2010-08-18）