防哮颗粒对哮喘缓解期模型大鼠气道炎性损伤的预防作用

邢向晖, 陈鲁, 宋惠霄

支气管哮喘是由多种炎性细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)和T淋巴细胞参与,并有50多种炎症介质和25种以上的细胞因子相互作用的一种气道慢性炎症。气道炎症是哮喘患儿气道可逆性阻塞和气道高反应性的重要决定因素。而血清白细胞介素4(interleukin,IL- 4)、血液中EOS和IgE在哮喘发病过程中起重要作用。为探讨中医药治疗哮喘缓解期的机制,笔者观察了防哮颗粒对哮喘缓解期模型大鼠血清IL- 4、EOS和IgE的影响,以期从实验方面对儿童哮喘缓解期的防治方药进行系统观察与探讨,寻求儿童哮喘缓解期的有效防治药物。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选择健康Wistar大鼠40只,体质量(200±10)g,雌雄各半,由山东大学实验动物中心提供,符合一级实验动物标准。

1.2 试剂与药品 (1)大鼠IL 4、IgE ELISA试剂盒,购于晶美生物工程(北京)有限公司;(2)卵白蛋白粉剂,购于济南科瑞生物科技有限公司(Sigma公司分装,每瓶10 g);(3)酮替芬,购于江苏天士力帝益药业有限公司(每片1 mg,批号:20050521);(4)固本咳喘片,购于台州南峰药业有限公司(每片0.4 g,批号:060305);(5)防哮颗粒,由山东中医药大学药学院药剂教研室按正交试验法筛选工艺,以最佳流程制备;组成 :黄芪、白术、防风、陈皮、清半夏、熟地黄、仙灵脾、黄芩、蛤蚧、五味子、丹参;生药购于山东中医药大学附属医院药房;大鼠灌胃药以其制成浓缩液,每毫升含生药约2 g;(7)其他:生理盐水、0.4%戊巴比妥钠。

1.3 实验仪器 (1)402型超声雾化器(上海四菱医疗器械厂);(2)HW1型电热恒温水箱(北京医疗设备厂);(3)B80型自动平衡离心机(白洋离心机厂);(4)JA2003型电子称(上海恒平科学仪器有限公司);(5)Stat Fax- 2100型酶标仪(美国AWARENESS公司)。

1.4 药物配制 (1)固本咳喘片研磨成末,用生理盐水配成0.02 g/L;(2)酮替芬研磨成末,用生理盐水配成0.02 g/L;(3)防哮颗粒浓缩液2 g/mL。

1.5 实验方法 将40只大鼠按随机数字表法分成5组,每组8只,雌雄各半,5组分别为空白对照组、模型对照组、中药治疗组、中药对照组、西药对照组,常规饲养1周后致敏。致敏用抗原液由卵白蛋白加生理盐水配成10%卵白蛋白溶液。除空白对照组外,其余各组大鼠常规皮肤消毒后腹腔注射10%卵白蛋白生理盐水1 mL致敏,常规饲养1周后放入密闭的动物造模雾室内,用卵白蛋白与生理盐水配成1%的液体,加入超声雾化器雾化进行大鼠哮喘诱发实验,记录大鼠喘息时的症状、体征(大鼠出现躁动不安、呼吸加速、腹部内凹等呼吸困难表现说明诱发哮喘成功);每日诱发哮喘30 min,连续诱发14 d。诱发实验结束后常规饲养1周,开始灌胃。根据“常用动物与人体面积比值”计算大鼠灌胃药量(D2=D1/R1×R2)[1]。中药治疗组大鼠防哮颗粒用量9 g/(kg·d),即0.9 mL;中药对照组大鼠固本咳喘片用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;西药对照组大鼠酮替芬用量0.09 mg/(kg·d),即0.9 mL;空白对照组、模型对照组大鼠以等量生理盐水代替,即0.9 mL/(kg·d)。共灌胃30 d。灌胃结束后用0.4%戊巴比妥钠腹腔麻醉(10 mL/kg)大鼠,腹主动脉取血,以3 000 r/min离心5 min,取血清待用。

1.6 观测指标 (1)IL- 4水平测定;(2)EOS计数测定;(3)IgE水平测定。采用ELISA法检测血清中、IgE(具体步骤按试剂说明进行操作)。EOS计数的检测,麻醉、取血同上,取一滴血滴入肝素抗凝管,按常规方法进行。

1.7 统计学方法 采用SPSS 12.0软件进行统计处理,计量资料行t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 防哮颗粒对哮喘缓解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS计数的影响 见表1。

表1 各组哮喘缓解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS计数的比较(±s,n=8)

表1 各组哮喘缓解期模型大鼠血清中IL- 4、IgE水平和EOS计数的比较(±s,n=8)

注:与空白对照组比较,aP<0.05,bP<0.01;与模型对照组比较,cP<0.05,dP<0.01;与中药对照组比较,eP<0.05,fP<0.01;与西药对照组比较,gP<0.01。

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3 讨论

《景岳全书·喘促》云:“未发时以扶正气为主,既发时以攻邪气为主。”《医宗必读·喘》:“治实者攻之即效,无所难也。治虚者补之,未必即效,须悠久成功,其间转折进退,良非易也。”哮喘病在肺,源在脾,根在肾。缓解期肺、脾、肾三脏不足,兼有痰浊、瘀血。根据“急则治标,缓则治本”的治疗原则,确立以补肺、肾为主,补脾为辅,佐以化痰、活血的治疗大法。方中黄芪补肺气、益卫气;蛤蚧补肺气、纳肾气,两药合用外御卫表,内补肺肾共为君药。五味子上敛肺,下滋肾,助芪蛤补肺益肾涩精,为臣药。熟地、仙灵脾补肾阳、滋肾阴,以培先天;白术、陈皮、清半夏补益脾肺,理气化痰,以滋后天,共为佐助之品。黄芩清伏痰蕴郁之热,且防芪、蛤、灵、夏辛燥、温热太过,为佐制之品。丹参活血行血,化瘀走里;防风辛散透达,助芪御表,共为使药。诸药合用,共有补肾固本,益气固表,祛痰通络,虚实并治,标本兼顾之效。笔者经临床应用表明:防哮颗粒可改善哮喘患儿的体质状态,提高机体免疫功能及肺功能,减少感冒次数及哮喘发作次数,降低气道反应性,从而达到改善和防治本病的目的。

[1]高治平,胡弼.现代实用医学机能实验技术与方法[M].长沙:湖南科学技术出版社,2004:18.

[2]刘文艳,汪杏巧,张天寿.过敏性哮喘青春期缓解者外因IL- 4、活性和Ig E的变化[J].临床内科杂志,2001,18(2):131.

[3]刘宪文,章世贵,李千贺.哮喘患者花粉皮试和血清总IgE、IL- 4表达及激素干预的影响[J].山东医药,2001,41(6):20.