胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性与视网膜中央静脉阻塞的关系

西安交通大学医学院第一附属医院(西安710061)

王小东* 张德秀

视网膜中央静脉阻塞(Central retinal vein occlusion,CRVO)是常见的视网膜血管病,也是致盲的眼底病之一。病因比较复杂,与动脉硬化、高血脂、血液高粘度和血流动力学有密切关系[1]。胆固醇酯转运蛋白(CETP)基因突变可致动脉粥样硬化和血脂改变。本研究观察了60例CRVO患者和120例对照者 CETP TaqIB基因多态性,旨在探讨其对视网膜中央静脉阻塞的影响。

对象与方法

1 研究对象 收集了我院 2008年11月到 2009年3月经眼底荧光造影确诊并排除了糖尿病、严重的心脑血管疾病及肾功能不全等全身疾病的CRVO患者60例,男43例,女17例,年龄 35～62岁,平均(48±6)岁。对照组 120例,来自我院其他疾病患者及体检人员,与病例组按年龄、性别、体重、烟酒史进行 1∶2配比,并排除了糖尿病、严重的心脑血管疾病及肾功能不全等全身疾病。两组均为无血缘关系的汉族人。

2 研究方法

2.1 人基因组 DNA的提取:采取空腹静脉血 3 ml,3.8%枸橼酸钠抗凝,采用低渗溶血,盐析法提取外周血白细胞基因组 DNA。

2.2 CETP基因型分析:PCR扩增相应CETP目的片断,引物1 5’-CACTAGCCCAGAGAGAGGA GTGCC-3’,引物2 5’-CTGAGCCCAGCCGCACAC TAAC-3’,25μl反应体系中含有10×PCR反应缓冲液5.0μl、MgCl2 4μl、10MdNTPs 1μl、Lmthfr-P1、P2各2μl、Tap DNA 聚合酶 1.25μl、基因组 DNA 5μl。在PE2400热循环仪上进行热循环,95℃预变性 5min,进入PCR循环:95℃变性 30s;62℃退火 30s;72℃延伸60s;循环35次,72℃延伸7min。扩增产物用 TaqI酶切,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型(见附图)。电泳图谱上出现535bp一条条带者为B2B2基因型,361bp和174bp两条条带者为B1B1基因型,535bp、361bp和174bp三条条带者为B1B2基因型。

3 统计学处理 采用 SPSS13.0统计软件,基因型及等位基因频率用χ2检验。

附图 CEPT酶切电泳

结 果

CRVO组和对照组CETP TaqIB基因型及等位基因频率的分布见附表,可见 CETP TaqIB基因型、B1与B2等位基因频率分布在两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。

附表 CRVO组和对照组 CETP TaqIB基因型及等位基因频率

讨 论

胆固醇酯转运蛋白(CETP)是一种疏水性糖蛋白,CETP基因位于人第 16染色体长臂(16q12-21),长约25kb,含16个外显子和15个内含子。介导 HDL与富含paoB的v LDL、LDL的脂蛋白之间CE与TG的交换,也参与血浆脂蛋白之间约 50%磷脂的转运,外周组织的游离胆固醇(FC)被新生的HDL颗粒摄取,经 LCAT转化为CE,再由 CETP向 LDL、IDL、VLDL转运,通过LDL受体在肝脏被分解[2]。CETP的基因表达对体内脂质转运和脂蛋白的组成起着重要作用,其中 TaqIB基因多态性具有普遍性,TaqIB基因按等位基因分有B1B1、B1B2、B2B2三个基因型。本研究结果发现CRVO患者 TaqIB基因 B1B1基因型频率显著高于对照组,差异有统计学意义,B1等位基因频率也显著高于对照组,差异有统计学意义。表明携带 B1等位基因的个体易患CRVO,可能与CETP导致脂质代谢异常,在视网膜血管产生动脉硬化、血栓形成有关。

[1] 杨 钧.现代眼科手册 [M].北京:人民卫生出版社,1993:457.

[2] 鄢盛恺.胆固醇酯转运蛋白的研究方法与临床意义[J].国外医学临床生物化学与检验学分册,2003,24:137.