犬自身免疫性溶血性贫血的诊断

刘爱国,李发志,张祖梅,李代兵,钱 勇,田绍宁

(成都华西动物医院,四川成都610041)

自身免疫性溶血性贫血(autoimmune hemolytic anemia,AIHA)是由于犬体内产生自身抗体,与自身红细胞发生免疫反应,使红细胞大量破坏,引起的一种贫血性疾病[1]。AIHA的病因和发病机制迄今仍未完全阐明。目前对未能找到诱发因素的称为特发性或原发性AIHA,对有明确病因者称为继发性AIHA[2]。AIHA发病呈上升趋势,近一年笔者遇到5个AIHA病例。资料介绍确诊该病要做库姆斯试验,但兔抗犬球蛋白血清不容易获得,此试验开展很有难度。笔者用自身血清与自身红细胞反应诊断该病,简单易行,未见他人报道。现以最近接诊一病例为例,报告如下。

1 病史及临床症状

松狮犬,雄性,7岁,体重24 kg,2月5日来我院就诊。主诉：2月2日发病,精神沉郁,全身无力,2月3日小便呈浓茶色,4日呈酱油色,绝食2天,近1个月来饮食、环境等均未改变,家里还有1只7岁杂交母犬一切正常。临床检查：体温：38.6℃、脉搏：150次/min,呼吸：65 次/min,可视黏膜、皮肤苍白发黄,张口呼吸快速浅表,四肢无力。

2 实验室检验

2.1 血液眼观检查 取抗凝血3滴,平铺在洁净载玻片上,于明亮处可见很多红色颗粒。

2.2 血常规检查 如表1。

2.3 血清生化检查 谷氨酸氨基转移酶(ALT)：55 U/L,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)：35 U/L,碱性磷酸酶(ALP)：62 U/L,白蛋白(ALB)：25.3 g/L,总蛋白(TP)：76.4 g/L,直接胆红素(D-BIL)：12.4 μmol/L,总胆红素(T-BIL)：31.1 μmol/L,γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)：3.6 U/L,淀粉酶(AMY)：526 U/L,尿素氮 (BUN)：7.5 mmol/L,肌酐(CREA)：83 μmol/L,Ca：2.3 mmol/L,P：1.97 mmol/L,肌酸激酶(CK)：65 U/L,乳酸脱氢酯(LDH)：132 U/L,血糖(GLU)：6.1 mmol/L,胆固醇(CHOL)：6.3 mmol/L,甘油三酯(TG)：0.65 mmol/L。

2.4 红细胞形态学检查 鲜血悬滴镜检可见大量红细胞聚集成团。瑞氏染色镜检可见红细胞大小不均,大量球形红细胞,大量破裂红细胞,大量红细胞集聚成团,少量有核红细胞。煌焦油蓝染色镜检可见大量网织红细胞,约占成熟红细胞的45%。

表1 血常规检查结果

2.5 自身红细胞与自身血清反应试验

2.5.1 抽患犬静脉血液5 mL 将2 mL血液注入一次性试管中静置并分离出血清。将3 mL血液注入加有抗凝剂的一次性试管中,混匀,离心(条件设置：3 500 r/min 离心 10 min,温度 4℃[3]),将红细胞与血浆交界处的白膜层与血浆一起去除,得到少白细胞红细胞。

2.5.2 过滤并洗涤红细胞 将少白细胞红细胞放入另一次性试管中,加生理盐水5 mL,混匀,用一次性袋式输液器的网式药液过滤器过滤,离心,去上清液,再加生理盐水5 mL稀释混匀,再过滤,如此往复5次。最后一次去上清液后加1 mL生理盐水混匀,获得单个洗涤红细胞液。获得的洗涤红细胞液手工计数为2.55×1012/L。

2.5.3 对照组 取我院健康献血犬血液5 mL,按上述方法分别获得血清和洗涤红细胞液。将洗涤红细胞液用生理盐水再稀释,稀释后的洗涤红细胞液红细胞手工计数为2.80×1012/L。

2.5.4 自身红细胞与自身血清反应试验 取洁净载玻片4片,分别标注患犬 1、患犬 2、健犬 1、健犬2。患犬1、健犬1分别滴患犬、健康犬的血清、洗涤红细胞液各100μL并混匀,患犬 2、健犬2分别滴患犬、健康犬的血清50μL、洗涤红细胞液100μL并混匀。并将4个载玻片放于38.5℃无菌培养箱中静置并计时。每5 min镜检1次。

2.5.5 试验结果 见表2。

表2 自身红细胞与自身血清反应试验结果

患犬7年来身体健康,除免疫外从未到医院就诊,3年前出现过呼吸道症状,自喂抗病毒冲剂5 d后恢复正常,无其他病史、用药史;血常规显示严重贫血;镜检网织红细胞、有核红细胞比例增高,红细胞再生良好;镜检有破裂红细胞、红细胞聚集成团,生化总胆红素、间接胆红素升高,尿呈茶色、酱油色,红细胞出现溶血;自身血清、红细胞出现凝集现象;其他脏器生化指标正常,临床症状正常。综合以上确诊为犬原发性自身免疫性溶血性贫血。该犬经治疗无效,于15日晚死亡。

3 讨论

3.1 该病诊断要明确以下问题：有无贫血,什么性质的贫血,是否存在自身抗体与自身红细胞发生免疫反应。

3.2 笔者遇到的几个病例,血液中均有集结成团的红细胞,试验时,一定要过滤血液并获得单个红细胞溶液。一次性袋式输液器的网式药液过滤器,孔径为15μm±2μm(红细胞直径为6.6～7.7μm[4]),用它过滤较为理想。

3.3 用过滤、洗涤后的红细胞与自身血清反应诊断自身免疫性溶血性贫血,没见相关报道。该试验简单易行,随时可以做,治疗过程中,还可及时了解血清与红细胞凝集加重还是减轻,更能准确的对疾病的预后做出判断。

3.4 对有自身抗体与自身红细胞明显凝集时,用上述试验简单方便,对有自身抗体但不产生凝集或凝集不强时,上述试验敏感性低甚至检验结果阴性,需要做库姆斯试验。

3.5 库姆斯试验要用兔抗犬球蛋白血清,但兔抗犬球蛋白血清不容易获得,该试验很受限制。即使可以做该试验,对有红细胞出现凝集的血液也要过滤,如果不过滤,就无法判断凝集颗粒是血液中原有的还是试验中形成的。

[1] 胥洪灿,郑小波,聂奎,等.犬猫疾病诊疗学[M].重庆：西南师范大学出版社,2006：239.

[2] 李文益.自身免疫性溶血性贫血研究进展[J].中华妇幼临床医学杂志,2008,4(3)：1-4.

[3] 赵冬梅,张艳华,李广庆,等.用去白细胞血液制备洗涤红细胞方法改进的探讨[J].临床血液学杂志：输血与检验,2008,21(3)：318.

[4] 魏泓.医学实验动物学[M].成都：四川科学技术出版社,1998：190.