鹿茸粉及鹿茸醇提物对小鼠药物性肝损伤的作用

齐艳萍,李和平,夏彦玲

(1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319;2.东北林业大学野生动物资源学院,黑龙江哈尔滨150040)

扑热息痛(APAP)是应用广泛的解热镇痛药物,正常治疗剂量非常安全,但如果长期低剂量或1次性过量使用可造成严重的肝损害,其肝毒性主要与毒性代谢产物 N-乙酰-P-苯醌亚胺的堆积有关[1]。近年来,有关鹿茸的研究日益受到重视,有文献报道鹿茸多肽能促进肝细胞增殖,加速试验性肝切除小鼠的肝再生[2],但鹿茸对药物导致的肝损害是否有保护作用尚未十分清楚。本研究主要针对鹿茸对药物性肝损伤的保护作用及其相关机制进行了探讨,以期为鹿茸的研发、应用提供新思路及基础理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 鹿茸粉及醇提物均由本实验室自制,以生理盐水配制成所需浓度,4℃保存。

1.2 动物模型的建立 将APAP溶于无菌生理盐水中,一次性腹腔注射125 mg/kg剂量,制成药物性肝损伤模型。

1.3 动物分组及给药 将小鼠随机分为6组。空白组和模型组小鼠每天ig(灌胃给药)生理盐水1次,阳性对照组ig150 mg/kg联苯双酯1次,鹿茸粉组以10 mL/kg剂量ig 15%鹿茸粉溶液1次,鹿茸醇提物两组分别ig相应剂量的鹿茸醇提物。在第7天给药后,空白组ip(腹腔注射)生理盐水,其余各组均以125 mg/kg剂量ip APAP。禁食,不禁水。16 h后采集血液及肝组织样品,测定血清ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、TBil(总胆红素)、TP(总蛋白)、ALB(白蛋白)、TG(甘油三酯)及肝组织MDA(丙二醛)、SOD(过氧化物歧化酶)和NO(一氧化氮)含量,试验数据利用 Excel和 SPSS 13.0进行差异性比较分析。

2 结果

2.1 对血清生化指标的影响 本研究检测了肝细胞受损情况(ALT、AST)、蛋白合成(TP、ALB)、脂代谢(TG)及排泄(TBil)功能几个方面的血液生化指标。由表1可知,模型组小鼠血清ALT、AST、TBil和 TG明显升高,TP、ALB明显降低(P＜0.01);给予相应药物后,各组ALT、AST均有不同程度的降低,其中鹿茸醇提物2.0 g/kg剂量组差异极显著(P＜0.01)。TBil和TG大幅度降低,差异极显著(P＜0.01),而 TP、ALB含量也都有所升高,其中ALB含量升高幅度较大。

表1 鹿茸对APAP肝损伤小鼠血清生化指标的影响

2.2 对肝组织匀浆生化指标的影响 由表2可知,APAP导致小鼠肝脏MDA、NO含量明显增加,SOD活性明显降低(P＜0.01)。给相应治疗药物后,各组MDA和NO含量均不同程度的降低,SOD活性均有一定幅度的提高,但各鹿茸制品的效果均低于联苯双酯。

3 分析与讨论

APAP在肝脏内被氧化生成有毒性的中间产物N-乙酰-P-苯醌亚胺(NAPQI),与还原型谷胱甘肽(GSH)结合后排出体外[3]。当生成的NAPQI超过了GSH的解毒能力,引起GSH的耗竭,于是大量NAPQI堆积,引发氧化反应,从而导致肝损伤[4-5]。本研究从肝细胞膜、肝脏代谢功能及脂质过氧化方面来探讨鹿茸制品对APAP所致药物性肝损伤的保护作用。

表 2 鹿茸对 APAP肝损伤小鼠肝脏MDA、SOD和NO的影响

3.1 鹿茸对肝细胞膜的影响 APAP可引起肝细胞肿胀、膜的通透性增高,转氨酶即可透过细胞膜释放入血,因此,ALT、AST能够反映肝细胞的损害程度。当给予大量的 APAP后,模型组小鼠血清ALT、AST极显著升高(P＜0.01),说明大剂量APAP代谢过程中生成的过量的NAPQI,诱发生物膜系统发生脂质过氧化。给予鹿茸制品后,小鼠血清ALT、AST均不同程度的降低,这与六月雪水提取物对APAP肝损伤的作用相近[6],表明鹿茸制品对其有保护作用,但不同的鹿茸制品降低ALT、AST的水平并不一致,其中鹿茸醇提物2.0 g/kg降酶效果较好,说明其对肝脏细胞膜以及细胞内线粒体均有很好的修复功能,能抑制APAP代谢过程中的毒性物质NAPQI的过量生成,从而避免因肝内GSH耗竭引起的肝细胞坏死。

3.2 鹿茸对肝脏代谢功能的影响 肝脏的合成贮备、脂代谢以及排泄功能均能反映肝脏的功能状态。当肝脏受损时,肝细胞变性、坏死,肝脏蛋白质代谢功能发生障碍,合成贮备能力降低,血中蛋白含量下降[7];胆汁代谢发生障碍,此时肝脏转化、排泄胆红素的能力降低,血清 TBil增高,出现胆汁淤滞[8];TG作为机体储存能量的形式,其生成极低密度脂蛋白后,由肝细胞分泌入血而运输至肝外组织。肝功能失衡致使TG在肝内的合成与更新亦发生障碍。本研究中,模型组 TP、ALB含量明显降低,TBil、TG含量明显升高(P＜0.01),这一结果与相关文献的结果一致[9],提示肝脏各方面代谢功能均受到损伤。给药后,鹿茸各治疗组TP含量有所升高但幅度不大,而ALB含量升高幅度较大,以鹿茸醇提物2.0 g/kg效果最好(P＜0.01),此结果与许多保肝药物的作用相近,如黄芪总黄酮等[10],说明鹿茸醇提物能充分发挥其功效,修复损伤的粗面内质网、高尔基体,恢复肝脏的蛋白合成功能,从而抑制白蛋白、总蛋白的降低;TBil含量明显降低(P＜0.01),与中药舒肝灵的作用结果一致[11],说明鹿茸制品含有能够抑制肝细胞变性、坏死的活性因子,降低肝脏受损的程度,提高摄取、转化胆红素的能力,从而避免胆汁代谢发生障碍;TG含量也明显降低(P＜0.01),这与迷迭香对APAP肝损伤的作用结果一致[12],显示其可明显改善APAP所致小鼠肝脏脂肪变性,抑制肝细胞转换TG能力的下降,从而降低血清中TG含量,维持肝脏脂代谢功能。

3.3 鹿茸对肝脏脂质过氧化的影响 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基(OFR),其攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(PUFA),引发脂质过氧化链式反应,并形成有害产物MDA。SOD是机体清除自由基的主要抗氧化酶,其活力反映机体清除自由基的能力,而MDA可反映机体内脂质过氧化的情况,间接反映肝细胞损伤程度[13]。在各种肝损害因素作用下,肝细胞、枯否氏细胞、巨噬细胞等产生大量的NO,起着细胞毒性作用[14-16]。研究结果显示,APAP模型组小鼠肝组织SOD活性、MDA和NO含量与巴吐尔研究草棉花花瓣时建立的模型一致[17],表明成功建立药物性肝损伤模型,小鼠肝脏产生明显的脂质过氧化反应(P＜0.01)。用药后,各组SOD活性升高,MDA和NO含量降低,与芝麻素对APAP肝损伤的作用一致[18],说明鹿茸制品能提高SOD活性,清除过量的自由基,阻止肝细胞脂质过氧化,减少有害产物MDA和NO的产生,避免肝细胞的损伤,进而保护APAP所致的药物性肝损伤。

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