蒺藜皂甙对体外培养胰岛细胞胰岛素分泌的影响

李明娟 杨兰 赵俊梅

蒺藜(Tribulus terretris L.又名刺蒺藜、硬蒺藜等)系蒺藜科蒺藜属一年生草本植物，在我国大部分地区均有分布。蒺藜的传统入药部位是果实，具有平肝解郁、活血祛风、明目、止痒的功效，用于“头痛眩晕，胸肋胀痛，乳闭乳痈，目赤翳障，风疹瘙痒”［1］。蒺藜中的主要生理活性成分为蒺藜皂甙、黄酮、生物碱以及蒺藜多糖等。综合目前国内外的研究发现，蒺藜具有降低血压、利尿、抗衰老及增强中枢神经系统等作用，蒺藜全草入药治疗心血管疾病也有产品上市。同时，研究发现蒺藜皂甙对糖尿病动物模型具有明显的降血糖作用［3］。本试验采用体外培养的大鼠胰岛细胞，进一步在细胞水平上观察蒺藜皂甙对体外培养的正常大鼠胰岛细胞胰岛素释放的影响。

1 材料与方法

1.1 蒺藜皂甙的制备 蒺藜干品采自山东济南。取蒺藜全草干品机械粉碎，取蒺藜粉末用10倍量的水在100℃提取2 h，共提取3次，滤过，合并滤液 ，浓缩，沉糖，再浓缩，后用水饱和的正丁醇萃取，萃取液减压浓缩后烘干至恒重得蒺藜总皂甙，临用前用水配制。

1.2 胰岛细胞的培养

1.2.1 准备工作 环境条件:超净工作台，标准无菌间;设备条件:恒温水浴，二氧化碳培养箱，冷冻离心机(配水平转子);器材条件:手术器械(止血钳、镊子、手术剪、头皮针、注射器、20目不锈钢筛网)，5 cm培养皿，细胞培养瓶(螺纹口)，5 ml移液管，吸管，50 ml玻璃离心管，15 ml塑料离心管，小反口塞，纱布若干，解剖板。试剂条件:胶原酶p(宝灵曼公司)，Fico11400(Pharmacia公司)，1640培养基，小牛血清，D-Hank’s液，戊巴比妥钠，75%酒精，碘酒。上述准备工作严格按细胞培养的要求进行。

1.2.2 胰岛细胞分离纯化 将SD大鼠大腿肌内注射戊巴比妥钠麻醉后消毒固定，在超净工作台上做总胆管插管，注射8 ml胶原酶;分离大鼠胰腺，放入细胞培养瓶中，37℃水浴消化10 min;分离去除胰腺上的脂肪，将消化过的组织撕碎，震摇至呈细沙状;过20目筛，筛下物移入50 ml离心管，Hank’s液洗涤两次(4℃，2000rmp，2 min);所得细胞移入15 ml离心管中，Hank’s液洗涤(4℃，2000rmp，2 min);然后采用Ficoll密度梯度离心(4℃，300rmp，20 min)取第二、第三分界面细胞移入50 ml离心管，Hank’s液洗涤，1640培养液洗涤(4℃，2000rmp，2 min)，将所得细胞移入培养瓶或培养板。

1.2.3 胰岛细胞的培养 将培养瓶放置过夜(12 h)，观察胰岛细胞是否污染。其后将未污染的胰岛细胞转入24孔培养板继续培养48 h后将原液吸出，分为对照组和蒺藜皂甙给药组。给药组分别加入含有1 mg/ml，0.1 mg/ml，0.01 mg/ml的蒺藜皂甙药液孵育24 h后将药液吸出，加入含糖11.1 mol/L培养液刺激20 min，分别收集胰岛细胞进行胰岛素含量测定。

1.3 胰岛素含量测定 采用胰岛素免疫放射试剂盒(由上海市第一人民医院糖尿病研究室测定)。

2 结果

2.1 蒺藜皂甙对体外培养的胰岛细胞胰岛素释放的影响:试验结果见表2。

表1 蒺藜皂甙对体外培养胰岛细胞胰岛素释放的影响

3 讨论

实验中采用体外培养大鼠胰岛细胞，进一步在细胞水平上观察蒺藜皂甙对体外培养的正常大鼠胰岛细胞胰岛素释放的影响。结果表明:低浓度0.01 mg/ml蒺藜皂甙能够增加体外培养的胰岛细胞胰岛素的分泌，但效果不明显;中浓度0.1 mg/ml时，与对照组相比，蒺藜皂甙能够明显增加胰岛素的分泌量;高浓度1 mg/ml蒺藜皂甙组胰岛素分泌不增加，反而有所减少，是高浓度时受体已经达到饱和还是药液高浓度反馈抑制作用，还需做进一步的研究。

［1］中华人民共和国药典.化学工业出版社，2005:244.

［2］江苏新药学院编.中药大辞典.上海科学技术出版社，1999，1274-1276;2452-2453.

［3］李明娟，瞿伟菁，王煜非，等.蒺藜皂甙的降血糖作用.中药材，2002，25(6):420-422.