瓜蒌子油中天然抗氧化剂成分分析

俞 健，李赤翎

（长沙理工大学生物与食品科学学院，湖南长沙410007）

瓜蒌子油中天然抗氧化剂成分分析

俞 健，李赤翎

（长沙理工大学生物与食品科学学院，湖南长沙410007）

研究了瓜蒌子油中的天然抗氧化剂生育酚与β-胡萝卜素的含量，以及其对瓜蒌子油抗氧化性的影响；瓜蒌子油本身的抗氧化性能一部分依赖于它本身含有的α-生育酚与δ-生育酚，但非完全依赖，所以添加β-胡萝卜素可明显提高其抗氧化性能，从而为开发瓜蒌子油提供理论依据。

瓜蒌子油，生育酚，β-胡萝卜素，抗氧化性

瓜蒌子油中含有大量的不饱和脂肪酸，特别是亚油酸的含量较高。但瓜蒌子油中不饱和脂肪酸容易氧化，造成营养的损失和品质下降，同时会产生一些对人体有害的物质。虽然油脂的不饱和度直接影响着油脂的氧化稳定性，但油脂本身是否含抗氧物质，也是决定其氧化稳定性的重要因素［1-2］。生育酚是大多数植物油脂中普遍含有的一种抗氧化剂，它是6-羟基苯并二氢吡喃的衍生物。自然界存在四种生育酚的取代结构［3-4］。植物油脂所含生育酚主要为α-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚。除小麦胚芽油外，一般不含β-生育酚。生育三烯酚是生育酚的同系物，但种籽油中不含生育三烯酚［1］。各种生育酚生理功能活性依次为α＞β＞γ＞δ，而抗氧化效能的顺序为δ＞γ＞β＞α［5］。生育酚以及其它许多酚类抗氧化剂可以迅速将一个氢原子提供给脂类化合物游离基。到目前为止，关于瓜蒌子油稳定性能及其与抗氧化因素生育酚及β-胡萝卜素的关系尚未见报道。为了研究该特有资源氧化稳定性的影响因素，本研究借助HPLC法及纸色谱法对瓜蒌子油中生育酚和β-胡萝卜素进行了分析测定，并比较它们对提高瓜蒌子油氧化稳定性的作用效果，这对研究我国特有资源——瓜蒌子油的氧化稳定性机理研究具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

瓜蒌子油 本室自制；β-胡萝卜素标样、δ-生育酚标样、苯并［e］芘内标 Sigma公司；脱醛乙醇、无水乙醚、无水硫醇钠、抗坏血酸、氢氧化钾、硝酸银、氨水、石油醚、氢氧化钠、正已烷、三氯甲烷、冰乙酸、淀粉、碘化钾、硫代硫酸钠等 均为分析纯，长沙华阳化工有限责任公司。

HPLC仪 包括2台515泵、2487紫外检测器、PCM泵控板、Millennium32色谱工作站、Novapak C18（150×3.9mmID、5μL）分析柱、7725i进样器，Waters公司；679型Rancimat仪 瑞士Metrohm公司；DSY-1型电热恒温水浴锅 北京爱琦商贸中心；78HW-1型磁力搅拌器 杭州仪表电机厂；紫外可见UV-120-02分光光度计 日本岛津；R-201型旋转蒸发器 上海申生科技有限公司；FA1104型上皿电子天平 上海精天电子仪器厂。

1.2 实验方法

1.2.1 β-胡萝卜素的测定

1.2.1.1 预备试液 精确称取5g油样放入蒸馏瓶中，加30mL脱醛乙醇，10mL 50%KOH溶液，在90℃下回流皂化30min后，用冰水速冷。用石油醚提取皂化液，将提取液倒入250mL分液漏斗中，然后将皂化残渣连续提洗三次，每次约10mL石油醚，提取液并入分液漏斗中。用蒸馏水洗涤提取液至中性，用约5mg无水硫酸钠脱水，过滤。将分液漏斗及无水硫酸钠中的色素用少许石油醚洗净，洗涤液并入球形瓶中。

1.2.1.2 纸色谱 将球形瓶中的提取液置于60℃水浴温度的旋转蒸发器中减压浓缩至约2mL，再吹干，立即加入2mL石油醚定容，用微量注射器吸取200μL浓缩定容液，在层析纸的基线上迅速点样，挥干后，将点样纸置于用石油醚作展开液的层析缸中，进行层析。约2h后，取出滤纸，挥干。将位于展开剂前沿，与其它色素完全分开的胡萝卜层析带剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞试管中，剧烈振摇。

1.2.1.3 比色 用分光光度计在波长为450nm处测定溶液颜色的强度，以石油醚作参比。β-胡萝卜素的含量按下式计算：

式中：x为样品中胡萝卜素的含量，以β-胡萝卜素计，mg/100g；m1为在标准曲线上所查得的β-胡萝卜素的含量，μg；V1为点样体积，mL；V2为样品石油醚提取液浓缩后的定容体积，mL；m为样品质量，g。1.2.2 生育酚测定 样品中的生育酚经皂化及提取处理，从不可皂化部分中提取分离出来，用HPLC法测定其含量。

精确称取样品5g置于干燥接收瓶中，加入0.5g抗坏血酸，30mL脱醛乙醇，2mL 10μg/mL苯并［e］芘标准液，10mL 50%KOH溶液，于95℃回流皂化30min，冷却后，将皂化液过滤至250mL分液漏斗中，用100mL乙醚（除过氧化物）分二次冲洗皂化瓶，并入分液漏斗中。经二次萃取后，合并乙醚层。用约5g无水硫酸钠脱水，过滤后，置于旋转蒸发器中浓缩至2mL，再用N2气吹干，移入2mL脱醛乙醇溶解，待上HPLC仪。测定前，用0.5μm滤膜过滤。色谱条件如下：分析柱：Novapak C183.9mm×15cm；流动相：甲醇-水，97∶3（v/v），混匀，于临用前超声波脱气；紫外检测器波长：300nm，量程 0.02AUFS；进样量：20μL；流速：1.0mL/min。

样品中生育酚的含量按下式计算：

式中：C标为标样中生育酚的浓度；A样为样品中生育酚的峰面积；A内标1为样品中内标物的峰面积；fis为相对校正因子；V为样液的体积，mL；W为样品的质量，g；A标为标样中生育酚的峰面积；A内标2为标样中内标物的峰面积；C内标为标样中内标物的浓度。

1.2.3 β-胡萝卜素添加量对瓜蒌子油抗氧化性的影响 根据要求将分别添加0、0.02%、0.05%、0.08% β-胡萝卜素的油脂50g于100mL烧怀中，用磁力搅拌器充分混合30min后，各称取3.0g样品置于预先加热到110℃的Rancimat仪反应池中，接好测量瓶，插上双极铂电极，调节空气流量为20L/h，同时打开记录仪进行记录。以茶油为对照。

2 结果与分析

2.1 β-胡萝卜素的测定结果

4.构建产业联盟，共同提升发展。西部各省（区）应抓住国家“一带一路”倡议，充分发挥各自的优势，尽快搭建组成西部中药产业联盟，并以此为平台，优化内外部环境，优势互补，抱团发展，做大做强。不定期举办各种交流会、学术会、贸易会，也可东西联动，不断改善软环境条件，吸收东部经验和资金联合发展。使西部中药产业，由资源大省逐步成为产业大省，成为中国真正的植物药王国和中药药都。

由各β-胡萝卜素标准液测定值确定回归方程为：Y=-0.0029+0.0466X，r=0.9999

式中：Y为吸光度；X为β-胡萝卜含量，μg。

用回归方程计算β-胡萝卜素含量，测定结果见表1。

图1 β-胡萝卜素的标准曲线

表1 β-胡萝卜素测定结果

由表1可见，瓜蒌子油中不含β-胡萝卜素。

2.2 生育酚的测定结果

2.2.1 定性 依据标准物色谱图对照法，以标准溶液中δ-生育酚及内标苯并［e］芘的保留值分别确定样品色谱图中生育酚和内标组分的色谱峰，进一步确证样品中的总生育酚。瓜蒌子油中各生育酚含量很高。

图2 三种生育酚的光谱图

2.2.2 定量 生育酚为色满酚（二氢苯并吡喃-6-醇）的衍生物，在298nm附近有紫外吸收。由生育酚（δ-生育酚）系列标准液测定值确定回归方程为：A=99.3006C+0.02807

其中：A为生育酚峰面积与内标物峰面积之比。实验结果见表2。

表2 生育酚的测定结果

由表2可见，瓜蒌子油中总生育酚含量较高，其中γ-生育酚含量最高，δ-生育酚次之。δ-生育酚及α-生育酚均能显著增强瓜蒌油的氧化稳定性效能。在这两种生育酚中，δ-生育酚对瓜蒌油的抗氧化能力大大超过α-生育酚。目前，我国已批准生育酚用作食品抗氧化剂。在国外，生育酚广泛应用为食品抗氧化剂，很多国家对其使用剂量无限制。我国一般在植物油、煎炸油等食用油中的生育酚允许添加量为0.02%～0.10%。

2.3 添加β-胡萝卜素对瓜蒌子油氧化稳定性的影响

表3可以看出，β-胡萝卜素添加到瓜蒌子油中，0.08%β-胡萝卜素的效果最好。本实验研究表明，瓜蒌子油在存在生育酚这种天然抗氧化剂的同时，再加入少量的β-胡萝卜素，则既可以抑制自动氧化又可防止光敏氧化。

表3 β-胡萝卜素对瓜蒌子油氧化诱导时间的影响

3 讨论

β-胡萝卜素对植物油均有抑制氧化作用，但β-胡萝卜素若含量较高，反而呈现出促氧化作用。生育酚是一种有效的抗脂质氧化剂，在人体内能预防血栓产生，改善动脉硬化，显著降低患冠心病的几率。生育酚是大多数植物油中天然存在的抗氧化剂。抗氧化成分的抗氧化效果，不但与抗氧化剂的结构、被清除的自由基、油脂的结构、作用的环境有关，还与抗氧化剂的剂量有关。

4 结论

α-生育酚及δ-生育酚对瓜蒌子油均有较好的提高氧化稳定性效果，但β-胡萝卜素添加到瓜蒌油中，抗氧化效果更好，瓜蒌子油中含有丰富的生育酚，但不含β-胡萝卜素，瓜蒌子油本身的抗氧化性能一部分依赖于它本身含有的α-生育酚与δ-生育酚，但并非完全依赖，所以添加β-胡萝卜素后抗氧化性能提高十分明显。

［1］斯沃恩D主编，秦洪万主译.贝雷油脂化学与工艺学［M］.北京：轻工业出版社，1989.

［2］王凤玲，孙丽芹，董新伟，等.脂类的催化氧化［J］.中国油脂，1998，23（4）：52-55.

［3］韩国麒.油脂化学［M］.郑州：河南科学技术出版社，1995：105-113.

［4］汉密尔顿RJ，巴蒂A主编，胡熊飞主译.油脂的化学和工艺［M］.北京：轻工业出版社，1988，231-241.

［5］李槟榔.天然食用抗氧化剂的研究进展［J］.食品与发酵工业，1992（4）：74-83.

Analysis on the natrure oxidant in Semen Trichosanthis oil

YU Jian，LI Chi-ling
（Nature Product Institute，Hunan Agriculture University，Changsha 410007，China）

The major nature oxidants in Semen Trichosanthis oil were studied，including the content and influences to antiocidation of Semen Trichosanthis oil of β-carotene and VE.The antioxidant properties of Semen Trichosanthis oil partly depend on its own α-tocopherol and δ-tocopherol，but not entirely dependent，so adding β-carotene can significantly improve its antioxidant properties.So the experiment provided a theoretical basis the development of Semen Trichosanthis oil.

Semen Trichosanthis oil；VE；β-carotene；anoxidation

TS225.1+9

A

1002-0306（2010）11-0153-03

2009-10-30

俞健（1965-），男，本科，研究方向：食品化学。

湖南省科技厅重点项目（2008NK2011）。