覆盆子糖蛋白粗提物体内抗氧化作用研究

牛付阁，王纪平，王 芳，戴成国，段玉峰，*

（1.陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710062；2.国药集团西北医药有限公司，陕西西安710001）

覆盆子糖蛋白粗提物体内抗氧化作用研究

牛付阁1，王纪平2，王 芳1，戴成国1，段玉峰1，*

（1.陕西师范大学食品工程与营养科学学院，陕西西安710062；2.国药集团西北医药有限公司，陕西西安710001）

研究覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内抗氧化作用。采用试剂盒测定小鼠血清、肝脏、脑中的丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的活性。实验结果表明：覆盆子糖蛋白粗提物可以提高受试小鼠血清、肝脏、脑中SOD、CAT及GSH-Px的活性，而降低这些组织中MDA的含量。说明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化活性。

覆盆子，糖蛋白，体内抗氧化，动物实验

覆盆子为蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属（Rubus L.）植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的果实，含有柠檬酸、苹果酸、黄酮类、生物碱、多糖和多种微量元素。有益肾，固精缩尿之功效，用于肾虚遗尿、小便频数、阳萎早泄、遗精、滑精等症［1-4］。近年来，国内有关覆盆子的文献报道绝大多数集中在风湿性关节炎、抗诱变、肾虚遗尿，此外还用于治疗糖尿病和心血管系统疾病等方面［5-7］。国外文献中大多数为覆盆子食品方面的研究。有关药理学、化学方面的研究较少［8-11］。本文主要以正常小鼠作对照，用不同剂量的覆盆子糖蛋白粗提物喂养小鼠，各组自由饮水，自由摄食，饲喂4周后，禁食12h，摘除眼球进行眼眶采血，并解剖取肝、脑组织测定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）的活性来研究覆盆子糖蛋白的体内抗氧化作用。以期为开发覆盆子新药和活性成分提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

覆盆子 购于西安市药材市场，经生药学鉴定为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的果实；ICR小鼠 购于西安第四军医大实验动物中心；丙二醛（MDA）试剂盒、谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、过氧化氢酶（CAT）试剂盒 均为南京建成生物工程研究所生产；其余试剂 均为国产分析纯。

HHW-21CU-600型电热恒温水槽、DGX-9073B-1电热鼓风干燥箱 上海福玛实验设备有限公司；RE-52AA型旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂；SHZ -D（III）型循环水式真空泵 上海博讯实业有限公司医疗设备厂；800B型离心机 上海安亭科学仪器厂；微量移液器 日本NICHIRYO公司；LXJ-IIB型低速大容量多管离心机 上海安亭科学医学仪器厂；T6新世纪紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限公司；FW-80型高速粉碎机 河北省黄骅市新兴电器厂；JA1203型电子分析天平 上海精密科学天平厂。

1.2 实验方法

1.2.1 覆盆子糖蛋白粗提物的制备［12-13］将烘干的覆盆子，粉碎过80目筛，用石油醚80℃回流至无色，50℃水浴浸提4h，以4000r/min离心20min，滤去固体残渣，滤液真空浓缩至一定体积后加4倍体积的95%乙醇沉淀，低温静置过夜，离心，取沉淀物。将沉淀物溶于少量蒸馏水重复2次沉淀步骤。然后再加入沉淀物2～4倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，离心（3000r/min）5min，倾弃上清液，再依次加入丙酮、无水乙醚，按此操作洗涤脱水各一次。然后放置40℃真空干燥箱中让溶剂挥发，即得干燥的覆盆子糖蛋白粗品。1.2.2 动物的分组及饲喂［14-15］选取健康ICR小鼠40只，随机分为对照组和低、中、高剂量组，每组10只，雌雄各半。正常对照组小鼠每天灌服生理盐水，低、中、高剂量组每日给予覆盆子糖蛋白粗提物分别为200、400、800mg/kg·d。各组自由饮水，自由摄食，饲喂4周后，禁食12h，摘除眼球进行眼眶采血，并解剖取肝、脑、肾、胸腺、脾、心脏等器官组织，冷冻备用。

1.2.3 血清及组织匀浆的制备 血清的制备：取血试管预先加入肝素抗凝剂，并低温烘干。取血后，摇匀，即刻再放回冰浴中冷却，并于3000r/min离心5min，分离血清，然后将血清倾入另一洁净试管低温保存备用。

组织匀浆的制备：取适量湿组织加生理盐水按W∶V=1∶5在冰浴条件下用组织匀浆机制成匀浆，并于8000～10000r/min离心10min，将上清液倾入另一洁净试管低温保存备用。

1.2.4 指标测定 按照试剂盒指定的方法测定丙二醛（MDA）含量，超氧化物歧化酶（SOD）活力，谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）活力和过氧化氢酶（CAT）活力。

1.2.5 数据统计 实验结果以 ±SD形式表示，SPSS13.0统计软件进行统计比较。

2 结果与分析

2.1 小鼠器官重量变化

由表1可以看出，经过低、中、高剂量组饲喂四周的小鼠，胸腺、脾、心、肾、肝脏、脑组织等器官或组织的重量和正常对照组的对应器官相比，有所增加，但量效关系不显著。初步可以证明，饲喂覆盆子糖蛋白对小鼠身体没有损伤。但深入的毒理实验有待于进一步研究。

表1 小鼠各器官重量变化（±sD，n=10）

表1 小鼠各器官重量变化（±sD，n=10）

92.63±60 95.72±67 97.14±52 103.09±51脾（mg） 113.96±80124.48±55124.54±90123.97±39心（mg） 274.31±39285.50±36284.62±33297.45±17肾（mg） 512.33±62532.17±30542.48±73552.34±83肝脏（mg） 1350.11±39 1349.36±90 1351.08±74 1347.17±15脑组织（mg）器官 对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组胸腺（mg）940.52±81 946.91±91 973.67±30 953.33±45

2.2 丙二醛（MDA）含量的测定

从图1可以看出，三个剂量组的小鼠血清、肝脏和脑组织中的丙二醛（MDA）的含量均低于对照组小鼠对应的含量。其中低、中、高三个剂量组血清MDA含量均显著低于正常组含量（P＜0.05）；高剂量组肝脏MDA含量极显著低于正常组含量（P＜0.01）；中、高剂量组脑组织MDA含量极显著低于正常组含量（P＜0.01）。说明覆盆子糖蛋白粗提物具有明显的抗氧化作用，并且呈一定的量效关系。

图1 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内相关组织中MDA活性的影响

2.3 超氧化物歧化酶（SOD）活力的测定

从图2可以看出，随着剂量的增大，血清、肝组织和脑组织中总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力与正常对照组比较均增大。其中低剂量组与正常对照组无显著差异。中、高剂量组与正常对照组比较均有极显著差异（P＜0.01）。说明服用覆盆子糖蛋白粗提物具有提高SOD活性的作用。

图2 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力的影响

2.4 谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）活力的测定

由图3可以看出，随着剂量的增大，小鼠血清、肝组织和脑组织中GSH-Px活力越来越高。其中中、高剂量组血清GSH-Px活力和脑组织GSH-Px活力均极显著高于正常组（P＜0.01），低剂量组显著高于正常组（P＜0.05）；高剂量组肝组织中GSH-Px活力极显著高于正常组（P＜0.01），中剂量组肝组织中GSH-Px活力显著高于正常组（P＜0.05）。这说明服用一定剂量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高小鼠体内的GSH-Px活性，并且GSH-Px的活性增强的趋势与测定范围内服用的剂量成正比的关系，因此覆盆子糖蛋白具有明显的抗氧化功能。

2.5 过氧化氢酶（CAT）活力的测定

由图4可以看出，三个剂量组血清中CAT的活性都比对照组要大，高剂量组具有极显著的差异（P＜0.01），中低剂量组与对照组没有显著差异；随着剂量的增大，肝脏组织中CAT活力与正常对照组比较有所增大，低剂量组与正常组的差异性不是很明显；中、高剂量组与正常组比较均有极显著的差异（P＜0.01）。这说明服用一定剂量的覆盆子糖蛋白粗提物能提高CAT的活性。

图3 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内谷胱甘肽-过氧化物酶（GSH-Px）活力的影响

图4 覆盆子糖蛋白粗提物对小鼠体内过氧化氢酶（CAT）活力的影响

3 结论

覆盆子糖蛋白粗提物可以有效地降低小鼠血清、肝组织、脑组织中MDA的含量，特别是高剂量组都达到了极显著差异性；小鼠血清、肝组织、脑组织中的GSH-Px的活力和SOD活力都比对照组有所提高，中、高剂量组几乎全部与对照组相比有极显著差异；中、高剂量组小鼠的肝组织中CAT活力与对照组相比有极显著差异。说明覆盆子糖蛋白具有一定的抗氧化性。

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Study on antioxidation effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu

NIU Fu-ge1，WANG Ji-ping2，WANG Fang1，DAI Cheng-guo1，DUAN Yu-feng1，*
（1.College of Food Engineering and nutritional Science，Shaanxi Normal University，Xi’an 710062，China 2.Northwest Pharmaceutical Co.Ltd.Sinopharm，Xi’an 710001，China）

The antioxidant effect in vivo of glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu on mice were studied.The contents of malondiadehyde（MDA），enzyme activities of superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px）and catalase in the serum，liver/brain of mice were measured by reagent box.Experimental results showed glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu could improve the activity of SOD，CAT/GSH-Px in the serum，liver/brain，decrease the contents of MDA in the serum and the organs.ln conclusion，glycoprotein from extract of Rubus chingii Hu had strong antioxidant activity in vivo.

Rubus chingii Hu；glycoprotein；antioxidation in vivo；animal experiment

TS201.1

A

1002-0306（2010）12-0134-03

2009-12-07 *通讯联系人

牛付阁（1983-），男，硕士研究生，研究方向：植物有效成分开发与利用。