HPLC法测定五倍子油膏中没食子酸的含量

杨跃辉,姜清华,林智娟

(1.中国医科大学附属盛京医院药学部,辽宁沈阳110004;2.大连医科大学,辽宁大连116044)

HPLC法测定五倍子油膏中没食子酸的含量

杨跃辉1,姜清华1,林智娟2

(1.中国医科大学附属盛京医院药学部,辽宁沈阳110004;2.大连医科大学,辽宁大连116044)

采用高效液相色谱法测定五倍子油膏中没食子酸的含量。结果表明,五倍子油膏中没食子酸在0.1136～0.6816μg范围内线性良好(R=0.9998),回归方程为 y=3217x+25.747,平均回收率为99.54%(RSD=0.75%)。该方法准确可靠、简便易行,可用于五倍子油膏中没食子酸的含量测定。

HPLC;五倍子油膏;没食子酸

五倍子为蚜科昆虫角倍蚜或倍蛋蚜在其寄主盐肤木、青桴杨或红桴杨及同属树种植物叶上形成的虫瘿[1],异名文哈、百虫仓、木附子、花倍(角倍)、独角倍(肚倍)等,具敛肺降火、涩肠止泻、固精止遗、敛汗止血、收湿敛疮之功效[2],可用于治疗新生儿尿布皮炎[3],即新生儿红臀。五倍子对变链菌生长的抑制作用与其主要成分鞣质有关[4,5]。鞣质在医学上称为五倍子鞣酸,水解后的产物主要为6～8分子没食子酸和1分子D-葡萄糖[6],因此,通过测定没食子酸的含量,可以建立一种五倍子的含量控制方法。

五倍子油膏是以生药五倍子粉直接入药制成的一种有效预防和治疗新生儿红臀的药物。其基质甘油、凡士林、羊毛脂的加入加强了其润滑和保湿作用,更提高了五倍子油膏的持久性与保护性。生药生倍子以粉末状均匀分散于基质中,因此可以采用五倍子药材含量测定方法测定其中没食子酸的含量。

作者参考药典中五倍子药材含量的测定方法并加以改进,采用HPLC法测定了酸性条件下五倍子油膏水解后没食子酸的含量。

1 实验

1.1 试药、试剂与仪器

没食子酸对照品(批号:1108312200302),中国药品生物制品检定所;五倍子油膏,中国医科大学附属盛京医院。

甲醇为色谱纯,盐酸、磷酸为分析纯,水为重蒸水。

Agilent 1100型高效液相色谱仪,美国;电恒温水浴锅,余姚市亚星仪器仪表有限公司;CP2250型电子天平,沈阳市计量测试所;SZ-96型自动纯水蒸馏器,上海亚荣电化仪器厂。

1.2 溶液的配制

1.2.1 对照品溶液的配制

精密称取没食子酸对照品5.68 mg,溶解,用甲醇定容至100 mL,即得浓度为0.0568 mg·mL-1的没食子酸对照品。

1.2.2 供试品溶液的配制

取五倍子油膏约5 g(含五倍子生药量约0.5 g)置于100 mL具塞锥形瓶中,精密加入4 mol·mL-1的盐酸溶液100 mL,水浴加热3.5 h,趁热过滤[7～10]。精密量取续滤液2 mL于100 mL容量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀即得。

按处方比例和工艺制备无五倍子药材的阴性样品,再按上述方法制备阴性对照溶液。

1.3 色谱条件

色谱柱:Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相:水-甲醇-磷酸(85∶15∶0.085),检测波长270 nm,柱温30℃,流速1 mL·min-1,进样量10 μL。理论塔板数按没食子酸峰面积计算不少于2000。

2 结果与讨论

2.1 线性关系考察

取对照品溶液(0.0568 mg·mL-1),分别进样2 μL、4μL、6μL、8μL、10μL、12μL,以峰面积为纵坐标、进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线。拟合线性回归方程为y=3217x+25.747,R=0.9998。表明在0.1136～0.6816μg范围内线性关系良好。

2.2 精密度

精密吸取对照品溶液10μL,重复进样5次,记录峰面积。结果发现,没食子酸峰面积RSD为0.13%,表明方法的精密度良好。

2.3 重复性

取同一批号样品5份,按1.2.2方法制备供试品溶液,重复平行测定。结果发现,五倍子油膏中没食子酸峰面积的 RSD为1.70%。表明方法的重复性较好。

2.4 稳定性

取同一批号的供试品溶液,在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h分别进样10μL,记录峰面积,计算没食子酸峰面积的RSD为0.11%。表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.5 回收率

精密称取已知含量(54.12 mg·g-1)的五倍子油膏约0.5 g,加入定量的没食子酸对照品,测定没食子酸的含量,计算回收率,结果见表1。

表1 加样回收率实验结果(n=5)Tab.1 Results of recovery(n=5)

由表 1可知,平均回收率为 99.54%,RSD为0.75%。

2.6 样品含量测定

取3批样品,按1.2.2方法制成供试品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各10μL,记录峰面积,计算没食子酸的平均含量,结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)Tab.2 Determining results of sample content(n=3)

3 结论

采用HPLC法测定五倍子油膏中没食子酸的含量准确可靠,简单易行。没食子酸在0.1136～0.6816 μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.54%(RSD =0.75%)。该方法可用于五倍子中没食子酸的质量控制。

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Determination of G allic Acid Content in Chinese G all Ointment by HPLC

YANGYue-hui1,JIANG Qing-hua1,LIN Zhi-juan2
(1.Department ofPharmacy,The A f f iliated S hengjing Hospital,China Medical University, S henyang110004,China;2.Dalian Medical University,Dalian116044,China)

A HPLC method has been established to determine the gallic acid content in the Chinese gall ointment.There are good linear relationships within the gallic acid content of 0.1136～0.6816μg(R=0.9998).The regression equation isy=3217x+25.747.The average recovery of gallic acid is 99.54%and the relative standard deviation is 0.75%.This method is simple,accurtate and reliable with high reproducibility,which can be applied to determine the gallic acid content in Chinese gall ointment.

HPLC;Chinese gall ointment;gallic acid

O 657.72

A

1672-5425(2010)06-0090-02

2010-03-01

杨跃辉(1969-),女,湖南长沙人,副主任药师,研究方向:医院制剂及医院药学。E-mail:yangyh1@sj-hospital.org。