HPLC法测定罗红霉素片中罗红霉素含量不确定度评估

测量不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数[2][3]。在检测、校准实验室中，用测量不确定度对测量结果及其质量进行评定和表示已得到越来越广泛的应用。笔者将不确定度的评定与方法引入到HPLC法测定罗红霉素含量中，通过建立数学模型，找出影响测量结果不确定度的各种因素，并对这些因素进行了逐项分析及评定。

1 仪器与试药

Waters 2695高效液相色谱仪（包括2998二极管阵列检测器，Empower色谱工作站）；BP211D电子天平（德国Sartorius Basicplus）；BT224S电子天平（北京 Sartorius）；罗红霉素片（北京康蒂尼药业有限公司）；罗红霉素对照品（中国药品生物制品检定所，含量：94.1%，批号：100113-200603）；乙腈色谱纯。

2 检测方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Symmetry® C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为0.067mol/L磷酸二氢铵溶液（用三乙胺调节pH值至6.5）-乙腈（65：35）；检测波长为210nm；室温；流速：1.0ml/min。

2.2 对照品溶液的制备 取罗红霉素对照品25mg，精密称定，置25ml容量瓶中，加流动相15ml，超声处理20分钟使充分溶解，加流动相至刻度，摇匀即得。

2.3 供试品溶液的制备 供试品溶液的制备：取罗红霉素20片，精密称定，研细，混匀，取细粉70mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加流动相30ml，超声处理20分钟使之充分溶解，加流动相至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

2.4 测定 在相同条件下分别应用HPLC法测定供试品溶液与对照品溶液。按含量计算公式计算罗红霉素含量。罗红霉素含量测量结果由2次测量的平均值给出。

3 测量结果的不确定度

4 讨论

从以上分析评定中可以看出，在HPLC法测定罗红霉素含量的实验中，测量结果不确定度分量主要来自于色谱峰面积重现性和实验温度的影响。因此，实验室一方面要投入重现性较好、最大允差小的设备，维持稳定的实验室环境，另一方面检验人员应严格按照标准及操作规程进行检测，注意处理操作的一致性，这样便可进一步降低测量结果的不确定度。

通过对含量测定结果进行不确定度评定，计算出置信水平为95%的扩展不确定度U，最终的含量测定结果以x±U的形式报告，这样就科学地将含量测定过程中所有的误差都体现在最终的试验结果中，检验结果也由单一的数值变为一个范围，从而保证了我们最终的检验结论更加科学、更有说服力。