人参配伍五灵脂人参总皂苷的含量变化规律研究

北京市药品监督管理局海淀分局（100097） 李德全

中药合理的配伍组合是方剂的核心，也是复方不同于单味药的主要奥秘所在。我国古代对药物的配伍禁忌主要有“十八反”和“十九畏”的记载。人参最早记载于我国第一部药物学专著《神农本草经》，功用为：“主补五脏，安精神，定魂魄，止惊悸，明目，开心益智，久服轻身延年。”长期的医疗实践证实了人参补气药之首的地位。近年来，我国医药界更从药理、临床等方面研究了人参延缓衰老的药理、临床作用。

“人参最畏五灵脂”出自“十九畏”，人参与五灵脂一直被视为配伍禁忌，但在临床上二者也经常有配伍应用。陈馥馨从古今67424个方剂中统计到人参、五灵脂合用的有31个[1]。名老中医姜春华等亦以人参和五灵脂配伍用于临床[2]。二者配伍在毒性实验[3]、抗应激实验（游泳耗竭时间、缺氧耐受能力、低温存活时间）[4][5]都做了大量研究。而二者配伍后对药物成分方面的影响变化尚无人研究。人参总皂苷是人参的主要有效成分之一，有广泛的生物活性，在抗衰老方面有广泛的应用。目前研究报道的也较多，如潘鑫鑫[6]等研究发现，人参总皂苷有减少自由基对中枢神经系统的损伤和改善衰老模型小鼠的免疫和内分泌系统等作用，具有一定的抗衰老作用。本实验用紫外分光光度法测定人参与五灵脂配伍后其总皂苷的含量变化，考察五灵脂对人参有效成分人参总皂苷的影响，为二者配伍在临床上是否能应用于抗衰老方面做初步探讨。

1 实验用药材与材料

1.1 实验用中药材 人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根（生晒参），产地辽宁，五灵脂（鼯鼠科橙足鼯鼠Trogopterus Xanthies的干燥粪便），产地山西。

1.2 实验材料 仪器：METTLER AE240电子天平；HITACHI U2000可见紫外分光光度计，水浴锅。试剂：香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇。对照品：中国药品生物制品检定所Re（批号110754-200218）。

2 样品及有关溶液的制备与分组

2.1 分组 共分为6组，即A：人参20g单煎；B：五灵脂20g单煎；C：人参20g、五灵脂20g共煎；D：人参20g、五灵脂20g单煎后混合；E：人参20g、五灵脂10g共煎；F：人参20g、五灵脂40g共煎。

2.2 实验溶液制备 ①各组加入15倍量水煎煮两次，头煎为1小时，后倒出提取液，再加入15倍量水再煎，第二煎半小时，后合并提取液。将合并液抽滤后浓缩至与原药材1：1之量。②用等量乙醚（每次20ml）萃取4次，弃去乙醚层。再用正丁醇萃取4次（每次20ml），合并正丁醇层，水层弃去。③将正丁醇的萃取层用1%氢氧化钠洗3～4次（每次20ml），弃去氢氧化钠溶液层。后用正丁醇饱和水溶液洗至pH值在7左右。④回收正丁醇，将剩余物用甲醇溶解，定容在10ml容量瓶内。检测前用活性炭脱色（1小时，60℃水浴）

注：A是人参样品扫描曲线，B为人参皂苷Re扫描曲线，C为五灵脂样品（阴性空白对照扫描图），与基线齐平无干扰

2.3 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Re2.3mg置5ml容量瓶中，加甲醇使其溶解后稀释至刻度，作为储备溶液备用。

3 方法学研究

3.1 测定波长的确定 经过扫描，样品和对照品的最大吸收波长均为543.5±0.5nm，吸收曲线形状近似，阴性空白对照（五灵脂）无干扰。

3.2 阴性扫描对照 未显色前的人参样品扫描图，没有吸收。

3.3 线性关系考察 精密吸取人参皂苷Re对照品0.0023g置5ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.05ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml置12ml具塞试管中100℃水浴挥干剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴显色15min，冰浴冷却至常温，加入5ml冰醋酸稀释摇匀。在543.5nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，以标准品体积为横坐标计算工作曲线的回归方程为：y=3.323x-0.0196（r=0.9994）。

附表1 线性关系考察

附表3 稳定性考察

附表4 精密度考察

附表5 重现性考察

由附表1、附表2的实验结果可见，人参皂苷对照品在0.023～0.184mg范围内质量与吸收度呈良好线性关系。

3.4 稳定性考察 在0，4，8，12，16小时每个时间点精密量取样品0.04ml，置10ml具塞试管中100℃水浴挥干溶剂，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，60℃水浴显色15min，冰浴冷却至常温，加入5ml冰醋酸稀释摇匀。在543.5nm处测定吸收度，由附表1的数据计算RSD＝1.65%，样品溶液稳定性良好。实验数据见附表3。

3.5 精密度考察 分别精密吸取同一份人参样品5份0.04ml，同上法显色后测定吸收度，实验数据见附表4，由附表4的数据计算RSD=1.26%，本实验精密度良好。

3.6 重现性考察 人参平行做5份样品，取0.04ml，显色同3.5，在543.5nm处测定吸收度。由附表5的数据计算RSD=3.2%，本实验重现性良好。

3.7 回收率实验 精密称取已知量样品，准确加入一定量的标准品0.1ml，按前述方法处理，显色进行含量测定，实验数据见附表6。平均回收率98.96%。本法具有良好的回收率。

4 有效部位样品总皂苷元含量测定

量取按上述方法制备的样品各0.04ml同上显色方法，随行空白，在543.5nm处测定吸收度，并由工作曲线计算含量，见附表7。

附表6 加样回收率

附表7 样品含量

5 结果与讨论

测定结果表明，二者配伍后人参总皂苷含量下降，人参五灵脂混合煎煮后皂苷含量下降尤其明显，且随着五灵脂用量的增大，人参总皂苷含量下降明显，成正比关系，即人参:五灵脂用量为2:1时含量下降16%，人参:五灵脂用量为1:1时含量下降31%，人参:五灵脂用量为1:2时含量下降51.74%。

二者1：1用量单独煎煮后再混合组的人参皂苷含量变化不大，仅下降1.7%，而1：1用量混合煎煮则下降约31%，二者相差很大，显示混合煎煮的方式使人参总皂苷含量显著下降。

上述数据表明五灵脂的用量和二者的煎煮方式是影响人参总皂苷含量的两个重要因素。

人参五灵脂配伍后使人参的皂苷类有效成分含量下降，这些变化必然对人参的药理作用产生影响，由于皂苷类成分在抗衰老和对中枢神经系统影响突出，因此在临床应用人参益智和抗衰老的作用时，应避免与五灵脂一同使用。本实验表明人参和五灵脂在益智和抗衰老的范围内的配伍使用应属于七情中的“相恶”范畴，“人参最畏五灵脂”的说法是有一定科学依据的。