市售不同产地丹参饮片中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ及丹参酮ⅡA的含量比较

首都医科大学附属北京友谊医院（100050） 钟萌

北京市海淀区药品检验所（100083） 李东辉 杨帆

丹参是唇形科植物丹参的根及根茎，具有祛瘀止痛、活血通络、清心除烦的功效。丹参的有效成分包括脂溶性成分（二萜醌类）和水溶性成分（酚酸类），均具有一定的生理活性。由于受产地、品种、气候和生态环境及炮制方法等的影响，不同丹参饮片所含主要活性成分差异较大，《中华人民共和国药典》丹参项下脂溶性成分以丹参酮ⅡA作为质控指标[1]。近年来的研究表明，丹参脂溶性成分还包括隐丹参酮、丹参酮Ⅰ等，且含量较高，活性较强[2] [3]。

笔者收集了河北、山东、江苏、河南和安徽等主产地的丹参饮片，包括不同栽培方法的丹参饮片，用反相高效液相色谱法对其进行了隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量测定和比较，为丹参饮片的选优及临床用药提供一定的参考依据。

1 仪器与试药

LC-2010高效液相色谱仪（日本岛津公司），SPD-20A紫外可见检测器，CLASS-VP色谱工作站。KQ118超声波清洗器，BP211 1/10万电子分析天平。隐丹参酮（中国药品生物制品检定所，批号110852-200305，供含量测定用）；丹参酮Ⅰ（中国药品生物制品检定所，批号0867-200205，供含量测定用）；丹参酮ⅡA（中国药品生物制品检定所，批号110766-200417，供含量测定用）；丹参饮片（购于不同饮片厂，1、2号:河北；3、4号：山东；5、6号:江苏；7、8号：河南；9、10号：安徽；丹参饮片均经北京市海淀区药品检验所韩杰副主任中药师鉴定）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择 色谱柱：kromasilTMC18分析柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相甲醇-水（75：25），流速1ml·min-1，检测波长270nm，柱温30℃，进样量10μl[4][5]。在该色谱条件下，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的保留时间分别为15.9min、17.3min和27.4min。

隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA与样品中其他组分分离良好，理论板数按隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA对照品峰计均大于5000。缺隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA阴性对照无干扰（结果见附图1，附图2）。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成每毫升含隐丹参酮85μg、丹参酮Ⅰ102μg和丹参酮ⅡA107μg的混合溶液，然后至棕色瓶中，作为对照品储备溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取供试品（丹参药材和饮片）粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率200W，频率40kHz），超声提取10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得[2]。

2.4 线性关系的考察 精密吸取隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA混合对照品溶液2、4、6、8、10、12μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以对照品的进样量X（μg）对峰面积的积分值Y进行线性回归。

隐丹参酮：Y＝5.2×105X+1.8×105，线性范围：1.45～10.19μg，R＝0.9998；丹参酮Ⅰ：Y＝5.3×105X-2.7×105，线性范围为2.16～15.12μg，R＝0.9996；丹参酮ⅡA：Y＝5.7×105X+1.0×105，线性范围为3.15～22.06μg，R＝0.9997。

2.5 精密度试验 取隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA混合对照品溶液10μl，连续进样6次，测定峰面积，结果隐丹参酮的RSD为0.98%，丹参酮Ⅰ的RSD为1.08%，丹参酮ⅡA的RSD为0.86%，精密度良好。

2.6 重现性实验 取同一供试品，按2.3项下操作制备供试品溶液6份，按2.1项下色谱条件测定，结果隐丹参酮的RSD为1.13%，丹参酮Ⅰ的RSD为0.95%，丹参酮ⅡA的RSD为1.25%，重现性良好。

2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，室温放置，分别在0、1、2、4、8、12、24 h进样，按2.1项下色谱条件测定，结果隐丹参酮的RSD为1.05%，丹参酮Ⅰ的RSD为0.85%，丹参酮ⅡA的RSD为1.15%，表明供试品在24 h内稳定。

2.8 加样回收率实验 取已知隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量的供试品（批号6174241）0.5g，6份，各加入一定量的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA对照品。

按2.1项下色谱条件测定，计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA回收率分别为99.12%、98.96%、99.23%，RSD分别为1.21%、0.98%、1.05%。

2.9 样品测定 取不同产地的丹参饮片，按2.3项下操作制备供试品溶液，按2.1项下测定，结果见附表。

3 讨论

3.1 系统适用性试验 本试验曾参考中国药典2005年版一部丹参药材[2]项下含量测定方法，发现供试品色谱不仅有丹参酮ⅡA色谱峰，而且还有隐丹参酮、丹参酮Ⅰ色谱峰，通过查阅文献[2]，确立了本试验的方法。

3.2 供试品溶液制备方法 供试品超声提取时间的考察，以甲醇为提取溶剂，实验结果表明，超声提取40分钟，隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量已基本保持不变，故确定超声提取时间为40分钟。

3.3 不同产地丹参饮片的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量差别较大，山东的野生丹参饮片含量最高，安徽的栽培丹参饮片含量最低，而同一地区中野生品的含量普遍高于栽培品。这与丹参饮片的产地与加工方法有关，所以应对丹参药材的产地加以分类，同时饮片的加工方法应规范统一。

附表 不同产地丹参饮片中的隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA（n=3）