HPLC-MS测定大黄鱼中环丙沙星与恩诺沙星含量

苏 坦 吴美芳

福建省宁德市药品检验所，福建 宁德 352100

大黄鱼肉质细腻，味道鲜美，为闽东特产。近年来野生大黄鱼数量逐渐稀少，人工养殖大黄鱼规模逐年扩大。为有效控制人工养殖大黄鱼的质量，提高百姓的生活水平，我所开展水产品药物残留的检测。目前测定大黄鱼中环丙沙星与恩诺沙星的残留主要是采用农业部颁布的1077号公告-1-2008[1]。我们针对其方法进行部分改进，使得方法更加准确、快速、简便。

1 仪器与试药

Agilent1200-6410 LC/MS QQQ(美国)；CP225D电子分析天平(北京塞多利斯)；IKA MS3震荡器(德国)；R201BL旋转蒸发器(上海申生)；TGL-40B离心机(上海安亭)；BF2000-M氮气吹干仪(北京八方世纪)。

环丙沙星对照品(130451-200302中检所)

恩诺沙星对照品(C：14861400德国Dr.Ehrenstorfer公司)

甲酸(色谱纯，美国TEDIA公司)甲醇(色谱纯，德国MERCK公司)乙腈(色谱纯，德国MERCK公司)

其余试剂均为分析纯

2 色谱条件

色谱柱：Zorbax SB Aq (2.1x100mm，3.5μm)

流动相：0.1%甲酸溶液—乙腈=(82：18)

柱温：25.0℃ 流速：0.3ml/min 进样量：10μL

图1

3 质谱条件

离子化模式：电喷雾离子源(ESI)，正离子模式；

离子喷雾电压：4KV 干燥气：10L/min

干燥气温度：350℃ 雾化气压力：40psi

检测条件见表一：

表一 监测的离子对

图2

A：环丙沙星质谱图(288，245) B：恩诺沙星质谱图(316，245)

4 大黄鱼样品前处理

取样品5.0g±0.01g，加冰乙酸2mL，加乙腈20mL，振摇2min，4500转/min离心5min，加15mL二氯甲烷，手动振摇并放气，精密量取下层溶液10mL移入鸡心瓶中，40℃旋转蒸发至干，加入1mL20%乙腈水溶液旋涡混合90秒，加入2mL乙腈饱和的正乙烷混合10秒，12000转/min离心5min，取下层溶液用0.2μm滤膜过滤，取续滤液10μL进样。

5 加标标准曲线

分别称取环丙沙星与恩诺沙星对照品适量，加甲醇制成1.0mg/mL的对照品储备液。依次用甲醇制成浓度为5、10、20、40、100、200ng/mL的溶液按“4”项下方法进行处理后进样。

环丙沙星回归方程为：Y=5.1386X+1.07468 R=0.9998

恩诺沙星回归方程为：Y=0.11914X+0.2658 R=0.9993

本实验的线性范围为5～200ng/mL；

定量下限为1.0μg/Kg

检出限为1.0μg/Kg（S/N=10）

6 方法精密度

精密量取环丙沙星与恩诺沙星对照品储备液适量，用甲醇制成浓度为20ng/mL的溶液加至空白大黄鱼糜样中。按“4”项下方法进行处理后进样，重复进样6次。环丙沙星与恩诺沙星浓度的RSD(n=6)分别为0.65%、0.38%。

7 重复性实验

因阳性样品获取不易，故取环丙沙星与恩诺沙星对照品储备液适量，用甲醇制成浓度为20ng/mL的溶液6份空白大黄鱼糜样中，按“4”项下方法进行处理后进样，环丙沙星与恩诺沙星浓度的RSD分别为1.2%、0.85%。

8 加样回收率

精密量取环丙沙星与恩诺沙星对照品储备液适量，用甲醇制成浓度为20ng/mL的溶液6份空白大黄鱼糜样中，按“4”项下方法进行处理后进样。环丙沙星与恩诺沙星的平均回收率分别为96.5%、100.2%，RSD分别为1.0%、1.3%

小结

(1)鱼肉中的水分对本实验有干扰，部颁标准采用无水硫酸钠除水，我们经过实验发现结果无显著变化。

(2)将前处理中取全量的乙腈提取液改为精密量取10mL，可提高方法的可操作性，得出的结果更准确。

[1]农业部1077号公告-1-2008.水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法.