多酚对草鱼生长、肝脂及免疫功能的影响

马贵华 曹双俊 黄 亮

草鱼(Ctenopharyngodon idellus)因其饲料利用率高、生长迅速，已发展成为我国淡水养殖的当家品种。尤其是近几年饲料养鱼的迅猛发展，现已迅速发展到池塘、水库及湖泊等淡水养殖水域均主养草鱼，网箱单养草鱼也较为普遍。但由于高密度养殖[1]、水体环境日趋恶化和营养成分的失衡等诸多因素，出现越来越多的以肝脏疾病为主要特征的草鱼疾病，以及其机体免疫力下降而导致草鱼病毒性出血病的高发病率和高死亡率等，给当前我国的水产养殖业造成了极大的危害[2-3]。因此，研究与开发对草鱼具有护肝作用和提高免疫功能，且不影响其生长的免疫增强剂已成为当务之急。

α-苯基苯并吡喃(phenyl-benzopyran)是从一种分布广泛的植物中提取的多酚类物质，具有较强的生物学活性，无毒副作用、无残留、不产生耐药性[4]，为了验证其能否作为草鱼的饲料添加剂开发利用而设计了本试验,研究草鱼摄食了添加α-苯基苯并吡喃的饲料后对其生长性能、肝脂代谢及免疫功能的影响,旨在为该物质作为免疫增强剂在草鱼养殖业上应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验所用草鱼来自德宁水产饲料有限公司顺德市试验渔场，室内试验在德宁水产饲料有限公司的水生生物研究中心进行。α-苯基苯并吡喃由德宁水生生物研究中心提供。

1.2 试验设计

根据2006、2007年连续两年在草鱼养殖生产饲料中添加α-苯基苯并吡喃对草鱼护肝及提高其免疫力的效果,设计3个试验组,分别为含α-苯基苯并吡喃20 mg/kg(A组)、40 mg/kg(B组)2个剂量试验组和1个对照组(C组,不添加)，每个试验组设5个重复，每个重复30尾。1 500尾草鱼种暂养一段时间后，从中选取体长（12.5～13.5）cm的健康草鱼450尾随机分别饲养于15个300 L的圆形玻璃缸水族箱中。整个试验在室内全自动循环水系统中进行，水温控制在25～27℃。试验期的水质指标控制范围为：溶氧大于 5.0 mg/l；酸碱度为 6.5～7.5；氨氮浓度低于 0.5 mg/l。每2周对养殖系统进行清洗1次，试验共60 d。

1.3 饲养管理

对每组给定的饲料严格按最大摄食量投喂，投喂率为鱼体重的2.5%～3.0%，每天投喂3次，分别为8：00、13：00、和18：00。每天精确记录各组的饲料投喂量及各池鱼的活动情况、摄食情况、发病死亡情况等。每天清洗1次滤水棉垫，10～15 d换水1次等。

1.4 试验日粮

自配制加工基础日粮，各试验组饲料是在基础饲料上分别将 20 mg/kg(A 组)、40 mg/kg(B 组)α-苯基苯并吡喃均匀混合到配料中，经逐级预混加工制成的颗粒饲料。各试验组饲料成分含量见表1。

1.5 样品的采集及指标测定

将鱼停食1 d，使之排空粪便后开始试验，从每个水族箱中取鱼10尾，称重后击打头部致昏迷，立即解剖，先心脏采血，置离心管中静置2 h后，离心10 min，分离血清；再取得肝脏和背部肌肉样，分别称其重量。所有样品取得后立即置于-20℃冰箱中保存待测。

表1 基础日粮配方组成（%）

从所取肌肉样品，分别采用105℃常压干燥法、凯氏定氮法、索氏抽提法及550℃灼烧法测定肌肉和肝脏的水分、粗蛋白、脂肪和灰分含量[5]。

1.6 养殖试验指标

特定生长率（%/d）=（lnW-lnWo）/d×100；

饵料系数=消耗的饲料量/鱼体增重量；

肝体比=肝脏重/鱼体重×100；

肥满度=W/L3×100。

式中：W——试验结束时鱼体尾均重；

Wo——试验开始时鱼体尾均重；

d——养殖试验天数；

L——试验结束时鱼体长。

1.7 生理功能指标及测定方法

溶菌酶活力测定采用冷冻干燥的溶壁微球菌测定方法[6]；超氧化物歧化酶活力测定采用邻苯三酚自氧化方法[7]；丙氨酸转氨酶和天门冬氨酸转氨酶活力测定采用King氏法[8]测定。

1.8 数据处理

用 SAS（Release6.12）统计软件 ANOVA、GLM 法进行方差及协方差分析，Duncan's法检验法进行多重比较。表中结果表示为平均数±标准差（X±SD）。

2 试验结果

2.1 α-苯基苯并吡喃对草鱼生长的影响（见表2）

表2 α-苯基苯并吡喃对草鱼生长性能的影响

从表2中可以看出，添加40 mg/kg(B组)α-苯基苯并吡喃的试验组的净增重明显优于对照组（P＜0.05），而且饵料系数最低，这说明在饲料中添加40 mg/kg α-苯基苯并吡喃对提高草鱼的生长性能具有一定的作用。

2.2 α-苯基苯并吡喃对草鱼品质的影响比较

本试验测定了鱼体营养组成（包括水分、粗蛋白、粗脂肪和粗灰分）、内脏重占体重的百分比和肥满度作为部分评价草鱼鱼体品质的指标（见表3）。

表3 α-苯基苯并吡喃对草鱼肌肉品质的影响（%）

根据表3结果，对照组与试验组之间草鱼水分、灰分含量、内脏比差异不显著，表明α-苯基苯并吡喃对草鱼水分、灰分含量和内脏比无影响。从鱼体蛋白含量看，添加α-苯基苯并吡喃的两个试验组要高于对照组鱼体蛋白含量，但差异不显著。脂肪的数据显示，随着添加量增加，鱼体脂肪含量呈下降趋势。添加40 mg/kg(B组)α-苯基苯并吡喃的试验组肥满度要显著高于对照组(P＜0.05)。

2.3 草鱼血清功能指标分析

草鱼血清功能指标见表4，试验B组草鱼血清中ALT和AST显著低于对照组(P＜0.05)，而血清中超氧化物歧化酶（SOD）和溶菌酶（LSZ）的活力却显著高于对照组(P＜0.05)。表明α-苯基苯并吡喃可以通过提高草鱼肝脏的解毒功能来提高鱼体的免疫能力。

表4 α-苯基苯并吡喃对草鱼血清转氨酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶的影响

2.4 α-苯基苯并吡喃对草鱼脏器指标的影响（见表5）

表5 α-苯基苯并吡喃对草鱼肝脏的影响

从解剖中可以看出，对照组草鱼的肝脏偏大，出现黄色脂肪沉积的现象，表5的数据也反映了这一情况，对照组与试验组相比，肝体比，肝脂明显偏高，已出现脂肪肝症状，试验组各项数据明显低于对照组，且随α-苯基苯并吡喃添加量的增加，各项数据显示下降趋势。

在本次试验中，有意提高饲料中棉粕、菜粕的比例，两者之和超过50%，添加少量豆粕、没有添加鱼粉等高质量蛋白源。棉、菜粕用量过大，里面的有害物质会对肝脏造成较大的毒副作用。鱼类脂肪肝的形成原因很多，除了营养不平衡外，因有毒、有害物质造成脂肪肝的报道很多，可以认为，饲料中棉、菜粕用量过大很可能会导致脂肪肝。若进一步恶化，就会诱发肝胆综合症，而在饲料中添加一定量的α-苯基苯并吡喃，意在观察可否显著改善肝功能，可否预防脂肪肝的出现。

3 讨论

在本试验中，添加量达到40 mg/kg α-苯基苯并吡喃可显著提高试验组草鱼的净增重(P＜0.05)，可显著提高草鱼的肥满度(P＜0.05)，并对草鱼鱼体品质没有造成影响。

如何评价养殖草鱼的各项生理功能还是一个很值得研究的复杂课题，本试验仅选择血清转氨酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶这几个常规指标，希望能够在一定程度上反映试验草鱼的肝功能、免疫和防御能力，以便探讨试验的饲料原料对草鱼生理机能的影响。

转氨酶是体内催化转氨基作用的酶，广泛存在于机体组织。正常新陈代谢过程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性。当肝、肾、心等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀、坏死会导致大量的转氨酶释放到血流中，从而引起血清丙氨酸转氨酶、天门冬氨酸转氨酶活性显著升高，血清转氨酶活力越高表明肝胰脏受损伤越严重。本试验检测了这两个指标，结果显示试验组的ALT和AST显著低于对照组，表明α-苯基苯并吡喃对草鱼肝脏有保护功能。

溶菌酶（LSZ）是破坏细菌细胞壁的酶，其活力大小可以在一定程度上反映出鱼体抵抗细菌侵袭的能力。超氧化物歧化酶（SOD）是机体超氧化自由基的清除剂，广泛分布于细胞内和各种体液间，能阻止并消除自由基的连锁反应，以保护机体免受损害，SOD活力的增加有助于提高鱼体的自我保护能力。本试验中，试验组的SOD和LSZ活力均有所提高，添加40 mg/kg α-苯基苯并吡喃则可显著提高草鱼血清中ALT和AST的活力。

试验表明：α-苯基苯并吡喃可通过提高肝脏的解毒功能以保护肝脏来预防草鱼肝胆综合症的出现、可提高草鱼的免疫力以提高鱼体对外界的防御能力，并且具有一定的促长效果。

[1]王文博,李爱华,汪建国,等.拥挤胁迫对草鱼非特异性免疫功能的影响[J].水产学报,2004,28(2):139-144.

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[3]喻运珍,王小玲.黄芩甙对草鱼肝功能及免疫机能的影响[J].水利渔业,2006,26(3):97-98.

[4]马贵华,陈道印,刘六英,等.多酚对河蟹免疫功能的影响[J].饲料工业,2007,28(4):9-11.

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[7]张龙翔.生化实验方法和技术（第二版）[M].北京:高等教育出版社,2003:217-223.

[8]陈玉春,顾雪飞,刘敏.5种中草药对鲤血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及红细胞过氧化氢酶活性的影响[J].淡水渔业,2007,37(5):11-13.