HPLC法测定不同产地黄连饮片中生物碱的含量

罗文汇 李养学 胥爱丽 孙冬梅

广东省中医研究所（510095）

黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Fanch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎。具有清热燥湿，泻火解毒的功效，用于湿热痞满，呕吐吞酸，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，心悸不宁，血热吐衄，目赤，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。黄连有效成分为多种生物碱[1]。本文采用高效液相色谱法以盐酸小檗碱为对照，分别计算表小檗碱、黄连碱、巴马汀和小檗碱的含量，比较了8个产地黄连饮片，为更好的控制黄连饮片质量提供了依据。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（美国）；Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平（瑞士）；Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱。盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制品检定所，批号：110713-200910。乙腈为色谱纯试剂（默克），水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18柱（4.6mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50）（每100mL加十二烷基磺酸钠0.1g）[2]；检测波长：345nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃[3]。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在100℃干燥5h的盐酸小檗碱对照品适量，加流动相制成每1mL含盐酸小檗碱240.60μg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品0.1g，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相80mL，超声处理（功率250W，频率40kHz）40min，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性范围的考查

精密量取盐酸小檗碱对照品溶液1.0、2.0、3.0、5.0、7.0mL加流动相定容至10mL，在上述色谱条件下重复进样2次，每次10μL，测定峰面积值，以峰面积平均值和浓度的值进行回归处理，得回归方程Y=3.53974378-37.505392；相关系数r=0.99994结果表明，盐酸小檗碱在0.2406～1.6842μg范围内线性良好。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液（48.12μg/mL）10μL分别进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.21。

2.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液10μL分别于0、1、2、4、6、8h进样，测定峰面积，结果RSD为0.29，表明供试品在8h内稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号样品（四川峨眉；批号：20091101）6份，分别精密称定，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算盐酸小檗碱的含量为6.96%，RSD为0.77%。

2.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（四川峨眉；批号：20091101），分别精密加入一定量的盐酸小檗碱对照品，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定，测得平均回收率为98.49%，RSD为1.20%。结果见表1。

2.9 10批样品的测定结果

取10个批号的黄连打粉，每个批号取0.1g精密称定，分别按供试品溶液制备方法制备，得供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色色谱仪，测定，以盐酸小檗碱对照品

表2 样品中生物碱含量测定结果

图1 盐酸小檗碱对照品HPLC图

图2 供试品溶液HPLC图

的峰面积为对照，分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量，用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱色谱峰的相对保留时间确定。

小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱的峰位，其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内，即得。表小檗碱的相对保时间为0.71，黄连碱的相对保留时间为0.78，巴马汀的相对保留时间为0.91，小檗碱的相对保留时间为1.00[4]。各批黄连的生物碱含量量测定结果见表2、图1、图2。

3 小 结

黄连饮片主要含有生物碱，采用单一对照品为标准对照峰进行其他生物碱的含量测定，可以节省对照品的使用。从实验结果看，各地黄连饮片品质存在着差异四川洪雅的生物碱含量最高，可根据不同研究目的选择合适的产地。

[1]曾秀芳,曾建亭,张洪等.不同产地黄连的质量评价[J].郧阳医学院学报,2009,28(2)：151-152.

[2]肖平,李三新.反相高效液相色谱法测定五味黄连丸中盐酸小檗碱的含量量[J].中南药学,2009,7(11)：879-880.

[3]罗小泉,吴国庆,河海峰等.RP-HPLC法测定黄连及酒黄连中3种生物碱的含量[J].江西中医药,2009,40(12)：74-75.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010年版,一部)[S].北京：中国医药科技出版社,2010.