亲子鉴定中男性个体Amelogenin基因座X片断缺失一例报道

胡锡阶，刘祖林，万卫红

(1.遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室；2.遵义医学院附属医院法医学鉴定中心法医物证鉴定技术室，贵州遵义563003)

亲子鉴定中男性个体Amelogenin基因座X片断缺失一例报道

胡锡阶1，2，刘祖林1，2，万卫红1，2

(1.遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室；2.遵义医学院附属医院法医学鉴定中心法医物证鉴定技术室，贵州遵义563003)

男性个体；Amelogenin基因座；X片断缺失；报道

我鉴定中心对亲子鉴定案例进行鉴定分析时，检出1例男性个体Amelogenin基因座X片断缺失，其STR分型图上只存在Y染色体Amelogenin扩增产物，而无X染色体Amelogenin特异性扩增产物，出现AMELX等位基因缺失，现报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象亲子鉴定受检者争议父37岁(实验室编号：2008-0035-1),子5岁(实验室编号：2008-0035-2)。

1.2 方法DNA的提取采用固相法提取，检材为EDTA-K2抗凝静脉血；试剂为Qiagen公司的Generation Capture Column；用美国ABI公司的产品AmpFlSTR誖IdentifilerTM试剂分别对15个STR基因座(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539D、2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA、)和1个性别基因座Amelogenin按技术手册所给条件进行PCR复合扩增，3100 Avant遗传分析仪进行电泳分离，并通过GeneScan Software V3.7软件、Genotyper Software V3.7软件进行DNA的STR基因分型。后加做Promega公司的PowerPlex16体系,除Amelogenin等相同基因座外，增加其独有的Penta D、Penta E基因座，使检测基因座增加到17个。等位基因分型结果见表1，Amelogenin基因座分型图谱见图1、图2。

2 结果和讨论

表1 STR基因分型结果

图1 Identifile体系STR分型的Amelogenin基因座图谱A：等位基因分型标准物ladder；B：父；C：子。父亲检样的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

从表1分析可以看到，常染色体上的17个STR基因座的分型在此案例中都符合孟德尔遗传规律，经计算其PI（父权指数）为5243925.22，RCP（父权相对机会）为99.999980930%；尽管父亲的X染色体上Amelogenin等位基因缺失，但大多数情况下在STR分型中Amelogenin只是生物样本性别鉴别的有效方法，并不用于亲权指数的计算，也不影响亲权结论的得出，因此在这个案例中我们作出的是认定亲生血缘关系的结论。

图2 PowerPlex16体系STR分型的Amelogenin基因座图谱A：子；B：父；C：等位基因分型标准物ladder。父亲检样的AMELX等位基因缺失，只存在AMELY等位基因

Amelogenin是编码牙釉蛋白的基因，为X、Y染色体同源基因,其特异PCR引物最早由FSS（英国法庭科学服务部）设计，这种引物PCR扩增X和Y染色体可同时分别得到106pb和112bp的特异性产物[1]。正常男性的Amelogenin基因座分型表现为XY，正常女性则分型表现为XX。本案例在用Identifiler体系进行分析时，发现争议父的Amelogenin基因座的分型图谱上只存在Y特异片段的谱带，而无X特异片段的谱带，出现AMELX等位基因缺失。不同公司设计的引物有可能存在差异，利用不同公司试剂盒检测相同基因座能在较大程度上避免产生无效等位基因,因此，为了避免不同STR商品试剂盒中引物带来的影响，我们用PowerPlex16体系来再次验证分析结果，性别基因座Amelogenin上同样是X片断缺失，两个不同公司试剂盒检测结果一致，可以不考虑“假”突变。

本鉴定中心是首次发现这种缺失，有资料显示这一现象在男性的检验中是3/7000的比例[1]。通常情况下，无论是具有正常染色体核型的男性（46，XY）和女性（46，XX），还是性反转病人（46，XX男性和46，XY女性），因都不可能缺少X染色体，所以AMELX等位基因缺失变异不会导致性别的错判，但如果在产前诊断中，通过这种方法进行性染色体数目异常定量检测[2]，对一些核型是47，XXY（Klinefelter综合征）的胚胎，可造成染色体数目判断错误，从而干扰产前诊断的结果。陈爱萍等对这种AMELX等位基因缺失的样本进行了序列分析，结果显示在其引物结合区发生了两种类型的点突变，并报道其突变率为0.042%[3]，这些突变影响了引物与DNA模板的结合和DNA链的延伸,导致扩增失败，造成AMELX等位基因的缺失。另外，STR分型时Amelogenin基因座的非正常结果不仅出现在X染色体上，Y染色体上也有Amelogenin等位基因的缺失[4]，AMELY等位基因的缺失常导致DNA的STR分型时男性被误判为女性,如果用此方法进行产前性别鉴定[5]，可造成伴性遗传病胎儿出生的风险，也可在一些刑侦案件上造成性别错判,因此，对于这些个案，我们应引起高度的重视。在这次鉴定分析中，争议父除了进行DNA的STR分型，还作了染色体核型分析，其核型为正常的46，XY。

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R394.3[文献标识码]B[文章编号]1000-2715（2010）01-0079-02

2009-12-30]