维拉帕米在大鼠体内的药代动力学

唐国凤

(广东省深圳市宝安区人民医院药剂科,广东深圳,518101)

维拉帕米是第一代钙离子拮抗剂,临床上主要用于心律失常、心绞痛和高血压的治疗。目前尚未见有研究维拉帕米在大鼠体内相关药动学特性的报道。本文建立HPLC法测定维拉帕米在大鼠血浆中浓度的方法,并研究了其在大鼠体内的药代动力学特征。该方法简便、快速、准确,能较好地应用于维拉帕米血药浓度的测定,可为人体药代动力学研究提供参考。

1 实验材料

1.1 仪器

AgiLent 1100型HPLC仪,UV检测器,离心真空浓缩仪(Bio Tron公司),Sigma 2 K15C台式高速离心机(Sigma公司)。

1.2 药品与试剂

维拉帕米(纯度≥98%,由中国药品生物制品检定所提供),乙腈(色谱纯),MiLLipore超纯水,肝素(150 U/mg),其它试剂为分析纯。

1.3 实验动物

SPF级SD大鼠:体重(200±20)g,雄性,购于湖北省疾病预防控制实验动物研究中心,合格证号:SCXK(鄂)2003-0007.

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱:AgiLent ecLipse C18(4.6 mm×150 mm,5 μ m);流动相:乙腈-0.1%甲酸水溶液(V∶V=40∶60);流速:1.0 mL/min;检测波长:254 nm;进样量:20 μ L;柱温:25 ℃。

2.2 血浆样品的处理

精密量取血浆 100 μ L,加入 10 μ L 内标溶液,300 μ L乙腈,涡旋振荡5 min后,12 000 r/min离心10 min,取上清液置于离心真空浓缩机中45℃挥干,残渣用 100μ L流动相复溶,12 000 r/min离心5 min,取上清液 20 μ L进样。

2.3 动物实验

选取健康SD大鼠6只,禁食12 h,全程不禁水,次日以28 mg/kg剂量灌胃,给药后10、20、30、45、60、120、180、300 、480 min 眼底静脉丛取血0.3 mL于肝素处理的1.5 mL离心管中,5 000 r/min离心10 min,取血浆,于-20℃保存待测。

3 结 果

3.1 方法的专属性

在上述色谱条件下,测得空白血浆、加维拉帕米和内标的空白血浆、大鼠灌胃维拉帕米的血浆样品的色谱图。血浆中内源性物质不干扰盐酸维拉帕米及内标的测定。

3.2 线性范围

取大鼠空白血浆100 μ L,加入10 μ L 维拉帕米系列对照品溶液,10μ内标溶液,配制成不同浓度的维拉帕米标准样品,按2.2项操作,以维拉帕米与对内标的峰面积比值(Y)对维拉帕米的浓度(X)作图,得线性回归方程为 Y=0.224X+0.034,r=0.998(n=6),线性范围:20.0～400.0 ng/mL。

3.3 精密度和准确度

配制含维拉帕米 40.0、240.0、360.0 ng/mL(低、中、高)3个浓度血浆样品,连续测定3 d。以当天的标准曲线计算盐酸维拉帕米的浓度 ,求得方法的精密度和准确度,结果见表1。

表1 方法的精密度和准确度

3.4 提取回收率

配制含维拉帕米 40.0、240.0、360.0 ng/mL 3个浓度血浆样品,以测得的目标物的浓度与相应标准对照品浓度比值作为提取回收率,结果见表2。

表2 血浆中维拉帕米和内标的提取回收率

3.5 稳定性

配制含维拉帕米 40.0、240.0、360.0 ng/mL 3个浓度血浆样品,分别置于室温下保存24 h和-20℃冰箱中保存5 d后处理并测定,考察样品的稳定性.结果样品测定的RE均<10%,稳定性良好。

3.6 维拉帕米在大鼠血浆中的药代动力学研究

大鼠灌胃维拉帕米后,实验数据采用 3P97药代动力学软件进行分析。根据拟和优度值及A IC最小原则 ,结合测量值与估算值间的相关性、数据的精密度 ,得相关药动学参数。

4 讨论

据报道,维拉帕米控制血压所需的有效浓度为20～500 ng/mL,但其存在明显的个体差异,血药浓度可相差10倍以上。故个体间有效剂量差别较大,需个体化给药。有关生物样品中维拉帕米的分析方法报道较多,主要有高效液相色谱(HPLC)-紫外检测法、HPLC-荧光检测法和高效毛细管电泳法。本研究建立的高效液相血浆药物浓度测定方法,样品处理简便、标准曲线线性较好,精密度和灵敏度均能够符合药动学研究和治疗药物监测的需要。