食用菌液体母种纯化技术

聂建军，殷海善，李兆斌，王 铮

（山西省农业科学院农业资源综合考察研究所，山西太原030006）

食用菌液体菌种是通过液体培养得到的食用菌菌种，简单地讲，是指生长在液体培养基中用于繁殖下一代的菌种或栽培菌丝体，即以菌丝体所存活培养基的存在形态来命名的[1]。

在菌丝体培养过程中，液体母种（液体培养的斜面母种）是食用菌液体培养的核心环节，菌种质量的好坏直接关系到食用菌栽培的成败以及其产量的高低和质量的好坏。液体培养基由于培养条件与固体培养基有所不同，因此对菌种有其独特的要求。液体培养基营养丰富，分布均匀，温度、pH等条件适宜，细菌及其他杂菌在这样的培养液条件下更易繁殖。通常细菌繁殖一代只需20～30 min，如果液体培养菌中进入一个细菌，繁殖15 h后，细菌数量可达到10亿个[2]，这样大量杂菌会造成所需制备的液体菌种染菌酸败。但笔者在试验中发现，带有微量杂菌的菌种接到固体培养基上基本不影响菌种的萌发和吃料，接入菌瓶或菌袋仍能正常生长。

本研究采用木屑滤菌法和药物滤菌法（木屑培养基中加0.5%多菌灵），对用于液体培养的斜面母种进行纯化，以期达到液体培养的要求。

1 材料和方法

1.1 供试菌种

供试菌种为申香6号香菇（Lentinus edodes），引自上海市农业科学院。

1.2 菌种培养基

1.2.1 斜面母种PDA培养基 马铃薯200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，水 1 000 mL，pH 自然[3]。

1.2.2 液体培养基 玉米粉6%，麸皮2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，维生素 B110 mg/L，pH 自然[4]。

1.3 试验方法

1.3.1 液体母种纯化 将未纯化菌种、木屑滤菌法纯化菌种、药物滤菌法纯化菌种、木屑滤菌法和药物滤菌法纯化（高度纯化）菌种分别接入PDA斜面试管，25℃下培养12 d。

1.3.2 接种与培养 250 mL三角瓶装液体培养基40 mL，接入0.5 cm2等量菌块3块，使气生菌丝一面向上悬浮，28℃静置24h。然后放入往复式恒温振荡器内，28℃，150 r/min条件下培养4 d[5]。

1.4 测定方法

1.4.1 菌球数量测定 用吸管吸取1 mL菌液在玻璃板上摊成薄薄一层，用接种针将菌球分开，直观计数，如此重复10次，取其平均值。

1.4.2 菌球直径测定 培养结束后，随机选取10个菌球排成一排，在玻璃板下衬坐标纸测量10个菌球直径，重复3次，然后计算单个菌球的平均直径。

2 结果与分析

2.1 不同纯化方式菌种在斜面PDA培养基上的表现

取不同纯化处理的菌种，每个接5支试管，25℃恒温培养，3 d后开始测日平均生长速度，每隔3 d测1次，并观察其长势。

由表1可知，高度纯化菌种日平均生长速度最快，达4.88 mm/d；药物滤菌法次之，为4.62 mm/d，二者与未纯化菌种之间差异极显著。高度纯化菌种与药物滤菌法纯化所得菌种之间差异达显著水平，并且菌丝生长最旺盛，说明经高度纯化的菌种活性最强[6]。

2.2 未纯化和高度纯化菌种对固体培养基和液体培养基污染率的影响

未纯化和经过高度纯化的PDA斜面母种分别在接种机前和超净工作台中接到固体锯末为主料的原种瓶[7]和用250 mL容量三角瓶盛装的液体培养基中，每种培养基接10个，每支PDA斜面母种分两部分，1/2接固体培养基，1/2接液体培养基，25℃恒温培养。

从表2可以看出，同样的斜面菌种接到固体培养基上能够正常生长，接到液体培养基上却大比例染菌[8]，而经高度纯化处理的菌种污染率极低，说明染菌与接种方式无关。由此可见，对用于液体菌种生产的普通斜面母种进行纯化处理是相当必要的。

表1 菌丝生长速度多重比较（SSR法）和菌丝长势

表2 不同纯化方式对培养基的污染结果

2.3 未纯化菌种与高度纯化菌种在液体培养基中的表现

2种不同处理的菌种分别接入液体培养基中，28℃静置24 h，然后在28℃，150 r/min条件下，恒温振荡培养4 d。

从表3可以看出，高度纯化过的菌种接到液体培养基上比未纯化的菌种具有萌发快、产生的菌球量大、菌球均匀一致而且不易沉淀等特点。

表3 不同纯化方式菌种在液体培养基中的培养结果

3 结论

试验表明，经过木屑滤菌法和药物滤菌法纯化的菌种较未纯化菌种生长速度快，菌丝生长旺盛。经方差分析得出，二者之间差异极显著。这对于其他菌种的活化具有借鉴意义。

采用木屑滤菌法和药物滤菌法纯化的菌种，去除了细菌和霉菌等杂菌的污染[9]，在液体培养时不仅污染率低，而且萌发快，产生的菌球量大，菌球均匀一致且不易沉淀，符合液体培养对菌种的特殊要求。

经过药物滤菌法纯化的菌种，活性比未纯化菌种有明显提高，这可能与培养基中的药物刺激有关，但是否会对菌种的生物学特性有所改变、在实际生产栽培中对产量有无影响，还有待于进一步研究。

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［7］ 吴国定.杨树木屑栽培毛木耳试验[J].山西农业科学，1990（1）：18.

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