HPLC法测定注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷的含量

王冬梅

注射用复方甘草酸苷主要用于治疗慢性肝炎，改善肝功能异常。注射用复方甘草酸苷主要由甘草酸单铵盐、甘氨酸和L-盐酸半胱氨酸三种成分组成。本文以HPLC法测定注射用复方甘草酸苷中甘草酸单铵的含量，检测方法灵敏，结果准确，适用于甘草酸单苷的含量测定。

1 仪器与试药

高效液相系统（Waters 2695泵，Waters 2996二极管阵列检测器，Waters Empower色谱工作站）；乙腈为色谱纯。样品来源：江苏扬州中宝药业有限公司；样品批号：20030729、2003073、20030731。参比样品来源：日本米诺发源制药株式会社（进口注册证号：H20030185），参比样品批号：00344。甘草酸单铵对照品：成都圣诺科技发展有限公司，HPLC纯度99.5%。

图 1 甘草酸苷峰面积与其浓度的线性关系图

表 1 甘草酸苷回收率试验结果

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18，5 μ，4.6×250 mm，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长254 nm，流动相：乙腈-0.01 mol/L 磷酸溶液（38∶62），流速 1.0 ml/min，在室温下操作，理论板数按甘草酸苷计算应不低于2000。

2.2 供试品溶液的制备 精密称取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流动相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml的溶液，作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备 甘草酸单铵对照品适量，用注射用水溶解，加流动相制成甘草酸单铵530 μg/ml（相当甘草酸苷 400 μg）的对照溶液。

2.4 线性关系考察 精密量取甘草酸单铵对照品54.6 mg（相当于甘草酸苷对照品41.2 mg），置50 ml量瓶中，用水定容至刻度， 分别取 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 ml置 10 ml量瓶中，用流动相稀释至10 ml，使每1 ml中含甘草酸苷329.6 μg、370.8 μg、412.0 μg、453.2 g、494.4 μg 的溶液。 分别取 10 μl注入液相色谱仪，记录各溶液的主峰面积，并以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程：A=1 0036C-23912（n=5，r=0.9998）。 甘草酸苷在 329.6～494.4μg/ml，峰面积与其浓度呈良好线性关系，其线性关系见图1。

2.5 重复性试验 取线性测定中浓度为412.0 μg/ml样品，连续进样 6次，测得峰面积分别为 4 094 830、4 089 490、4 093 948、4 093 766、4 089 363、4 091 630， 平均 值为 4 092 171，RSD 0.06%。结果表明，测定方法的重复性很好。

2.6 稳定性试验 取线性测定中浓度为412.0 μg/ml样品，分别于 0、4、8、12、24 h 进样，记录峰面积，分别为 4 085 787、

2.7 回收率试验 按高、中、低三个浓度梯度，精密称取甘草酸单铵对照品约10.6、13.25、15.9 mg（相当于甘草酸苷8、10、12 mg）各3份，置25 ml量瓶中，另按处方比例加入其它组分，加水稀释至刻度，摇匀，备用。另取甘草酸单铵对照品13.4 mg（约相当于甘草酸苷10 mg），置25 ml量瓶中，加氨试液0.2 ml和水少许溶解，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，照甘草酸苷测定项下操作，计算回收率，结果见表1，可见该法的回收率符合方法学要求。

2.8 甘草酸苷的含量测定 精密称取本品10 mg，用5 ml注射用水溶解，置25 ml量瓶中，加流动相至刻度，制成甘草酸苷400 μg/ml溶液，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液2.5 ml置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成甘草酸苷100 μg/ml溶液，作为预试液。取预试液10 μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰峰高约为满量程的80%～90%，再取供试品溶液10 μl，注入液相色谱议，记录色谱图。4085592、4078651、4089232、4083496，平均值为 4084552，RSD 0.10%。此样品于24 h内进行测定，RSD%为0.10%，说明样品在24 h内相对稳定。另取甘草酸苷对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。依本法测定三批样品，结果为，其标示量（%）分别为20030729，101.10；20030730，103.29；20030731，100.02。 其参比样品为103.19。

3 讨论

注射用复方甘草酸苷为甘草酸单铵盐、盐酸半胱氨酸、甘氨酸制成的注射用粉剂，主要用于治疗慢性肝炎，改善肝功能异常，也可用于治疗湿疹、皮肤炎，荨麻疹，目前广泛地应用于临床。本文所讨论的用高效液相色谱法对注射用复方甘草酸苷中甘草酸单苷含量进行测定方法的准确度和精密度良好，专属性强，能有效控制样品中甘草酸单铵的含量符合含量测定的方法学要求，适用于本品的测定。