头花蓼抗氧化活性研究

闫杏莲，李昌勤，刘瑜新，常星，康文艺#（1.河南大学第一附属医院药剂科，开封市 475001；河南大学药学院天然药物研究所，开封市 475004）

头花蓼抗氧化活性研究

闫杏莲1＊，李昌勤2，刘瑜新2，常星2，康文艺2#（1.河南大学第一附属医院药剂科，开封市 475001；河南大学药学院天然药物研究所，开封市 475004）

目的：研究头花蓼抗氧化活性。方法：分别用石油醚、乙酸乙酯、甲醇提取头花蓼，用清除DPPH自由基、清除ABTS自由基和铁离子还原/抗氧化能力测定法，对头花蓼体外总抗氧化活性进行评价，并与6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸及阳性对照丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）比较。结果：头花蓼有较好的体外抗氧化活性。其甲醇提取物具有很强的清除DPPH自由基、ABTS自由基及还原Fe3+的能力，总抗氧化能力远远超过BHT的作用。结论：在3种提取物中，头花蓼甲醇提取物具有最高的抗氧化能力，乙酸乙酯提取物次之。3种方法中，DPPH方法和ABTS方法相关性（r＝0.991 7）最高。

头花蓼；抗氧化活性；二苯代苦味酰基；2，2′-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐；铁离子还原/抗氧化能力

＊主任药师。研究方向：中药药理与临床药学。E-mail：xinglian55@yeah.net

#通讯作者：教授，博士后。研究方向：中药活性成分及新药研发。电话：0378-3880680。E-mail：kangweny@hotmail.com

头花蓼为蓼科植物头花蓼Polygonum capitatumBuch.-Han.ex D.Don的干燥全草或地上部分，又名太阳草、石莽草、四季红等。主产于江西、湖北、广西、云南、贵州等地，为贵州苗族用药。其具有清热解毒、利尿通淋与活血止痛等功效，用于治疗痢疾、肾盂肾炎、膀胱炎、尿路结石、风湿痛、跌打损伤、疮疡湿疹[1]。头花蓼全草主要成分为黄酮、醛、酮、醇及萜类化合物[2]。最初认为没食子酸[3]是头花蓼的主要有效成分，进一步研究认为黄酮类也可能是其有效成分，具有抗炎、抗病毒、抗菌等作用[4]。头花蓼除黄酮类成分外，其所含的有机酸类成分也被证实为药理活性成分[5]，药理活性主要有抗菌、降温及利尿作用[6]。刘志军等[7]从头花蓼中分离出黄酮和酚酸类化合物，通过化学发光法，发现它们具有清除氧自由基O2-·、·OH自由基以及H2O2的能力。目前笔者尚未见利用清除二苯代苦味酰基（DPPH）[8，9]自由基、清除[2，2'-连氨-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二氨盐]（ABTS）自由基以及铁离子还原/抗氧化能力（FRAP）方法对头花蓼总抗氧化能力评估测定的文献报道。

为了进一步丰富头花蓼抗氧化活性研究内容，笔者采用清除DPPH自由基、清除ABTS自由基和FRAP方法，对头花蓼体外总抗氧化活性进行了考察，并与阳性对照丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）抗氧化活性进行了比较，以为其进一步研究提供理论基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

UV-2000型紫外-可见分光光度计（上海尤尼可仪器有限公司）；旋转蒸发仪（日本东京理化公司）；电子天平（美国梅特勒-托利多仪器有限公司）；CS-H1型混合器（北京博励阳科技公司）。

1.2 试药

头花蓼于2008年1月采集于贵州省都匀地区，经河南大学天然药物研究所生药教研室李昌勤副教授鉴定为真品，标本存放于河南大学天然药物研究所；DPPH（日本东京化成工业株式会社）；ABTS（美国Fluka公司）；6-羟基-2，5，7，8-四甲基苯并二氢吡喃-2-羧酸（Trolox，美国Aldrich公司）；Fe3+-三吡啶三哑嗪（TPTZ）、BHA、（BHT）均由比利时Acros organics公司提供。

2 方法

2.1 头花蓼活性成分的提取

头花蓼地上部分阴干，粉碎，石油醚浸泡12 h后，于索氏提取器中连续回流提取3次，每次1 h，浓缩，得石油醚提取物（PCPE）。挥干溶剂后，依次用乙酸乙酯、甲醇浸泡12 h，回流提取3次，每次1 h，分别得乙酸乙酯提取物（PCEE）和甲醇提取物（PCME）。

2.2 抗氧化活性筛选方法

2.2.1 DPPH方法：按照文献[10]，将样品用甲醇配制成一系列浓度，取0.1 mL样品加入3.5 mL DPPH甲醇溶液（0.06 mmol·L-1），混合30 min后测定515 nm波长处吸光度。每份样品平行操作3次，取平均值，计算出清除率，并计算出半数抑制率（IC50）。

2.2.2 ABTS方法：按照文献[11]，配制ABTS自由基工作液。将样品用甲醇配制成一系列浓度，取0.15 mL样品加入2.85 mL ABTS自由基工作液，混合，放置10 min后，在734 nm波长处测定吸光度。每份样品平行操作3次，取平均值，计算出清除率，并计算出IC50。

2.2.3 FRAP方法：按照文献[12]，将样品用甲醇配制成一系列浓度，取0.2 mL样品加入3.8 mL新鲜配制的TPTZ工作液，混匀，37℃反应30 min后测定593 nm波长处吸光度。每份样品平行操作3次，取平均值，计算出清除率，结果以Trolox当量表示。

3 结果

3.1 头花蓼对DPPH自由基的清除作用

PCME和PCEE均有很好的清除DPPH自由基的能力。PCME清除DPPH自由基的能力（IC50＝2.98 μg·mL-1）远远强于阳性对照BHT（IC50＝18.71 μg·mL-1），约为其6.28倍，也强于BHA的能力（IC50＝3.20 μg·mL-1）；PCEE清除DPPH自由基的能力（IC50＝15.34 μg·mL-1）比 BHT强，约为 BHA 能力的20.83%；由于PCPE清除DPPH自由基的初筛抑制率太低，故其IC50未测定。头花蓼3种提取物和阳性对照BHA、BHT对DPPH自由基的清除能力顺序为：PCME＞BHA＞PCEE＞BHT＞PCPE。头花蓼不同溶剂提取物的抗氧化活性见表1。

表1 头花蓼不同溶剂提取物的抗氧化活性Tab 1 Antioxidant activity of the different extr acts of P.capitatum

在试验的浓度范围内，质量浓度在1.74 μg·mL-1时，PCME和PCEE对DPPH自由基的清除率分别是34.32%和8.85%。随其质量浓度的增加，清除率也增高。当质量浓度增加到13.89 μg·mL-1时，两者的清除率分别增高到90.82%和46.86%。说明头花蓼提取物清除DPPH自由基的能力与其质量浓度呈正量效关系，即随着提取物用量的增加，对DPPH自由基的清除率也增高。PCEE在质量浓度为27.78 μg·mL-1以下时，清除率几乎随质量浓度增大而线性增加；PCME质量浓度在6.94 μg·mL-1以下时，清除率几乎随质量浓度增大而线性增加，在6.94 μg·mL-1以上时，清除率几乎不变，说明抗氧化作用已接近饱和，再增加提取物的用量，清除率变化不大。抗氧化剂对DPPH自由基的清除作用见图1。

图1 抗氧化剂对DPPH自由基的清除作用Fig 1 Scavenging effect of antioxidant on DPPH free radical

3.2 头花蓼对ABTS自由基的清除作用

PCME对ABTS自由基的清除能力很强（IC50＝2.54 μg·mL-1），超过阳性对照BHT（IC50＝7.72 μg·mL-1），约为BHT清除能力的32.89%，比BHA（IC50＝1.88 μg·mL-1）的作用略弱；PCME清除ABTS自由基的能力约为PCEE能力的5.63倍；而PCPE清除ABTS自由基的初筛抑制率过低，故IC50未测定。头花蓼3种提取物和阳性对照BHA、BHT对ABTS自由基的清除能力顺序为：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。

3.3 头花蓼对Fe3+的还原能力

3种提取物中，PCME还原Fe3+的能力（FRAP＝2 902.26±92.22 μmol TE·g-1）比阳性对照BHT的能力（FRAP＝1 581.68 ±97.41 μmol TE·g-1）强，约为 BHT能力的1.84倍，约为BHA（FRAP＝6 633.04±114.04 μmol TE·g-1）的43.67%；PCME还原Fe3+的能力约为PCEE还原能力的4.22倍，约为PCPE还原能力的22.26倍。头花蓼3种提取物和阳性对照BHA、BHT对Fe3+的还原能力顺序为：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。

3.4 3种方法的相关性分析与比较

将3种抗氧化方法测定的结果分别进行相关性分析。DPPH方法和ABTS方法、DPPH方法和FRAP方法、ABTS方法和FRAP方法的相关系数分别为0.991 7、0.940 5、0.975 2。结果表明，DPPH方法和ABTS方法相关性最高。

4 讨论

头花蓼具有较好的抗氧化作用，其强弱程度取决于提取溶剂。研究结果表明，其3种提取物及阳性对照BHA、BHT总的体外抗氧化能力的顺序为：BHA＞PCME＞BHT＞PCEE＞PCPE。即随着提取溶剂极性的增高，相应的头花蓼提取物的抗氧化能力随之增强；其中PCME总的抗氧化能力很好，强于BHT。

[1]国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草（第6卷）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：646.

[2]高玉琼，代泽琴，刘建华，等.头花蓼挥发性成分研究[J].生物技术，2005，15（3）：55.

[3]吴遒居，王德仁.石莽草化学成分的研究[J].中草药，1985，16（4）：5.

[4]李勇军，骆宏丰，王永林，等.头花蓼黄酮类化学成分的研究[J].中国药学杂志，2000，35（5）：300.

[5]任光友，常凤岗，卢素琳，等.石莽草的药理研究[J].中国中药杂志，1995，20（2）：107.

[6]刘 明，罗春丽，张永萍，等.头花蓼、飞龙掌血的镇痛抗炎及利尿作用研究[J].贵州医药，2007，31（4）：370.

[7]刘志军，戚 进，朱丹妮，等.头花蓼化学成分及抗氧化活性研究[J].中药材，2008，31（7）：995.

[8]谢学明，李熙灿，钟远声，等.龟板体外抗氧化活性的研究[J].中国药房，2006，17（18）：1 368.

[9]朴 田，莫晓燕，林瑞峥.赤芍总苷提取液体外清除自由基和抗凝血活性的研究[J].中国药房，2007，18（9）：643.

[10]常 星，刘瑜新，康文艺.拳参抗氧化活性研究[J].精细化工中间体，2009，39（2）：28.

[11]康文艺，李彩芳，宋艳丽.蝉翼藤抗氧化酮成分研究[J].中国中药杂志，2008，33（16）：1 982.

[12]李彩芳，宋艳丽，刘瑜新，等.珍珠菜的抗氧化活性[J].精细化工，2008，25（12）：1 193.

AntioxidantActivity ofPolygonum capitatum

YAN Xing-lian（Dept.of Pharmacy，The FirstAffiliated Hospital of Henan University，Kaifeng 475001，China）
LI Chang-qin，LIU Yu-xin，CHANG Xing，KANG Wen-yi（Institute of Natural Products，Pharmacy School of Henan University，Kaifeng 475004，China）

OBJECTIVE：To investigate the antioxidant activity ofPolygonum capitatum.METHODS：The total antioxidant activity ofP.capitatumwas assayed by three methods，such as 1，1-diphenyl-2-picryl-2-picrylhydrazyl（DPPH）radical scavenging，[2，2′-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid]diammonium salt（ABTS）radical scavenging，and ferric reducing antioxidant power（FRAP）assay.The results were compared with 6-hydroxy-2，5，7，8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid（Trolox）and positive control butylated hydroxyanisole（BHA），2，6-di-tert-butyl-4-methylphenol（BHT）.RESULTS：The results showed thatP.capitatumhad good antioxidant activity in vitro.The methanol extract showed higher scavenging activity against DPPH radical，ABTS radical，and reducing antioxidant power of TPTZ，and the methanol extract had higher total antioxidant activity than that of BHT.CONCLUSION：Among three kinds of extracts fromP.capitatum，the methanol extract shows the highest antioxidant activity，followed by ethyl acetate extract.The results of DPPH are correlated with that ofABTS assay（r＝0.991 7）.

Polygonum capitatum；Antioxidant activity；DPPH；ABTS；FRAP

R285；R946.81

A

1001-0408（2010）39-3659-03

2009-11-29

2010-04-16）