白术、莪术、连翘混合油β-环糊精包合前后性质研究

赵东洋，李先荣，倪艳，陈艺文，李林

(山西省中医药研究院，山西太原 030012)

白术、莪术、连翘混合油β-环糊精包合前后性质研究

赵东洋，李先荣*，倪艳，陈艺文，李林

(山西省中医药研究院，山西太原 030012)

混合挥发油;β－环糊精;GC－MS

目的:对β－环糊精包合前后的白术、莪术、连翘总混合油的化学成分及各油比例变化进行研究分析。方法:采用薄层色谱法对包合物进行定性鉴别，GC－MS对化学成分进行分离鉴定。结果:薄层鉴别试验，说明包合物已形成;经GCMS分析，包合前后混合油主要成分基本一致，但白术、莪术、连翘各比例发生变化。结论:白术、莪术、连翘总混合油经β－环糊精包合后化学成分基本没变，但比例发生了一定的改变。

挥发油是一类具有芳香气味、在常温下能挥发的油状液体的总称。现代药理学研究发现挥发油具有抗肿瘤、抗菌、驱虫及抗过敏作用，同时对中枢神经、呼吸系统以及平滑肌等都有广泛的药理作用［1］。但挥发油性质不稳定，水溶性差，给临床用药带来很大的不便，采用β－环糊精包合技术使挥发油在β－环糊精分子中形成一种可释放的固体粉末，防止挥发性成分损失，便于提高稳定性和制剂生物利用度。

据相关文献报道，可获知白术、莪术油具较强的抗肿瘤作用［2，3］，而连翘对抗肿瘤有一定的辅助作用［4］。将此三味药按一定比例组成复方，其抗肿瘤效果明显优于各单味药的抑瘤效果。笔者采用β－环糊精包合技术制备总挥发油包合物，能更大程度保留有效成分，并通过薄层色谱和GC－MS对混合挥发油包合前后的化学性质进行的研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器BP211D 十万分之一电子天平，德国赛多利斯公司;CX－150型超声波清洗机，北京天海双龙医疗设备公司;SH－4型磁力搅拌器，北京北德科学器材有限公司;80－2台式低速离心机，上海安亭科学仪器厂;Agilent5973MS－6890GC气相质联用仪，美国安捷伦公司。

1.2 试药中药白术、莪术、连翘均符合《中国药典》2005年版法定标准(购于山西省中医药研究院中药房);β－环糊精(购于广东省郁南县环糊精厂，纯度98%以上);莪术醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号10185－0104);其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 包合物制备工艺研究

2.1.1 挥发油的提取取白术、莪术、连翘三味药材分别粉碎置于圆底烧瓶中;加入相应倍量的水，浸泡，振摇混匀。按照药典方法［5］分别提取8 h、6 h、5.5 h，收集挥发油，用乙醚萃取数次，合并乙醚提取液，低温挥净乙醚，即得到3种药材的挥发油，密封保存。根据前期药理试验最佳抑瘤效果配方比例即白术油－莪术油－连翘油为10∶4∶1，配置混合油溶液，避光保存，备用。

2.1.2 包合物的制备精密称取取2.1.1项下混合油1.5 g，加入无水乙醇1.5 mL，超声至清亮，制成混合挥发油的无水乙醇溶液，备用。称取β－环糊精15 g，按其5倍量比例加入蒸馏水，加热使溶解制成过饱和溶液，置磁力搅拌器上至规定温度55℃，缓慢滴加混合挥发油无水乙醇溶液，边加热边搅拌1.5 h，放冷，置冰箱冷藏24 h，抽滤，30～60℃石油醚洗至无挥发油气味，低温真空干燥后研磨，即得白色粉末状的混合挥发油β－环糊精包合物。

2.2 薄层定性鉴别

称取包合物1 g，置离心管中，加乙酸乙酯5 mL，超声处理15 min，离心，倾出上清液为乙酸乙酯提取液。残渣加无水乙醇5 mL，超声处理15 min，放置24 h，离心，倾出上清液为无水乙醇提取液。再精密称取2.1.1项下混合挥发油0.375 g于5 mL量瓶中，加乙酸乙酯定容，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)—乙酸乙酯(9∶1)为展开剂展开，取出晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在110℃烘至斑点显色［6］，结果，混合挥发油包合物的乙酸乙酯提取液无相应斑点。包合物无水乙醇提取液与混合挥发油的乙酸乙酯对照液有相应斑点，且包合前后混合油斑点个数一致，而且斑点色泽、大小基本一致，可以推断包合前后混合油化学成分基本没变。

2.3 挥发油包合前后GC－MS研究

2.3.1 色谱条件GC条件:HP－5(0.25 mm×30 m，0.25 μm)石英弹性毛细管柱色谱柱;采用程序升温，初始60℃，保持3 min，以5℃/min升至120℃，然后以3℃/min升至225℃;进样口温度为200℃;载气为高纯氦气;进样量1.0 μL;分流比为20∶1;MS条件:EI离子源;电子能量70eV;接口温度280℃;离子源温度为230℃;回极杆温度150℃;电子倍增电压2300V;质量扫描范围29～350amu。

2.3.2 供试品的制备

2.3.2.1 包合物混合油溶液的制备称取包合物1 g 4份，分置4个15 mL具塞离心管中，加入无水乙醇10 mL，混匀，密封，超声15 min后放置过夜。次日离心(2 500 r/min/10 min)，倾取上清液合并，置于50 mL圆底烧瓶中，旋转蒸发至1 mL，转移至10 mL量瓶中，三氯甲烷定容，作为供试品［7］。2.3.2.2白术、莪术、连翘总混合油溶液制备精密称取2.1.1项下白术－莪术－连翘(10∶4∶1)混合油0.75 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作为供试品。

2.3.3 阴性样品溶液制备

a)缺连翘混合油溶液:按比例精密称取白术－莪术(10∶4)0.7 g，用三氯甲烷定容于10 mL量瓶中，精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作为阴性白术、莪术混合油。

b)缺莪术混合油溶液:按比例精密称取白术－连翘(10∶1)0.55 g，同上法制备，作为阴性白术、连翘混合油。

c)缺白术混合油溶液:按比例精密称取莪术－连翘(4∶1)0.25 g，同上法制备，作为阴性莪术、连翘混合油。

2.3.4 对照药材挥发油溶液制备分别精密称取白术油、莪术油、连翘油0.5 g、0.2 g、0.05 g于10 mL量瓶中，三氯甲烷定容。分别精密吸取1 mL于5 mL量瓶中定容，作为对照白术油、莪术油和连翘油。

2.3.5 GC－MS结果与分析按上述条件对上述样品进行GC－MS分析，并用质谱图库进行计算机检索和面积归一化法计算，结果见图1～8和表1。利用GC－MS对白术、莪术、连翘总混合油及其包合物混合油进行分析，分离鉴定了11个化合物，包合前后化学成分基本没变。通过对图1～图8的混合油、包合油、对照药材挥发油及其阴性样品混合油液GC－MS图分析比对，可知1、2、3号峰代表连翘;5、8、10代表莪术;4、6、7、9、11代表白术。也可以得出连翘油包合后相对含量有比较明显地下降;莪术油含量有所增加;白术油的相对含量增加幅度较大。通过β－环糊精包合前后，混合油中白术、莪术和连翘各油的比例发生了一定程度的改变。

图1 白术、莪术、连翘混合油

图2 包合物混合油

图3 连翘油

图4 白术、莪术油

3 讨论

3.1 薄层定性鉴别试验证明了包合物已形成，包合前后无论是斑点的个数、位置，还是大小和色泽基本没有改变，可以推断混合油包合前后主要成分无明显变化。

图5 莪术油

图6 白术、连翘油

图7 白术油

图8 莪术、连翘油

表1 包合前后保留时间和相对百分含量

3.2 经GC－MS分析，更进一步证明包合前后的混合油化学成分基本没变，但混合油中白术、莪术、连翘油组成比例发生了改变。白术、莪术、连翘混合油是多组分组成的复方，化学成分复杂，各组分化学结构和理化性质差别较大，因此，β－环糊精对混合油中不同成分包合能力可能有所差异。经β－环糊精后，莪术油相对含量增加，白术油含量增加较明显，而连翘油下降比例较大。这种变化也不排除是由于混合油复方中连翘含量很低，相同分析方法，连翘误差较大所引起。再者，文章分离鉴定了大约混合油中85%的主要成分，而其余成分包合前后的变化情况及其对混合油的比例是否有影响此文章还未做研究，有待进一步考察。而经β－环糊精包合，白术、莪术、连翘混合油中各油比例的改变是否会对混合油包合物抑瘤率有显著影响则是下一步研究的目标。

［1］滑艳，邓雁如，汪汉卿.各种挥发油的药理活性及在医学方面的应用［J］.天然产物研究与开发，2003，14(5):467－470.

［2］张宗，张鸿翔，史天良，等.白术挥发油抗肿瘤作用的研究［J］.肿瘤研究与临床，2006，18(12):799－800.

［3］朱善成，黄品芳，王友芳.莪术的药理作用研究进展［J］.海峡药学，2007;19(4):9－10.

［4］肖会敏，王四旺，王剑波，等.连翘挥发油的成分分析及其药理作用的研究进展［J］.时珍国医国药，2008，19(8):2047－2048.

［5］中国药典［S］.2005:附录:Ⅹ，57－58.

［6］宋洪涛，郭涛，颜秀涛，等.肉桂挥发油β－环糊精包合物的制备工艺研究［J］.中草药，2000，31(11):818－840.

［7］秦冬彦，宋洪涛，郭涛，等.冰片β－环糊精包合物的稳定性考察［J］.中草药，2000，31(4):255.

R944

B

1001－1528(2010)07－1243－04

2009－10－14

山西省科技攻关项目(20080311054－2)

赵东洋(1985－)，女，在读研究生，研究方向:从事中药物质基础与新剂型研究。Tel:15834075155 E－maiL:zhaodongyang0626@ 126.com

*通讯作者:李先荣(1953－)，教授，博士生导师。Tel:(0351)4668040 E－maiL:XRLi－01@163.com