反相高效液相色谱法测定达美康缓释片中格列齐特的含量

罗海京，张文超

（1.暨南大学附属第一医院药剂科，广东广州 510630；2.广东省药品检验所化标室，广东广州 510180）

格列齐特为第二代口服磺酰脲类降血糖药，用于成年型糖尿病、糖尿病伴有肥胖症者或伴有血管病变者。格列齐特缓释片为新上市的改良剂型，采用的是羟丙甲纤维素系列控释材料制备的亲水性骨架片。这些高分子材料与胃肠道组织之间的粘附力可以减少胃肠蠕动对药物颗粒的推动作用，延长药物在胃肠道的停留时间，保证药物充分释放和吸收，每日给药一次，就能24 h持续控制血糖[1-2]。中国药典2005年版采用电位滴定法测定格列齐特片剂的含量，该法滴定过程中突跃不明显。本文采用反相高效液相法测定格列齐特缓释片中药物含量，方法简单，结果准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Waters高效液相色谱系统：510泵，486检测器，7715手动进样阀，2010色谱工作站；德国赛多利斯CP224S十万分之一电子天平。

1.2 试药

格列齐特缓释片（商品名达美康，法国施维雅药厂，批号4C5287，4E5287,4H5284）；格列齐特对照品（广州贝氏药业有限公司，纯度100.3%）；格列吡嗪内标物（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯；乙醇，磷酸为分析纯；水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Hypersil C18（5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇－水（60∶40，磷酸调 pH 至 3.5）；紫外检测波长：228 nm；流速：1.0 ml/min；进样量：50 μl。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取格列齐特对照品10 mg，置于10ml容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，摇匀，配成浓度为1 mg/ml的溶液作为对照溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取同一批号格列齐特缓释片细粉适量（相当于格列齐特10 mg），置于100 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，过滤。

2.4 内标溶液的制备

精密称取格列吡嗪5 mg，置于10 ml容量瓶中，用乙醇溶解至刻度，摇匀，配成浓度为500 μg/ml的内标溶液。

2.5 标准曲线绘制

精密吸取对照溶液和内标溶液，以流动相配制成浓度为4、8、6、32、64 μg/ml的溶液，其中内标浓度为 15 μg/ml。 再按“2.1”项下色谱条件各进样50 μl，以格列齐特与内标物的峰面积比（Y）对格列齐特的浓度（X）进行线性回归，回归方程为：Y＝0.047 1X+0.018 4，r=0.999 8，(n=5)。

结果表明，格列齐特在4～64 μg/ml的范围内呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

按“标准曲线绘制”项下配制 4、16、64 μg/ml 3 个含内标的格列齐特溶液，分别重复进样5次，计算日内变异系数分别为1.3%、0.9%、1.7%；3个不同浓度标准液每天测定1次，连续测定5 d，计算日间变异系数分别为1.6%、1.2%、1.9%。

2.7 稳定性试验

精密吸取供试品溶液2 ml，内标溶液0.3 ml于10 ml的容量瓶中，加流动相稀释刻度。按“2.1”项下色谱条件于0、2、4、6、8 h进行测定，结果测得格列齐特与内标物峰面积比的相对标准偏差为1.5%。

2.8 重复性试验

取同一批号样品(4C5287),研细,准确称取适量的粉末(相当于格列齐特10mg)，共6份，按“2.3”项下方法制备。精密吸取续滤液2 ml，内标溶液0.3ml于10ml的容量瓶中，加流动相稀释刻度，按“2.1”项下色谱条件分别测定6份样品的含量，结果测得格列齐特与内标物峰面积比的相对标准偏差为1.1%。

2.9 加样回收率试验

准确称取已知含量的格列齐特缓释片样品细粉适量，加入定量的格列齐特对照品，按“2.3”项下方法操作，制成浓度为 100 μg/ml的溶液。 精密吸取该溶液 1、2、4 ml，内标溶液0.3 ml，分别置于10 ml的容量瓶中，加流动相稀释至刻度。进样50 μl，分别重复进样3次，回收率见表1。

表1 加样回收率试验结果（n=3）

2.10 样品含量测定

取3个批号的格列齐特缓释片各20片（批号分别为4C5287，4E5287，4H5284），精密称定，研细。按“2.3”项下方法操作，制成浓度为100 μg/ml的溶液。精密吸取该溶液2 ml，内标溶液0.3 ml，置于10 ml的容量瓶中，加流动相稀释至刻度。进样50 μl，分别重复进样3次。得不同批号格列齐特片的标示量，结果见表2和图1。

3 讨论

表2 格列齐特缓释片含量测定结果（n=3）

早期有文献分别报道格列齐特在220、230、270和280 nm存在紫外吸收检测波长，《中国药典》记载格列齐特的最大紫外吸收检测波长为226 nm，本实验通过参考并优化其他文献[3-6]的检测方法，选择紫外检测波长为228 nm。通过本文所采用高效液相色谱方法对格列齐特进行含量测定，其精密度、稳定性及加样回收率等试验均符合要求，统计结果表明该方法简便、准确、可靠。

[1]Lu CH,Chang CC,Chuang LM,et al.Double blind randomized multicentre study of the efficacy and safety of gliclazide modified release in the treatment of Chinese type 2 diabetic patients[J].Diabetes Obes Metab,2006,8(2):184-191.

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