标本的不同处理对胰岛素检测结果的影响

张慧涨 方强

(复旦大学附属金山医院检验科,上海 200540)

胰岛素由胰腺内散在的胰岛β细胞合成并以内分泌的形式进入血液,是调节糖代谢的重要激素之一。其检测结果的准确与否,直接关系到对糖尿病患者的诊断和治疗。分离胶能隔离血清与血细胞的接触,从而保证了血清的纯净度,并且分离胶又具有快速分离血清的优点,现在真空采血管在临床的大量应用,我们就分离胶血清与普通血清在胰岛素的测定的差异性方面进行了实验对比分析,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 受试对象 我院就诊患者,其中男性22例,女性18例;年龄36～75岁,平均年龄为45岁。

1.2 材料 雅培I2000化学发光仪,试剂为雅培公司配套试剂盒;全自动血球分析仪XE-2100(SYSMEX有限公司提供)试剂为SYS-MEX有限公司配套试剂盒。采血管包括分离胶真空采血管和普通真空采血管,都由广州阳普有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 不同标本对胰岛素测定影响的实验 (1)标本的采集：用分离胶真空采血管和普通真空采血管连续收集30例我院就诊患者空腹静脉血,每管5 mL,3000 r◦min-1离心10 min,分离出血清待测,检测后血清放置4℃冰箱保存待测。(2)标本的测定：用化学发光法仪分别于采血即时、采血后1 h、4 h、24 h、48 h测定胰岛素浓度。

1.3.2 溶血对胰岛素测定影响的实验 (1)标本的采集：用真空采血管抽取10例患者静脉血5 mL,3000 r◦min-1离心10 min,先分离出1 mL血清置于另一管中待测,剩余的血清管用竹签搅拌,使部分红细胞破裂而产生溶血。(2)血清处理：用XE-2100测定每份溶血标本的血红蛋白(Hb)浓度,再用该患者非溶血血清稀释,得到溶血程度分别为1 g◦L-1、2 g◦L-12种不同程度的溶血标本。(3)标本的测定：将2种不同溶血程度的标本和非溶血标本分成2份,分别放置在4℃室温中,分别于即时、第1和第4 h测定胰岛素浓度。

2 结 果

2.1 不同血标本对胰岛素浓度测定结果的影响见表1。

2.2 溶血对胰岛素浓度测定结果的影响 见表2。

表1 不同血标本对胰岛素浓度(μ mol◦L-1)测定结果的影响()

表1 不同血标本对胰岛素浓度(μ mol◦L-1)测定结果的影响()

注：与普通管不分离血清结果比较,*P＜0.05

表2 溶血对胰岛素浓度(μ mol◦L-1)测定结果的影响()

表2 溶血对胰岛素浓度(μ mol◦L-1)测定结果的影响()

注：溶血程度以血红蛋白浓度(g◦L-1);与0 g◦L-1溶血标本组比较,*P＜0.05,**P＜0.01

3 讨 论

胰岛素由胰岛β细胞合成,由α链和β链组成,其中α链含21个氨基酸,β链含30个氨基酸,2个肽链有二硫键连接。胰岛素分子量为5734,等电点为5.35～5.34,其生物半衰期很短,仅为 15min,由于以上结构和特性,使胰岛素在高温和碱性条件下极不稳定。胰岛素的测定对糖尿病分型及临床用药具有重要作用[1]。胰岛素浓度测定是临床常用的重要检查项目,其结果的准确性直接影响到糖尿病患者的诊断和治疗,要获得准确可靠的检验数据,有赖于建立一套完整的质量保证体系。在日常工作中存在很多偶然因素可能直接影响其检测结果的准确性,如：标本采集方法及时间保存方法、取血部位、测定方法、测定时间、药物干扰等。

本研究对我院30例就诊患者进行分离胶真空采血管和普通真空采血管采血,并于采血即时、采血后1 h、4 h、24 h、48 h测定胰岛素浓度。即时分离之血清与分离胶真空管血清的胰岛素浓度测定结果无显著差异;普通真空采血管未分离血清与分离胶真空管血清在第4小时测定胰岛素浓度无显著差异,而到第24小时、48小时时两者结果有显著差异。其原因为分离胶分离血清后,血清和血细胞之间形成固有屏障,使血清和血细胞完全分离,保证了血清成分稳定,普通真空采血管即时分离血清,由于血清另存于干燥试管与血细胞分开,因此测定结果亦较稳定。

分离胶真空采血管中的分离胶是具有触变性的胶体,气密性好,密度正好在血清和血细胞之间。当离心分离样本时,分离胶将血清与血细胞完全隔开,减少了血清与血细胞接触的时间,从而避免了因血细胞对血清的影响所造成的分析误差[2],同时对以血清为对象的临床化学及免疫学检测均无影响[3]。

溶血可以严重影响胰岛素浓度测定值,因红细胞内含有胰岛素降解酶(insulin degrading enzyme,IDE)[4],溶血可导致IDE从红细胞内释放至血清中,降解胰岛素,将其水解成为小分子片段,引起检测浓度的下降。本研究结果表明测得胰岛素浓度下降的程度与溶血程度呈正相关,溶血程度越高,其下降越明显。同一份溶血标本在室温保存与在4℃保存相比胰岛素浓度更低,说明低温能抑制IDE的活性,标本在4℃保存能有效减少溶血干扰。因此,在血液标本的采集、运输、转移、保管和分离血清过程中应保持低温环境,以最大程度降低IDE的活性,减轻溶血对测定胰岛素浓度造成的影响。本研究还发现无溶血标本在4℃或室温下放置1 h、4 h后,胰岛素浓度无显著差异,说明无溶血标本在4 h内检测不影响胰岛素测定结果。而溶血标本在室温下放置4 h后会出现测定浓度明显的下降,说明溶血标本不仅要求及时检测,而且需要低温保存,这样才能尽可能地减少溶血对胰岛素检测的影响。

分析前质量控制是实验室质控的一个重要组成部分,而实验室标本的正确采集、处理和保存又同分析前质量控制息息相关。为了保证血胰岛素测定的稳定性,在标本采集后应尽早测定。普通采血管要求在4 h内检测,如因标本量太多,或其他原因不能及时测定时,应使用分离胶真空采血管采血或普通分离管采血后即时分离血清。由于溶血能对胰岛素浓度的检测产生影响,提示在标本采集、处理过程中应该尽可能避免溶血的发生,一旦发生标本溶血,最好重新抽血检测,轻微溶血或无法重新抽血,建议标本尽快进行血清分离并于4℃保存,尽快检测,确保胰岛素浓度检测的准确性。

1 Sapin R.Insulin assays：previously known and new analytical features[J].Clin Lab,2003,49(3-4)：113-121.

2 王永安,王家民.血清分离胶的理论基础及应用[J].上海医学检验杂志,1995,10(4)：234-236.

3 郭新胜,周位强.分离胶真空采血管在临床上的应用进展[J].现代检验医学杂志,2007,22(2)：123-124.

4 Sapin R,Ongagna JC,Gasser F,et al.Insulin measurements in haemolysed serum：influence of insulinase inhibitors[J].Clin Chim Acta,1998,274(1)：111-117.