顶空气相色谱法测定盐酸倍他司汀原料药中有机溶剂的残留量

梁春慧，宋更申（1.河北医科大学第三医院药剂科，石家庄市050051；.河北省药品检验所，石家庄市050011）

盐酸倍他司汀（Betahistine hydrochloride）是治疗眩晕、不稳定心绞痛等心血管疾病的常用药。盐酸倍他司汀在合成过程中，使用了乙醇、异丙醇、二氯甲烷等3种有机溶剂，这些溶剂会对人体健康造成危害，控制其残留量对保证药品质量和用药安全有重要意义。关于其残留溶剂的研究，尚未见国内文献报道。本文根据人用药品注册技术要求国际协调会（ICH）[1]的指导原则和《中国药典》2005年版[2]的相关规定，并参考有关文献[3]，采用顶空气相色谱法，以水为溶解介质，同时测定上述3种溶剂的残留量。结果表明，本方法简单、准确、灵敏度高、重复性好，可用于该药物中有机溶剂残留量的测定。

1 仪器与试药

6890型气相色谱仪与7694E型顶空进样器、B.02.01-SR1工作站（美国Agilent公司）；BP 211D型电子天平（德国Sartorius公司）。

盐酸倍他司汀原料（国内S公司，批号：2009-05-028、2009-05-029、2009-05-030，含量分别为：99.1%、99.3%、99.2%）；乙醇、异丙醇、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均为色谱纯（美国Fisher公司）；试验用水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为DB-624毛细管柱（60 m×530 μm×1 μm），柱温：70℃；氢火焰离子化检测器，检测器温度：250℃；分流进样，分流比：1∶1，进样口温度：180 ℃；载气：氮气，流速：3.0 mL·min－1；顶空进样，平衡温度：90 ℃，平衡时间：30 min；顶空瓶加压时间：0.2 min；进样时间：1 min；定量环体积：1 mL；定量环温度：100℃；传输线温度：110℃。

2.2 溶液的制备

对照品贮备液：精密称取乙醇100 mg、异丙醇100 mg、二氯甲烷12 mg，置于同一100 mL容量瓶中，加50%的N，N-二甲基甲酰胺溶液50 mL使溶解，再用水稀释至刻度，摇匀，即得。

对照品溶液：精密量取对照品贮备液5 mL，置于50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，即得。

供试品溶液：精密称取本品约0.1 g，置于20 mL顶空进样瓶中，精密加水5 mL，密封，振摇使溶解，即得。

2.3 系统适用性试验

精密量取“2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”

图1 气相色谱图A.对照品溶液；B.供试品溶液；1.乙醇；2.异丙醇；3.二氯甲烷Fig 1 Gas chromatogramsA.reference substances solution；B.sample solution；1.alcohol；2.isopropyl alcohol；3.dichloromethane

图1 结果表明，乙醇、异丙醇、二氯甲烷分离良好，理论板数均不低于10 000。盐酸倍他司汀和水不干扰有机溶剂的测定。

2.4 标准曲线的制备

分别精密量取对照品贮备液10、10、5、5、5、2 mL分别置于10、25、25、50、100、100 mL容量瓶中，分别用水稀释至刻度，摇匀，分别精密量取5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，以峰面积（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标，进行线性回归，结果见表1。

表1 线性关系考察结果（n＝6）Tab 1 Results of linear ranges（n＝6）

2.5 精密度试验

精密量取对照品溶液5 mL，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，计算乙醇、异丙醇、二氯甲烷的峰面积的RSD分别为1.1%、0.8%、1.3%。

2.6 重复性试验

精密称取本品（批号：2009-05-028）约0.1 g，置于20 mL顶空进样瓶中，共6份，精密加水5 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，检出本品中乙醇含量平均为0.04%，RSD＝1.5%，异丙醇平均含量为0.02%，RSD＝1.2%，二氯甲烷均未检出。

2.7 回收率试验

精密称取已知各溶剂含量的样品（批号：2009-05-028）0.1 g，置于20 mL顶空进样瓶中，共9份，分别精密加入对照品贮备液0.40、0.50、0.60 mL，各3份，再分别用水稀释至5.0 mL，密封，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件进行分析，按外标法计算，乙醇、异丙醇、二氯甲烷的平均回收率分别为99.6%、99.4%、98.6%，RSD分别为0.1%、0.1%、0.3%，结果见表2。

2.8 稳定性试验

精密量取“2.2”项下的供试品溶液（批号：2009-05-028），于室温下放置0、1、2、4、8、12 h，分别按“2.1”项下的色谱条件进行分析。结果，样品中乙醇在12 h内测定的峰面积的RSD＝1.3%，异丙醇在12 h内测定的峰面积的RSD＝1.0%，二氯甲烷均未检出，表明本溶液在12 h内稳定。

表2 回收率试验结果Tab 2 Results of recovery tests

2.9 检出限与定量限

用逐步稀释法进行测定，以信噪比约为3时计算检出限，以信噪比约为10时计算定量限，结果乙醇、异丙醇、二氯甲烷的检出限分别为1.89、1.11、0.49 μg·mL－1，定量限度分别为5.71、3.36、1.51 μg·mL－1。

2.10 样品中有机溶剂残留量的测定

取3批样品，按“2.2”项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，“2.1”项下的色谱条件进行分析，外标法计算3种溶剂的含量，结果样品中乙醇含量均为0.04%，异丙醇均为0.02%，二氯甲烷均未检出，符合《中国药典》要求。

3 讨论

笔者在预试验中先后选择了HP-1、HP-20M、DB-624等不同极性的色谱柱，以乙醇、异丙醇、二氯甲烷3种溶剂在DB-624上的峰形和分离度最佳。

试验曾考察了不同的顶空温度和顶空平衡时间对样品测定的影响，结果表明，样品在70、80、90℃的顶空温度下均稳定，为了提高检测灵敏度，本试验选择90℃作为顶空温度；本品在30、40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，故选择30 min作为顶空平衡时间。研究中发现顶空瓶中溶液的体积对色谱峰面积有较大影响，试验分别考察了20 mL顶空瓶中溶液的体积分别为2、3、5、6 mL，以及10 mL顶空瓶中溶液的体积分别为1、2、3 mL时的结果，发现选择20 mL顶空瓶中溶液的体积为5 mL时，各色谱峰的峰面积最大。有关最佳气液平衡状态还有待于进一步研究。

本方法3种有机溶剂的定量限为1.51～5.71 μg·mL－1，灵敏度完全可以满足盐酸倍他司汀原料药中有机溶剂残留量测定的需要。

[1]周海钧主译.药品注册的国际技术要求·质量部分[M].北京：人民卫生出版社，2000：343.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：54～57.

[3]宋更申，姜建国，刘红莉，等.顶空气相色谱法测定美罗培南中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2010，21（5）：447.