重组人促红细胞生长素对新生鼠坏死性结肠炎保护作用的实验研究

贺万香 曾宾 胡晓燕

重组人促红细胞生长素对新生鼠坏死性结肠炎保护作用的实验研究

贺万香 曾宾 胡晓燕

目的探讨重组人促红细胞生长素对新生鼠坏死性结肠炎的保护作用。方法将80只Sprague-Dawley新生大鼠随机分成2组，观察组和对照组，均应用三硝基苯磺酸(TNBS)诱导建立新生素坏死性结肠炎模型。观察组于疾病急性期腹腔皮下注射重组人促红细胞生长素，观察新生大鼠的一般情况、死亡情况及组织学改变。结果造模后第3周末，所有大鼠均未见腹泻症状，观察组所有存活大鼠体重均恢复至造模前水平，对照组存活大鼠体重相对于造模前均有所下降。观察组死亡27只，死亡率为67.5%;对照组死亡35只，死亡率为87.5%。两组死亡率比较，观察组明显比对照组低，比较有统计学意义(P＜0.05)。观察组死亡大鼠病变结肠组织学改变较对照组相对减轻。结论重组人促红细胞生成素的应用减轻了大鼠结肠病变，对其有一定的保护作用。

重组人促红细胞生成素;坏死性结肠炎;TNBS

坏死性结肠炎属于新生儿时期较为严重的胃肠道疾病之一，在新生儿尤其是早产儿中发病率相对较高，是其早期死亡的主要原因之一［1］。重组人促红细胞生成素属于基因重组技术合成的糖基化蛋白，在红细胞发育过程中起重要的调节作用。近年来有研究发现，促红细胞生成素可能为一种新的神经递质，具有神经系统保护作用，而且具有一定的促进血管生成作用［2］，因而本课题通过将重组人促红细胞生成素应用于建立坏死性结肠炎模型的新生大鼠，旨在探讨重组人促红细胞生成素是否对新生大鼠坏死性结肠炎有保护作用。实验研究如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物、主要试剂 选取Sprague-Dawley大鼠80只，雌雄各半，未感染过特殊病原体，出生1～2 d。TNBS采购自美国的Sigma公司。重组人促红细胞生成素购于成都地奥制药有限公司。

1.2 动物分组、造模 将新生大鼠称重后随机分为观察组和对照组，每组40只。所有大鼠均应用TNBS诱导结肠炎模型。新生大鼠灌肠前，禁食24 h，水不禁。采用乙醚麻醉后，于大鼠肛门处插入一直径为2 mm的导尿管，插入深度为8 cm，经导尿管将TNBS 80 mg/kg的50%乙醇溶液推入大鼠结肠。推入时速度要缓慢，以便注入液能在肠内逐渐弥散、分布均匀。注入完成后将大鼠倒置30 s。考虑到造模后第1～3周为结肠炎急性期［3］，本组研究观察结束点选择为造模后3周。观察组于造模后第一天开始按照大鼠每克体重给予腹腔皮下注射重组人促红细胞生成素0.5 ml，2次/d。连续观察新生小鼠的一般情况和死亡情况。

1.3 检测指标和方法 实验中每天观察新生小鼠的进食情况;饮水、排便情况;行为活动、体重变化情况。详细记录新生大鼠死亡情况并对其实施尸体解剖，取出结肠病变部位，制作结肠标本，HE染色下观察结肠的组织学改变。

1.4 统计学分析方法 所得实验数据经采用SPSS 13.0进行分析处理，P＜0.05，有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般情况比较 观察组与对照组均于造模后第一天开始，出现了不同程度的腹泻，以黄色稀便为主，肉眼未见血便。肝门周围毛皮粪便污染严重。大鼠精神状态较倦怠，活动量和进食均较少，体重下降。观察组自造模后第2周末开始腹泻减少，大鼠进食相对增多，体重也逐渐有所增加。造模后第3周末，所有大鼠均未见腹泻症状，观察组所有存活大鼠体重均恢复至造模前水平，对照组存活大鼠体重相对于造模前均有所下降。

2.2 死亡率比较 造模后第3周末，观察组死亡27只，死亡率为67.5%;对照组死亡35只，死亡率为87.5%。两组死亡率比较，观察组明显比对照组低，比较有统计学意义(P＜0.05)。两组死亡情况如表1所示。

表1 两组死亡情况(例，%)

2.3 死亡大鼠病变结肠组织学改变 对照组死亡大鼠结肠黏膜上皮有较大缺损、脱落，炎症细胞主要为中性粒细胞，伴嗜酸性粒细胞浸润，多数炎症累及结肠壁全层，可见典型溃疡形成。观察组结肠黏膜上皮缺损、脱落相对对照组减轻，黏膜充血减轻，炎症细胞浸润程度相对较轻，以淋巴细胞、浆细胞浸润为主;炎症累及全层者少见，以累及黏膜及黏膜下层较多见。

3 讨论

促红细胞生成素对血管有刺激其生成的潜能，即重组人促红细胞生成素在血管分化过程中具有一定作用，能一定程度上促进血管内皮生长因子的表达、促进血管生成，重建血管分支等作用。因而笔者将其应用于坏死性结肠炎新生大鼠模型，探讨其保护作用。研究结果显示，观察组一般状况相对对照组，无论在进食情况还是体重恢复情况方面均改善明显，而且，观察组死亡率明显低于对照组，而组织学改变相对轻微。因而可以推断，重组人促红细胞生成素的应用减轻了大鼠结肠病变，对其有一定的保护作用其作用机制可能与重组人促红细胞生成素促进血管内皮细胞生长因子的表达、促血管生成有关，但尚待进一步探讨。

［1］黄凤英，严美林，龙娟.新生儿坏死性小肠结肠炎39例临床分析.贵阳中医学院学报，2007，29(6).

［2］胡志辉，张勇.促红细胞生长素应用的新途径.华南国防医学杂志，2007，21(6):46-48.

［3］赵治彬，王轶，刘雪平，于成功.中药溃克灵对结肠炎模型大鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响.胃肠病学，2009，14(11):656-660.

The research of R-HuEPO protection to newborn rats with necroticcolitis

HE Wan-Xiang，ZENG Bin，HU Xiao-yan.Neonatology Department，Shenzhen Hospital of Beijing University ，Shenzhen，Guangdong 518036，China

Objective To investigate and discussion restructuring human urges erythrocyte growth hormone to check the newborn rats necrosis nature colitis protection effect.MethodsRandomly divides newborn 80 Sprague-Dawley rats into 2 sets，observe group and contrast a group，the guidance applying TNBS equally builds the newborn plain necrosis nature colitis model.The people who observes impatient group Yu disease scheduled time abdominal cavity re-organize human，ordinary circumstances，death condition and microanatomy observing the newborn rat’s change.ResultsCreate model last 3rd weekend，all rats have not seen the diarrhoea symptom equally，level the weight observing all groups survival rats were restored equally till making model front，contrast group survival rat weight coming down to some extent without exception relative to making model front.27 death，death rate observing a group were 67.5%;Contrast the set of 35 death，death rate being 87.5% .Two set of death rates were parallel，observing a group is lower than contrasting a group obviously，had statistics meaning comparatively(P＜0.05).That microanatomy changes the colon observing group death rat lesion was more relative than contrasting a group easing off.ConclusionRe-organize person urging the Erythropoietin application to have lightened rat colon lesion，have the certain protection effect to the person.

Re-organize human urging erythropoietin Necrosis nature colitis;TNBS

518036 北京大学深圳医院新生儿科

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