乙肝病毒携带者病毒基因分型与C基因启动子及前C区变异的相关性分析

张 勇,石 铭,綦盛麟

(大连市第六人民医院,辽宁大连 116031)

乙肝病毒携带者病毒基因分型与C基因启动子及前C区变异的相关性分析

张 勇,石 铭,綦盛麟

(大连市第六人民医院,辽宁大连 116031)

为探讨乙型肝炎病毒基因分型与C基因启动子(CP)及前C区变异(PC)的相关性,我们对89例乙型肝炎病毒携带者进行病毒基因分型,观察其间的相关性。

1 材料与方法

1.1 研究对象 我院门诊及住院乙肝病毒携带者89例,用ABI7500基因荧光定量对其进行病毒含量、基因分型、C基因启动子(CP)及前C区变异(PC)检测,取其外周血用《KL型免疫图像分析仪》测其T淋巴细胞Ag-NORs活性,肝组织穿刺标本进行常规病理切片。

1.2 研究方法

1.2.1 乙肝病毒基因分型及C基因启动子及前C区变异检测 100 μ l待检血清样本模板提取严格按照提取试剂盒操作说明书操作;HBV DNA提取模板加入PCR扩增反应体系,反应条件:反应管先在50℃保温5 min,然后94℃保温5 min,再按 93℃30 s→60℃90 s循环40次;置ABI 7500全自动定量PCR仪上进行病毒基因分型及C基因启动子及前C区变异检测分析。

表1 引物设计:C基因启动子前C区

1.2.2 肝组织病理检测 穿刺标本至少在镜下包括3个以上汇管区,标本连续切片,苏木精伊红(HE)染色,镜下观察肝内炎症、组织结构改变及纤维化程度。

表2 炎症活动度(G)与纤维化程度(S)分级标准[1]

1.2.3 T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)活性检测 采用《KL型免疫图像分析仪》测其T淋巴细胞Ag-NORs活性,结果以IS%表示。

1.3 数据统计处理 结果经SPSS10.0统计软件处理。

2 结果

2.1 不同病毒基因分型患者外周血中生物化学指标变化 见表3,B型与C型乙肝患者病毒含量、e抗原阴性率、PC%变异率有明显差异:B型乙肝患者病毒平均含量明显低于C型患者(P＜0.001);而e抗原阴性及PC%变异率明显高于C型乙肝患者(P＜0.01)。两者间CP%变异率无显著性差异(P＞0.05)。

表3 病毒基因分型患者外周血中生物化学指标变化

2.2 C型基因患者CP与PC变化对肝组织及T淋巴细胞AgNORs活性影响 C型基因患者中,两者的肝组织损伤程度有明显的差异,CP变异组肝组织炎症及纤维化程度明显高于PC变异组(G1-G2/G0;S1-S2/S0-S1),PC变异组T淋巴细胞AgNORs活性明显高于CP变异组。见表4

表4 CP与PC变化对肝组织及T淋巴细胞 AgNORs活性影响

3 讨论

乙型肝炎病毒按照基因序列的不同可以分为A-H八个基因型,在我国主要是B、C型,不同的基因型有不同的临床表现、病毒含量的改变及免疫功能的变化[2]。

HBV本身有极高的复制率,在病毒复制过程中由于其逆转录酶缺乏校对活性,而导致乙型肝炎病毒发生基因突变,基因突变广泛存在于基因组的不同部位,基因组不同区段的变异性有显著不同,HBV基因组S、C、P、X 区 、前 C 区 、前 S2、前S1 区变异性依次增高[3,4]。其中C基因启动子(CP)及前C区(PC)变异是导致e抗原分泌减少。因此,临床上对CP与PC变异率的检测至关重要。

《2006西安病毒性肝炎会议乙肝病毒防治指南》中对乙肝病毒携带者治疗的意见是对这部分患者进行肝组织病理穿刺检查,观察肝组织损伤程度,来进一步确诊和相应治疗,而现实中这些患者由于对肝穿的恐惧及不理解,很难接受肝穿检测。国内对乙肝病毒携带者的研究大多局限于病毒基因分型与病毒含量及疗效关系,对乙肝病毒携带者进行病毒基因分型同时观察PC与CP变异率,T淋巴细胞AgNORs含量与肝组织病变程度相关性,国内未见相关报道。

我们在对患者进行肝组织穿刺的同时,利用实时荧光定量PCR技术对乙型肝炎病毒进行基因分型及CP与PC变异检测发现:乙型肝炎病毒携带者中,乙型肝炎病毒基因型B比C型更容易通过前C区变异诱导e抗原转化,C型乙型肝炎病毒携带者病毒含量及e抗原阳性率高于B型乙肝病毒携带者。B型乙肝病毒携带者容易发生PC变异,而C型乙肝病毒携带者容易发生CP变异,C型乙肝病毒携带者中,PC与CP组比较,T淋巴细胞AgNORs含量明显升高,肝组织炎症及纤维化程度有明显改善。C型乙肝病毒携带者中,PC与CP变化可间接反映肝组织的损伤程度,且PC比CP组T淋巴细胞Ag-NORs活性明显升高。

[1]中华医学会传染病与寄生虫会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[S].中华肝脏杂志,2000,8(6):324.

[2]Buster EH,Janssen HL.Antiviral treatment for chronic hepatitis B virus infection-immune modulation or viral suppression[J].Med,2006,64:175.

[3]Tsubota A,Arase Y,Ren F,et al.Genotype may correlate with liver carcinogenesis and tumor characteristics in cirrhotic patients infected with hepatitis B virus subtype adw[J].J Med Virol,2001,65(2):257.

[4]Sugauchi F,Chutaputti A,Orito E et al.Hepatitis B virus genotypes and clinical manifestation among hepatitis B carriers in Thailand[J].J Gastroenterol Hepatol,2002,17(6):671.

1007-4287(2010)06-0929-02

2009-06-03)