Endostatin、bFGF在舌鳞癌中的表达及临床意义

李 慧,雒文彬

(1.吉林省吉林中西医结合医院 口腔科,吉林吉林 132012;2.廷边大学医学院 2006级,吉林延吉 130000)

Endostatin、bFGF在舌鳞癌中的表达及临床意义

李 慧1,雒文彬2

(1.吉林省吉林中西医结合医院 口腔科,吉林吉林 132012;2.廷边大学医学院 2006级,吉林延吉 130000)

目的本研究检测血管内皮抑素(Endostatin)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在人类舌鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法收集34例临床和病理完整的舌鳞癌组织采用免疫组化S-P法检测Endostatin、bFGF的表达水平。结果根据舌鳞癌组有无淋巴结转移Endostatin的阳性表达率分别为50.0%,81.8%,bFGF阳性表达率分别为91.7%,59.1%,均有显著差异(P＜0.05)。舌鳞癌组织中Endostatin、bFGF表达呈显著负相关(rs=-0.385,P＜0.025)。结论Endostatin和bFGF在舌鳞癌组织肿瘤血管生成过程中是重要的调节因子,二者消长关系可能关系到肿瘤生物学行为的发生发展。

舌鳞癌;血管内皮抑素;碱性成纤维细胞生长因子;免疫组化

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0859)

舌鳞癌的早期诊断并对其浸润转移进行监测在临床上非常重要。血管形成是实体瘤增殖和转移的关键步骤,这一过程依赖于内源性促进因子和抑制因子之间的平衡。近年来倍受关注的血管内皮抑素(Endostatin)是内源性新血管生成抑制因子,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是肿瘤血管形成的促进因子,本研究通过检测Endostatin、bFGF在舌鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨它们在舌鳞癌发生发展中的作用及相互关系,为舌鳞癌转移的早期诊断和治疗提供有参考价值的分子生物学指标

1 材料和方法

1.1 病例选择

收集2008年2月至2009年2月在病理科存档的舌鳞状细胞癌根治术后的归档蜡块34例,具有完整的病史、病理数据,术前均未接受过放化治疗。患者年龄在36-84岁之间,中位年龄56.5岁。伴淋巴结转移者12例,无淋巴结转移者22例;鳞癌分化程度:低分化5例,中分化15例,高分化14例。由两位病理学副教授协助作病理学诊断和病理学分级。

1.2 实验方法

将10%福尔马林固定、石蜡包埋的组织蜡块,做常规病理切片,经免疫组化染色,根据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复。将切片浸入0.01M(pH6.0)枸橼酸盐缓冲液,微波炉加热至沸腾后断电,间隔 5-10 min后,反复1-2次,冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。用已知的阳性口腔癌切片作阳性对照,用已知的阴性的口腔癌切片作阴性对照,以PBS缓冲液代替一抗作空白对照。

1.3 结果判定标准及方法

1.3.1 Endostatin蛋白的阳性结果判定 Endostatin蛋白为胞浆着色,阳性判断采用半定量标准,即根据细胞染色强度和染色细胞所占面积积分之和来判断[1]。染色强度积分为:不染色为0分,浅黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;染色面积分为:无细胞染色为0分,＜25%细胞染色为1分,25%-50%细胞染色为2分,＞50%细胞染色为3分。若两者积分之和＞2则为Endostatin表达阳性,≤2则为Endostatin表达阴性。

1.3.2 bFGF蛋白的阳性结果判定 bFGF蛋白主要定位在肿瘤细胞的胞浆,呈黄色或棕黄色,判断采用许良中的评分标准[2],阳性细胞染色强弱:0分为无着色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为棕褐色。阳性细胞所占的百分比:0分为阴性,1分为10%,2分为11%-50%,3分为＞50%。若两者积分之和＞2则为bFGF表达阳性,≤2则为bFGF表达阴性。

1.4 统计学分析 用SPSS 13.0统计分析软件进行分析;Endostatin、bFGF与各临床病理特征的关系采用χ2检验,Endostatin、bFGF表达之间的关系采用配对四格表资料的关联性分析,P＜0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 舌鳞癌Endostatin表达

34例不同分化程度舌鳞癌Endostatin的表达无显著性差异。淋巴结转移的癌组织中Endostatin阳性表达率50.0%,与无淋巴结转移组阳性表达率81.8%相比,有显著性差异,χ2=3.876,P＜0.05(见表1)。

表1 舌鳞癌Endostatin的表达与临床病理特征关系

2.2 舌鳞癌bFGF的表达

34例不同分化程度舌鳞癌bFGF的表达无显著性差异,淋巴结转移组bFGF阳性表达率91.7%,无淋巴结转移组bFGF阳性表达率59.1%,二组相比有显著性差异,χ2=3.969,P＜0.05(见表2)。

表2 舌鳞癌bFGF的表达与临床病理特征关系

2.3 Endostatin、bFGF蛋白表达的相关性

34例舌鳞癌组织中,Endostatin、bFGF蛋白表达情况见表3。经配对四格表资料的关联性分析,χ2=5.903,P＜0.025,表明两种方法的结果存在关联性,进一步计算pearson列联系数,rs=-0.385,两者呈负相关。

表3 舌鳞癌中Endostatin与bFGF表达的相关性

3 讨论

内皮抑素(Endostatin)是迄今为止发现的第二种内源性血管形成抑制剂。Endostatin是由成血管内皮细胞肿瘤分泌,可引起内皮细胞G1期停滞,从而抑制内皮细胞增殖;同时还可减少Bcl-2、Bcl-xl抗凋亡蛋白的量[3]。梁朝斌等[4]观察Endostatin在人口腔鳞状细胞癌组织中的表达时发现,Endostatin的表达与肿瘤的淋巴结转移有密切相关,和无淋巴结转移组相比,Endostatin在有淋巴结转移组中的表达明显降低。本研究表明,12例有淋巴结转移的癌组织中Endostatin阳性表达6例,阳性表达率50.0%,与无淋巴结转移组阳性表达率81.8%相比,有显著性差异P＜0.05。因此,检测舌鳞状细胞癌组织内皮抑素的表达有助于预测舌鳞状细胞癌的恶性行为和研究其在侵袭转移中的作用。

bFGF属于FGF家族,是一类对中胚层及神经胚层来源的细胞具有强烈的促进增殖和分化的有多种生物活性的多肽类细胞生长调节因子。肿瘤细胞分泌的bFGF数量不断增加,并显著提高异常分裂的细胞形成肿瘤并具有转移能力[5]。国内张阳德[6]采用原位杂交方法检测55例大肠癌中bFGF-mRNA的表达情况,阳性表达率67.8%,明显高于正常组织.赵仲生[7]等用原位杂交的方法测出了胃癌组织中bFGF-mRNA的高表达。我们的研究结果也有类似的发现:bFGF主要表达于肿瘤细胞的细胞浆,呈棕色或黄色。因而,检测bFGF在舌鳞癌的表达情况对临床判断肿瘤恶性程度,估计预后有着重要意义。

在由bFGF作为外来刺激物诱导的内皮细胞增殖迁移实验中,bFGF与Endostatin发挥抑制血管生成的作用具有明显的剂量效应关系即Endostatin发挥抑制血管生成的作用明显降低[8]。Endostatin借助结构中的肝素结合部位,与bFGF竞争,从而阻断有丝分裂生长因子的信号传导和内皮细胞生长,继而抑制血管的生成[10]。本研究对 Endostatin和bFGF蛋白的实验结果进行了相关性分析,结果表明二者表达呈显著负相关(rs=-0.385,P＜0.025),提示在舌鳞癌的抗血管生成治疗中,通过下调肿瘤组织内bFGF的表达和/或通过局部或全身应用Endostatin对延缓进展期舌鳞癌的发展、改善肿瘤患者的愈后可能具有一定的作用。

综上所述,Endostatin和bFGF在舌鳞癌组织肿瘤血管生成过程中是重要的调节因子,二者消长关系可能关系到舌鳞癌肿瘤生物学行为的发生发展,从而为舌鳞癌转移的早期诊断和治疗提供有参考价值的分子生物学指标。

[1]贾宝辉,史成章,刘 伟,等.血小板衍生内皮细胞生长因子在胃癌中的表达及其与血管生成[J].肿瘤防治杂志,2003,10(10):1062.

[2]许良中,扬文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996,6(4):229.

[3]谭海宁,王凤山,凌沛学.内皮抑素及其对血管生成抑制作用的研究进展[J].中国药学杂志,2007,03(08):329.

[4]梁朝斌,黄洪章,赵小朋,等.人内皮抑素基因导入对裸鼠舌鳞癌移植瘤的抑制影响[J].中国口腔颌面外科杂志,2005,93(3):218.

[5]刘李登,向军俭.碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体研究进展[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,04(18):379.

[6]张阳德,李 浩,席 浩,等.VEGF-mRNA和bFGF-mRNA在大肠癌中的表达及意义[J].中国现代医学杂志,2004,14(9):0001.

[7]赵仲生,茹国庆,马 杰.碱性成纤维细胞生长因子mRMA表与微血管密度胃癌的发展及预后[J].中华病理学杂志,2003,32(1):57.

[8]Kulke MH,Bergsland EK,Ryan DP,et al.Phase II Study of Recombinant Human Endostatin in Patients With Advanced Neuroendocrine Tumors[J].Clin Oncol,2006,24(22):3555.

The Study on the Expression and Clicinal Significance of Endostatin、bFGF in Oral Squamous Cell Carcinoma

LI Hui1,LUO Wen-bin2.(1.Department of Oral Cavity,the Hospital of Combination of TCM With Western,Jilin132012,China;2.Medical College of Yambian Universibty,Yanji130000,China)

ObjectiveTo investigate the expression of Endostatin、bFGF in Oral Squamous Cell Carcinoma(OSCC)tissue and their interaction with clinical pathological characteristics.MethodsThirty-four resected specimens of patients undergoing surgery for OSCC were collected.Immunohistochemical staining was used for detecting the expression of Endostatin、bFGF.ResultsAccording to the status of lymphnode metastasis the positive rates of Endostatin were 50.0%,81.8%,the positive rates of bFGF were 91.7%,59.1%.ConclusionEndostatinand bFGF are both important regulators in the processof angiogenesis inOSCC.It suggested that there was a regularly alteration between promoters and inhibitors in OSCC angiogenesis.

oral squamous cell carcinoma;endostatin;basic fibroblast growth factor;immunohistochemistry

R739.86

A

1007-4287(2010)06-0859-03

吉林市科技发展计划项目(编号2009087)

李慧(1971-),女,本科,学士学位,副主任医师,研究方向:口腔疾病诊断与治疗。

2009-05-29)