肝病患者血清Gc球蛋白和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10检测及临床意义

王 崇,姜艳芳,金清龙,牛俊奇

(吉林大学第一医院肝胆胰内科,吉林长春 130021)

肝病患者血清Gc球蛋白和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10检测及临床意义

王 崇,姜艳芳,金清龙,牛俊奇*

(吉林大学第一医院肝胆胰内科,吉林长春 130021)

目的分析Gc球蛋白在肝病患者,尤其是重症肝炎患者血中的浓度改变及临床意义;探讨肝病患者血清Gc球蛋白和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的关系。方法应用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒体外检测不同类型肝病患者血清中游离Gc球蛋白和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的浓度。结果重症肝炎组较急性、慢性肝炎组、肝硬化组及正常对照组相比,Gc球蛋白浓度下降得最为显著,且有统计学意义;Gc球蛋白和细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10在各种肝病中具有相关性。结论Gc球蛋白的浓度的改变和肝脏坏死程度关系密切,Gc球蛋白可以作为诊断重症肝炎的敏感指标;Gc球蛋白和上述4种细胞因子在不同的肝病类型中具有不同的相关性。

重症肝炎;Gc球蛋白;细胞因子

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0870)

Gc球蛋白是一种主要由肝脏产生的糖蛋白,大量存在于血浆中,具有多种功能[1,2],其中一项重要的功能就是清除细胞坏死时释放入血的肌球蛋白,以减少肌球蛋白对机体损伤,同时因不断消耗Gc球蛋白使血中Gc球蛋白浓度降低[5-8],本研究应用ELISA方法体外检测各种肝脏疾病,尤其是重症肝炎患者血清中Gc球蛋白的量,探讨Gc球蛋白和各种肝脏疾病关系。机体免疫调节在肝脏损伤中具有重要的作用,细胞因子是机体免疫调节的重要元素,其在不同肝病中有不同的作用和反应,本研究应用ELISA方法测定肝病患者血清细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的浓度,并探讨肝病中Gc球蛋白和上述4种细胞因子的关系。

1 材料与方法

1.1 病例选择

选取2006年2月-2007年2月入住吉林大学第一医院感染科的肝病患者165人,具体如表1。

表1 各肝病组的具体人数及平均年龄

上述患者入院后,采集静脉血2-4毫升,留取血清或血浆置于-20℃冷冻保存。诊断标准参照2000年9月西安中华医学会传染病与寄生虫学分会、肝病学分会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》[3]及中华医学会感染病学分会肝衰竭与人工肝学组,中华医学会肝病学分会重型肝病与人工肝学组联合制定的《肝衰竭诊疗指南》[4]。

1.2 实验试剂、仪器和方法

酶联免疫吸附测定试剂盒(KIT034),人白介素-10、人白介素-4、人干扰素-γ、人肿瘤坏死因子-α定量酶联检测试剂盒(96人),BIO-RAD550酶标仪(美国)。应用ELISA方法检测血清中游离的Gc球蛋白和细胞因子 IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 的浓度。

1.3 数据处理

所有的数据采用spss11.5软件对数据进行分析。P＜0.05为有统计学意义;P＜0.01为有显著统计学意义;P＜0.001为有非常显著统计学意义。

2 实验结果

2.1 重症肝炎组Gc球蛋白浓度值最低,为157.26±79.68 mg/ml,较急性肝炎组、慢性肝炎组、肝硬化组及正常对照组相比,Gc球蛋白浓度的降低具有非常显著的统计学意义。慢性乙型肝炎组、肝硬化组的Gc球蛋白浓度和正常对照组相比,未见统计学差别(p＞0.05),见表2和表3。

2.2 IL-4、TNF-α、IFN-γ在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬化及重症肝炎组患者外周血的浓度,较正常对照组相比,均是显著升高的(P＜0.001-P＜0.05),而IL-10的肝病组与正常组之间、肝病组之间相比,均未有显著差别(P＞0.05)见表2。

表2 各组肝病的Gc球蛋白和4种细胞因子的浓度(±s)

表2 各组肝病的Gc球蛋白和4种细胞因子的浓度(±s)

⑴⑵⑶①③ⅠⅢP＜0.001;②⑷ⅡⅣP＜0.01;④P＜0.05;㈠㈡㈢㈣P＞0.05

组别 例数 Gc球蛋白(mg/ml) IFN-γ(ng/ml) TNF-α(ng/ml) IL-4(ng/ml) IL-10(ng/ml)重症肝炎组 36 157.26±79.68 72.36±74.24⑴ 28.95±30.79① 31.63±14.82Ⅰ 90.08±237.55㈠乙肝肝硬化组 54 224.88±64.77 112.52±83.93⑵ 39.81±75.79② 28.82±33.39Ⅱ 59.82±204.48㈡慢性乙型肝炎组 46 249.42±28.44 68.58±53.41⑶ 29.11±45.18③ 22.99±12.55Ⅲ 24.66±37.33㈢急性乙型肝炎组 15 250.28±28.15 103.86±90.39⑷ 16.73±24.72④ 22.68±11.63Ⅳ 23.91±18.13㈣正常对照组 14 237.11±5.89 8.52±12.01 2.46±5.18 12.06±7.77 19.28±15.64

表3 各肝病组Gc球蛋白和重症肝炎组、正常对照组之间相比的 t值和p值(上为 t值;下为 p值)

2.3 Gc球蛋白和不同肝病组中细胞因子的相关性Gc球蛋白在不同肝病组中,和细胞因子有着或正或负的相关性,见表4。

和正常对照组相比*P＜0.05,**P＜0.01。

2 讨论

Gc球蛋白在机体存在严重损伤时,如重症肝炎中,血中浓度是明显降低的,Gc球蛋白是急性时相反应蛋白,炎症存在时,肝脏合成Gc球蛋白就会增加,Schi?dt FV等[9]研究提示,肝脏损伤时,肝脏合成Gc球蛋白的速率是增加的,暴发性肝衰竭和急、慢性肝炎,Gc球蛋白合成速率增加至4.1±1.3 mg/min,而正常对照组中其合成速率为0.6 mg/ml。不同肝病患者循环中Gc球蛋白浓度不同依赖于Gc球蛋白合成与消耗速率之间的关系。重症肝炎时,Gc球蛋白和大量肝细胞破坏释放入血的肌球蛋白结合并被消耗,机体合成Gc球蛋白的速率增加不能代偿Gc球蛋白的迅速消耗而使Gc球蛋白显著降低。Lee等实验证明:暴发性肝脏衰竭患者Gc球蛋白的水平是显著降低的,且是各种肝脏损伤中Gc球蛋白下降水平最低者[10,11]。本研究中重症肝炎患者体内Gc球蛋白水平亦显著低于正常对照组和其它肝病组,其它肝脏疾病如急、慢性肝炎,肝硬化等,Gc球蛋白未见明显降低,甚至是升高的,考虑可能是机体反应性合成Gc球蛋白的速率升高,当肝细胞被破坏速率较缓或反复少量破坏时,未有大量肌球蛋白短时间释放入血,消耗大量的Gc球蛋白,血中Gc球蛋白不会减少很明显(如肝硬化、急性乙型肝炎),甚至可能因为代偿而是增高的(慢性乙型肝炎),从而体现机体的自我保护机制。通过重症肝炎和其它肝病患者体内Gc球蛋白的比较,可知Gc球蛋白浓度在重症肝炎患者体内的改变显著、敏感,且可以协助诊断重症肝炎。重症肝炎病情重,预后差,诊断复杂,早期准确诊断重症肝炎有利于采用正确、有效、及时治疗手段,从而提高患者生存率,因为Gc球蛋白检测可以敏感反映肝脏坏死程度,所以Gc球蛋白检测对早期、准确诊断重症肝炎具有重要意义。国外已经应用Gc球蛋白作为诊断重症肝炎及评价预后的参考指标,2005年美国肝病学会发布了对急性肝衰竭处理的建议中有关于Gc球蛋白应用情况介绍。国内关于Gc球蛋白的研究极少,本研究是近年来首例关于Gc球蛋白研究。

乙型肝炎病毒进入机体,机体通过免疫应答抗病毒,T淋巴细胞是病毒特异性的免疫应答中最重要的效应器,T淋巴细胞在受到病毒抗原刺激后,分化为杀伤性T淋巴细胞(CTL或Tc)和辅助T淋巴细胞(Th),Tc一方面通过直接溶解感染细胞来清除病毒,但更主要的是通过分泌 IFN-γ、TNF-α等细胞因子,通过非溶解细胞的途径清除病毒[12-15]。Th细胞可以分为Th1和Th2两个主要亚型,Th细胞中的Th1分泌TNF、IFN-γ等细胞因子,介导细胞免疫,Tc细胞活化就是通过Th1介导的,Th1反应占优势时,有利于病毒的完全清除;Th2细胞主要分泌IL-4、IL-10等细胞因子,这些因子可以抑制Th1型细胞因子的作用,并且介导体液免疫[16],Th2免疫占优势时,可以导致病毒感染的慢性化。本研究显示在重症肝炎组,Gc球蛋白和IFN-γ成正相关,可能为重症肝炎时,大量肝脏细胞破坏,乙肝病毒水平下降,用于清除病毒的T细胞分泌的IFN-γ水平亦随之相对下降;在其它肝病中,Gc球蛋白和细胞因子也存在各种相关性,从而提示,Gc球蛋白和肝损伤关系密切,水平可以随着肝损伤程度不同而改变,机体免疫调节在不同类型、程度肝损伤中表现不同,肝损伤类型、程度和机体免疫调节关系密切,更加深入的了解需要进一步研究探索。

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The detection of Gc-globulin and cytokines IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 in the serum of patients of liver disease

WANG Chong,JIANGYang-fang,JIN Qing-long,et al.(Department of Hepatobiliary andPancreaticDiseases,First Hospital ofJilinUniversity,Changchun130021,China)

ObjectiveThis study was designed to detect the concentration ofGcglobulin andassess itsclinical significance in different liver diseases.especially in severe hepatitis.and discuss the correlation between Gc globulin and cytokines.MethodsDouble sandwiches ELISA was used to detect serum Gc globulinconcentration and cytokines IFN-γ,TNF-α,IL-4,IL-10 concentration.ResultsThere is significant difference between severe hepatitis group and control group,acute HBV hepatitis group,chronic HBV hepatitis group,HBV related cirrhosis group separately(P＜0.001).In various liver diseases,Gc-globulin is correlatedwith cytokines IFN-γ,TNF-α,IL-4,IL-10.ConclusionGc globulinis closely correlatedwith liver injury.Gc globulin couldbe usedto diagnose severe hepatitis.Gc-globulin is correlated with the above 4 cytokines in different liver diseases.

severe hepatitis,Gc globulin,cytokines

R575

A

1007-4287(2010)06-0870-03

国家自然科学基金资助课题(30771912,核苷类似物治疗对慢乙肝患者免疫功能重建的作用及其机制)

*通讯作者牛俊奇(E-mail:junqiniu@yahoo.com.cn)

王崇(1981-),吉林大学第一医院肝胆胰内科,医师,主要研究肝胆疾病。

2009-06-12)