结核杆菌蛋白芯片检测对活动性肺结核的诊断价值

曹军皓,黄前川,赵冰红

(广州军区武汉总医院检验科,湖北武汉 430070)

结核杆菌蛋白芯片检测对活动性肺结核的诊断价值

曹军皓,黄前川,赵冰红

(广州军区武汉总医院检验科,湖北武汉 430070)

目的评价结核杆菌蛋白芯片对肺结核的诊断价值及其影响因素。方法对痰涂片阳性肺结核病患者结核杆菌蛋白芯片和胸部CT扫描结果进行对比,分析肺结核病变范围和类型等因素对结核杆菌蛋白芯片检测的影响。结果结核杆菌蛋白芯片阳性率72.0%,CT诊断阳性率为90.0%,两种方法同时检测阳性率达到96.0%;多个肺野肺结核的结核杆菌蛋白芯片阳性率高于单个肺野(P＜0.05),有基础疾病较无基础疾病检出率低(P＜0.01)。结论病变范围及基础疾病影响结核杆菌蛋白芯片的阳性率,胸部CT扫描联合结核杆菌蛋白芯片检测可以提高肺结核的诊断率。

蛋白芯片;肺结核;CT扫描

(Chin J Lab Diagn,2010,14:1440)

肺结核(Pulmonary tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacteruin tuberculosis)引起的一种慢性传染病。我国结核病形势严峻,每年新发生肺结核患者约145万,全年死于结核病者达20万余人,相当于各种其他传染病死亡人数总和的2倍。常规实验痰涂片抗酸染色镜检和痰结核菌培养法存在着检出率低、周期长等不足,严重影响着肺结核的临床诊断和治疗。本实验通过结核蛋白芯片技术检测痰涂阳性肺结核患者血清中3种特异性抗体(LAM、38 KD和16 KD),结合胸部CT扫描检测结果,评价结核蛋白芯片技术在肺结核中的诊断价值及影响因素。

1 材料与方法

1.1 标本来源

收集我院经CT检查及痰涂阳性肺结核患者的血液标本50例,其中男33例,女17例,平均年龄55岁,诊断均符合2001年中华医学会结核分会制定的《肺结核诊断和治疗指南》中肺结核的诊断标准。另留取50例健康体检者血液标本,其中男31例,女19例,平均年龄53岁。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 结核分枝杆菌IgG抗体(结核蛋白芯片)检测试剂盒及PBT—X2型芯片阅读仪由南京大渊生物技术工程有限责任公司提供。

1.2.2 结核抗体蛋白检测芯片的操作步骤 在芯片盒窗口内加入4滴A试剂,使膜完全浸湿;待完全渗入后,室温放置 1 min,加入待检血清 100 μ l;待血清完全渗入后,滴加B试剂6滴;待完全渗入后,滴加C试剂10滴;待完全渗入后,最后滴加D试剂6滴。反应完毕后30 min内,将蛋白检测芯片放入芯片阅读仪进行检测分析,结果根据南京大渊生物技术工程有限责任公司生产的芯片阅读仪设置参数自动判别。

1.2.3 结果判断 蛋白芯片试剂盒采用基因工程表达的结核分枝杆菌16 KD蛋白、38 KD蛋白及LAM酯多糖3种结核菌复合群特异性的抗原来检测待检血清中的抗体,如果任一抗体检测阳性,结果可判定为阳性,3种抗体检测均为阴性,结果可判定为阴性。

1.3 统计学处理

采用 χ2检验,P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 结核杆菌蛋白芯片检测痰涂阳性肺结核患者结果 灵敏度为72.0%(36/50),特异度 98.0%(49/50),见表 1。

表1 结核杆菌蛋白芯片检测肺结核患者和健康人的结果

2.2 结核蛋白芯片检测与胸部CT扫描结果 50例痰涂阳性确诊为肺结核患者的CT检测阳性为45例;结核蛋白芯片检测阳性为36例,其中3例CT检测为阴性,见表2。

2.3 结核蛋白芯片与胸部CT扫描结果比较 结核蛋白芯片阳性率(72%,36/50)低于胸部CT(90%,45/50),χ2=4.27,P＜0.05,两者符合率为 70%。见表3。

表2 结核蛋白芯片检测与胸部CT扫描结果

表3 结核蛋白芯片与胸部CT检测比较

2.4 结核蛋白芯片检测技术影响因素分析 结核病病变范围影响及基础疾病影响阳性检出率(χ2值为5.06和12.70),患者结核病类型、年龄和性别对检测结果无影响(χ2值为0.08、0.40和1.65),见表4。

表4 结核蛋白芯片检测影响因素

3 讨论

长期以来结核病的诊断存在许多不足,抗酸杆菌涂片检查阳性率平均检出率只有25%-35%[1],结核菌培养时间长达4-8周,聚合酶链反应(PCR)技术虽然灵敏度高,却易产生假阳性[2]。结核蛋白芯片技术是近期研发的一种检测结核病的方法,原理是利用芯片技术和免疫渗滤技术同时检查三种结核特异性抗体的方法,本研究通过比较50例痰涂片阳性肺结核病患者的结核杆菌蛋白芯片和胸部CT扫描结果,对结核杆菌蛋白芯片检测技术的临床价值及其影响因素进行评价。

根据结核蛋白芯片结果判断标准,50例痰涂阳性确诊为肺结核患者的结核蛋白芯片检测阳性率为72%(36例),高于任何单一抗体检测的阳性率,与郭光云等的检测结果基本一致[3];表2和表3结果显示结核蛋白芯片检测阳性率低于CT(90%,45例),两者符合率为70.0%(35/50),但其中3例阳性患者CT扫描呈现阴性,两种方法同时检测阳性率可达96%(48/50);患者的年龄、性别和肺结核的类型不影响结核蛋白芯片的检测结果(P＞0.05,本研究仅发现浸润型和慢性纤维空洞型两种肺结核,与病例数有限相关),但多个肺野结核阳性率高于单个肺野结核(P＜0.05),有可能与病变范围越大,变态反应越强,产生的抗体滴度越高有关。此外,有基础疾病较无基础疾病检出率低(P＜0.01),基础疾病可致假阴性,其中以糖尿病为主(7/14),其次为肿瘤和重症感染,作者认为这类患者免疫功能下降,或者用药后抑制了免疫功能,造成了患者体内的抗体水平低于检测下限相关,结核菌素试验阳性率也较低,并且免疫功能低下时缺乏典型的影像和临床表现。本研究中有3例CT结果呈假阴性,Christie Y等研究发现糖尿病患者的活动性肺结核病发生率可增加3-4倍[4],因此当糖尿病或免疫功能低下的临床疑似结核患者,如果胸部影像学不典型时,可采用结核蛋白芯片进一步明确诊断[5-6]。

以上数据显示,结核蛋白芯片技术较抗酸染色、结核菌培养及结核杆菌PCR具有简便、快速(＜20 min)、灵敏度高、特异性强、低成本等显著优点,与胸部CT扫描相结合可降低结核病的漏诊率,是影像学检测的重要补充,值得推广应用。

[1]邱森灵,林开生,贺 惠,等.迪比多检测结核分枝杆菌抗体在肺结核诊断中的应用[J].现代检验医学杂志,2005,21(3):60.

[2]刘丽英,董小青,王丹敏.几种常见的结核杆菌快速检测方法[J].中国卫生检验杂志,2004,14(3):341.

[3]郭光云,陈 功,郭凌郧,等.结核蛋白芯片对肺结核诊断的临床价值[J].中国防痨杂志,2005,279(6):367.

[4]Christie Y,Jeon,Megan B.Murray Diabetes Mellitus Increases the Risk of Active Tuberculosis:A Systematic Review of 13 Observational Studies[J].PLoS Medicine,2008,5(7):1091.

[5]TatarD,Senol G,AlptekinS,et al.Tuberculosis in diabetics:features inan endemic area[J].Jpn J Infect Dis,2009,62(6):423.

[6]程瑞新,詹松华,毕小利.免疫功能低下患者肺部感染的CT表现与鉴别诊断[J].中国中西医结合影像学杂志,2009,7(4):245.

Study on the detection of anti-mycobacterium tuberculosis antibodies using protein chip technology

CAO Jun-hao,HUANG Qian-chuan,ZHAO Bin-hong.(Department of Laboratory Medicine,Wuhan General Hospital of Guangzhou Command,Wuhan430070,China)

ObjectiveTo evaluate the application value of protein chip technology in the detection of patients with active pulmonary tuberculosis.MethodsCompared the results of Mycobacterium tuberculosis protein chip and chestCT test in 50 patientswith sputum smear-positive pulmonary tuberculosis patients,analyzed the effect of lesion and type of pulmonary tuberculosis on protein chip technology.ResultsThe positive rate of protein chip,CT and combined detection was 72.0%,90.0%and 96.0%respectively,which is higher inthe patientswithout underlying disease or with multiple lung field tuberculosis.ConclusionBoth the leison of lung and immune fuction could affect the positive rate,combined measurement of protein chip and chest CT will enhance diagnosis of pulmonary tuberculosis.

Protein chip;pulmonary tuberculosis;CT scanning

R521

A

1007-4287(2010)09-1440-03

曹军皓(1959-),女,广州军区武汉总医院检验科主任,学士,主要从事临床检验及病毒性肝炎的实验研究。

2009-12-25)