王 军 内蒙古大学生命科学学院农学系 010021
寄生性线虫是家畜的一种主要寄生虫病,长期以来对畜牧业的发展造成了巨大的影响。年复一年,控制家畜寄生性线虫病的传统方法是用化学药物驱虫。长期反复的使用驱虫药,使虫体产生抗药性,结果驱虫药的药效下降,年年驱虫,年年研制开发新药,化学驱虫药的大量使用,造成畜产品的药物残留,严重的危害人畜健康同时。被驱虫动物体排出的降解或未经改变的化学药物污染环境,破坏生态平衡,进一步形成不可估量的恶性循环。
捕食线虫性真菌可有效的预防家畜寄生性线虫,从而可以解决化学药物驱虫带来的诸多问题。利用生物控制家畜寄生性线虫对畜牧业的可持续发展、维护自然界的生态平衡、发展无污染的绿色动物畜产品,具有极为重要的意义。
家畜感染寄生性线虫的途径是摄食了外界环境中的感染性幼虫,幼虫在家畜体内发育为成虫,成虫排卵于外界环境中,卵在外界发育为感染性幼虫,感染性幼虫被家畜食入而造成感染。临床应用捕食性真菌孢子饲喂给家畜,孢子随家畜粪便和寄生虫虫卵排到外界环境中,孢子发育产生菌丝,进而产生捕获杀死线虫的捕食性器官,将虫卵孵出的幼虫杀死,这样避免了虫体在草场上的扩散,从而起到了预防寄生性线虫病的作用。
捕食线虫性真菌广泛存在于自然界,对粪便降解无任何影响(Fernandez,1999)[1];经调查,人工应用对土壤线虫种群也无害(Baudena 等,2000)[2];不会影响土壤和环境中的生态种群 (Faedo et al,2000)[3]。更不会造成对自然生态平衡的破坏。由于真菌孢子在动物体内不生长繁殖,因而不对人畜造成任何危害;捕食线虫性真菌作用的对象是自由生活阶段的幼虫,即在虫体感染前发生作用。所以,避免了感染后才杀灭的弊端,防止了寄生虫在动物体内的危害。此外,还抑制了粪便中幼虫向周围环境的传播扩散,减轻了草场的污染,降低了家畜对寄生虫的感染率和感染强度,减少了动物消化道寄生虫的感染数量,降低了动物粪便中排出的虫卵数,减轻了动物脏器的病变,从而提高动物的增重率(蒋金书,2000)。由于捕食线虫性真菌杀虫率不是100%[4],如此环境中仍保持一定数量虫体,对动物产生一定的临床免疫力,将寄生虫感染控制在亚临床水平,达到了预防临床寄生虫病发生的效果。
捕食线虫性真菌对动物寄生性线虫捕食作用的研究最早始于1939年,Roubaud和Deschiens在实验室内试验,证明纺锤隔指孢菌(Dactylella ellipsospora)对类圆线虫属和钩口线虫属感染期幼虫的杀虫作用。1941年,他们又进行简单的临床试验,在面积为25m2的草场上,加入纺锤隔指孢菌(Dactylella ellipsospora)及少孢节丛孢菌(Arthrobotrygs oligospora)两种捕食线虫性真菌后,结果羔羊感染乳突类圆线虫和仰口线虫的数量明显减少。捕食线虫性真菌主要的代表种类有3种[5]。捕食线虫的方式有套捕型(hooping)捕食线虫性真菌和粘捕型(sticking)捕食线虫性真菌。套捕型捕食线虫性真菌代表种为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)和梨形指环菌(Dactylaria pyriform is),它们以菌环、菌网作为捕食性结构(器官),以套捕方式杀灭线虫幼虫。梨形指环菌可产生多量厚垣孢子(chlamydospore)。粘捕型捕食线虫性真菌代表种为纺锤隔指孢菌(Dactylella ellipsospora)。可形成菌结捕食线虫性结构,以粘捕的方式杀灭线虫幼虫。捕食线虫性真菌多生活在阴暗、潮湿、富含腐植质的土壤环境中。在温暖季节时,即雨季开始和结束时[6],夏秋温暖季节,采用0.4g/L玉米粉琼脂培养基(CMA),一般从树木下、花园、果园等地方的土壤中,容易进行分离培养捕食线虫性真菌。将采样洒在0.4 g/L玉米粉琼脂双抗培养基上,将培养皿保持一定的湿度,在(20±1)℃温箱内培养3-7d后,真菌菌丝长至培养皿的2/3以上时,分别于培养皿内加入有活力的线虫第3期幼虫2000~4000条,放于温箱内继续培养,每天用倒置显微镜观察,从出现菌环、菌网或菌结等捕食线虫性结构(器官),同时有幼虫被捕获的培养皿中,镜下切取5mm×5mm含有捕食线虫性结构的培养物转接种于0.4g/L玉米粉琼脂培养基中,继续培养,待菌丝生长布满平皿后,再加入2000~4000条幼虫,每日观察1次,再进行转接种。如此反复多次进行分离纯化,即可获得捕食线虫性真菌纯培养物[5,7]。将获得捕食线虫性真菌纯培养物长有菌丝的琼脂块切成约5mm×5mm的小块,接种于玉米粒培养基中,进行扩大培养,约经3周,待分生孢子大量形成后,以含孢子9×107的玉米粒培养物饲喂家畜,可有效的防制家畜寄生性线虫病[8]-[10]。
[1]Fernandez,A.S.,Larsen,M.,Henningsen,E.et al.,Effect of Duddingtonia flagrans againstostertagia ostertagi in cattle grazing at different stocking rates.parasitology ,999,119:105-111.
[2]Baudena,M.A.,Chapman,M.R.,Larsen,M.et al.,Efficacy of the nematophagous Duddingtonia flagrans in reducing equine cyathostome Larvae on pasture in southern Lonisiana.Veterinary Parasitology ,2000,89:219-230.
[3]Faedo,M.,Larsen,M.,&Thamsborg,S.,Effect of different times of adm inistration of the nematophagous fungus Duddingtonia flagrans on the transm ission of ovine parasitic nematodes on pasture-a plot study.Veterinary Parasitology,2000,94:55-65.
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[5]杨晓野,杨莲茹,刘珍莲,等.捕食线虫性真菌的分离培养及分布规律[J].中国兽医学报,2003,23(4):344-346.
[6]Saumell C A, Padilha T, Santos C, et al.Nematophagous fungi in fresh faeces of cattlein the Mata region of Minas Gerais state,Brazil[J].Vet Parasitol,1999,82:217-220.
[7]杨莲茹,杨晓野,刘珍莲,等.捕食线虫性真菌生长特性的观察研究[J].中国兽医科技,2003,33(2):3-7.
[8]杨晓野,吴彩艳,杨莲茹,等.口服少孢节丛孢菌孢子对家畜粪便中线虫幼虫的杀灭研究[J].畜牧兽医学报,2005,36(9):927-930.
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