高效液相色谱法测定硫辛酸注射液中有关物质及其含量

费瑞娟，陈祥峰 ，倪静文

（1.江苏省电业职工疗养院，江苏无锡 214164；2.江苏奥赛康药业有限公司，江苏南京 211112）

硫辛酸，亦称α-硫辛酸[1]，其具备一般抗氧化剂所不能及的抗氧化性，可以祛除机体自由基，既溶于水又溶于脂肪，有良好的配伍性，能促进机体利用葡萄糖合成维生素C，并且促进合成谷胱甘肽，能有效祛除黑色素，还可协助辅酶进行有利于机体免疫力的生理代谢[2]。国外科学家最近研究发现，从临床角度看，仅α-硫辛酸对于阿尔茨海默痛有抑制效果，并且α-硫辛酸能保存和再生其他抗氧化剂[3]，在德国用于治疗糖尿病性神经病已有数十年的历史，其医用价值也正在得到认可[2]。国内一些厂家亦将其用作肝保护剂，并不断有新用途的报道[4]，国外常采用手性柱，以电化学检测法[5]、脉冲安培检测法[6]或荧光检测法[7]作为生化样品的检测手段，利用二极管阵列检测器测定制剂中硫辛酸的含量[8]。本文建立一种用普通ODS柱紫外检测硫辛酸的高效液相色谱法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：岛津LC-10Avp高效液相色谱仪系统，包括LC-10ATvp泵、SPD-10Avp紫外检测器、C-R6A色谱数据处理仪。

试剂：乙腈，色谱纯（J&KSCIENTIFIC.LTD；批号：LK20K02）；磷酸二氢钾，分析纯（上海凌峰化学试剂有限公司；批号：20090208）。

1.2 液相色谱条件

色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，粒度5 μm，规格:150.0 mm×4.6 mm，不锈钢柱（Shimpack CLC-ODS）；流动相：乙腈—0.005 mol/L 磷酸二氢钾溶液（v∶v=50∶50），用磷酸调节 pH 值至 3.0；流速：1.0 ml/min；检测波长：212 nm；进样量：20 μl。

1.3 供试溶液配制

有关物质检测项下供试品溶液Ⅰ配制：避光操作。取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），精密称定，置25 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

含量测定项下供试品溶液Ⅱ配制：避光操作。取装量差异项下的内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），精密称定，置25 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml置25 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

1.4 方法的专属性考察

1.4.1 空白试验 取处方量的空白辅料—甘露醇加0.001 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释，量取20 μl进样，结果可见稀释液及辅料对含量及有关物质检查均无干扰。

1.4.2 酸破坏 取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液5 ml，摇匀，于室温条件下放置4 h后，滴加1 mol/L氢氧化钠溶液中和，再加流动相稀释至刻度，摇匀。

1.4.3 碱破坏 取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加0.1 mol/L氢氧化钠溶液5 ml，摇匀，于室温条件下放置4 h后，滴加1 mol/L盐酸溶液中和，再加流动相稀释至刻度，摇匀。

1.4.4 氧化破坏 取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），置25 ml棕色量瓶中，加30%过氧化氢5 ml，摇匀，于室温条件下放置2 h后，加流动相稀释至刻度，摇匀。

1.4.5 光照破坏 取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），置25 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，置强光条件下（450 0 Lx）放置4 h后，取出。

1.4.6水浴破坏 取本品内容物适量（约相当于硫辛酸25 mg），置烧瓶中，加流动相使溶解并稀释至25 ml，摇匀，置100℃水浴上加热回流4 h取出，冷却。

测试结果表明：该方法专属性强，能有效检测本品经酸、碱、氧化、光照、热破坏后产生降解产物等杂质，说明本色谱条件可行。

1.5 含量测定方法

1.5.1 定量限、检测限 取硫辛酸对照品加流动相溶解并逐级稀释，取 20 μl进样，记录色谱图，按10倍信噪比计算本品的检测定量限，结果为3.6 ng；按3倍信噪比计算本品的最低检测限，结果为1.1 ng。

1.5.2 精密度试验 取含量测定项下的供试品溶液，连续进样5次，根据主峰面积计算进样精密度RSD为0.20%。

1.5.3 准确性试验 取硫辛酸原料，按本品处方量的80%、100%、120%分别投料，按处方工艺与100%的量的辅料混匀，照含量测定项下的方法，测得RSD为0.53%。

1.5.4 重复性试验 取同一批号注射用硫辛酸，照含量测定项下的方法测定本品中硫辛酸的含量，共测定6次，计算含量及偏差，RSD为0.26%，表明本方法重现性良好。

1.5.5 中间精密度试验 取同一批号样品，照本品含量测定项下的方法，分别由不同人不同时间于不同的高效液相色谱仪上测定本品中硫辛酸的含量，结果硫辛酸峰面积的RSD为0.16%，表明进样精密度良好。

1.5.6 稳定性试验 取有关物质项下的供试品溶液，于室内避光条件下放置，并且分别于 0、1、2、4、6、8 h 进样，测定硫辛酸峰面积及有关物质的RSD分别为3.0%、0.35%，结果显示两者均无明显变化，表明硫辛酸溶液在8 h内稳定。

2 结果

取经40℃减压干燥至恒重的硫辛酸对照品适量（约50mg），精密称定，置50 ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取该溶液 1、3、5、7 和 10 ml，置 25 ml棕色量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密量取20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以进样量（W）为横坐标，以其相应的硫辛酸峰面积（A）为纵坐标，计算回归方程，线性方程为 A＝279 45 w-115 7，r＝0.999，线性范围 0.81～8.10 μg，相关系数 r＝0.999。

3 讨论

本文建立一种用普通ODS柱紫外检测硫辛酸的高效液相色谱法。硫辛酸检测浓度的线性范围为0.81 μg～8.10 μg(r：0.999)；平均回收率为 99.17%(RSD=0.40%)；日内、日间 RSD均小于2.6%。本方法简便、准确，可用于硫辛酸注射液的有关物质及其含量的测定。

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