鲎试剂法检测细辛脑注射液中的细菌内毒素

曹霞斐

湖南衡阳市疾病预防控制中心职业病科（421001）

细辛脑注射液是一种能对抗组胺、乙酰胆碱，缓解支气管痉挛，对咳嗽中枢有较强抑制作用的物质，本品能使浓痰变稀，降低痰液黏滞，类似氨茶碱松弛支气管平滑肌作用。本品还能提高大脑皮质的电刺激阈，抑制电刺激的突触传导及癫痫性电的扩散。本品为无色至淡黄色的澄明液体形态的一种中药注射剂，其主要成分为细辛脑，本品经注射后能迅速分布于肝、肾胆汁及心、脑、肺、脾等脏器，体内半衰期4～6h，临床主要用于肺炎、支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病伴咳嗽、咯痰、喘息等。根据中国药典收载的细菌内毒素检查法具有敏感度高、快速、准确、操作简便等优点，本文按《中国药典》2005年版二部附录的细菌内毒素检查法及其应用指导原则，研究了细辛脑注射液对细菌内毒素检查试验的干扰情况，建立了细辛脑注射液细菌内毒素检查方法，本方法操作简单易行，适合制药企业及临床对细辛脑注射液中的细菌内毒素的质量控制，确保临床的用药安全。现将具体方法介绍如下。

1 实验材料

1.1 鲎试剂

批号0702140，λ=0.25EU/mL，0.1mL/支，湛江博康海洋生物有限公司；批号0809040，λ=0.25EU/mL，0.1mL/支，湛江博康海洋生物制品厂。

1.2 细菌内毒素工作标准品

1402-2007-3，150EU/mL，中国药品生物制品检定所。

1.3 细菌内毒素检查用水

970711，10mL/支，中国药品生物制品检定所。

1.4 仪器

旋涡混合器XW-80A，上海医科大学仪器厂；电热恒温水浴锅，HH.SY11-Nil，天津市中环实验电炉有限公司。

1.5 细辛脑注射液

批号：081106、090303、090402、090611，2mL/支，桂林南药股份有限公司。

2 实验方法与结果

2.1 鲎试剂敏感度复核

按《中国药典》2005年版二部附录XIE细菌内毒素检查法进行[1]，结果见表1。

经复核，鲎试剂的敏感度λc均在0.5～2.0λ，结果表明试验用的鲎试剂敏感度标示均符合规定，可用于鲎试剂法检测药物中的细菌内毒素。

2.2 细辛脑注射液中细菌内毒素限值的确定[2,3]

细菌内毒素限值L=K/M，式中K=5EU/（kg·h）；由于细辛脑注射液在临床上成人最大用量为6mL（24mg）/次，人均体质量按60kg计算，静脉滴注300mL输液按3h计算，则M=6/(60×3)。因此确定：L=K/M=5/[6/(60×3)]=150 EU/mL。

表1 鲎试剂敏感度复核试验结果

表2 细辛脑注射液细菌内毒素干扰预试验结果

表3 细辛脑注射液细菌内毒素干扰试验结果

表4 细辛脑注射液细菌内毒素检查试验结果

2.3 细辛脑注射液的最大有效稀释倍数（MVD）的确定[4]

拟选用0.25EU/mL敏感度的鲎试剂

据MVD=C.L/λ

已知：L=150 EU/mL，C=2%，λ=0.25EU/mL

经计算得细辛脑注射液供试品的有效稀释倍数为12倍，因此，细辛脑注射液供试品经细菌内毒素检查用水按1∶11稀释所得到的稀释液进行干扰试验。

2.4 细辛脑注射液供试品干扰预试验

按照中国药典附录ⅪE中细菌内毒素检查法的具体要求进行细辛脑注射液供试品的干扰预试验，结果见表2。

由表2提示，细辛脑注射液供试品在细菌内毒素检查用水进行1∶11稀释后的溶液对试验没有干扰作用。

2.5 细辛脑注射液供试品干扰试验

按照中国药典附录ⅪE中细菌内毒素检查法的具体要求进行细辛脑注射液供试品的干扰试验。结果表明，3批供试品在1∶11稀释液浓度下对试验无干扰作用，结果见表3。

结果表明，3批细辛脑注射液供试品在1∶11稀释液浓度下对试验无干扰作用。

2.6 细辛脑注射液供试品检查试验

按《中国药典》2005年版二部附录ⅪE细菌内毒素检查法对细辛脑注射液供试品进行细菌内毒素的检查细辛脑注射液供试品，结果见表4。

检查结果显示，用一个厂家两个批号的鲎试剂考察细辛脑注射液在细菌内毒素检查用水进行1∶11稀释后的溶液的内毒素限值，结果符合中国药典对其有效性的规定。

3 讨 论

3.1 细菌内毒素检查的试验方法方面的研究报道很多，被美国官方FDA承认的有：①凝胶法限量；②产色基质法定量；③浊度法（定量）。各国药典中规定的方法均为凝胶法（包括美国药典）。中国药典收载的也是凝胶法，在《细菌内毒素检查》应用指导原则后登载了定量法，最后仲裁以凝胶法为准。

3.2 鲎试剂在本检查法规定的条件下能检测出内毒素标准溶液或供试品溶液中的最低内毒素浓度，称为敏感度，用EU/mL表示。鲎试剂敏感度复核的意义在于：①考察操作者的操作技能；②考察实验室条件；③验证鲎试剂敏感度是否准确；④验证细菌内毒素工作标准品的效价是否准确。

3.3 药品细菌内毒素检查是一种限度试验，因此必须确定供试品的内毒素限值。当供试品中含内毒素低于限值时，按规定给药途径给药，就不会引起热原反应；反之就有可能引起热原反应。

3.4 进行内毒素检查时，不能使用敏感度值高于L值的鲎试剂，由于供试品的L值各不相同，很难得到敏感度值与L值完全相同的鲎试剂，而且只能用敏感度值低于L值的鲎试剂。

3.5 本实验结果表明，可应用鲎试剂法进行细辛脑注射液中细菌内毒素的检测。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2005:附录85.

[2]王思理,胡冠时,贡靖.细菌内毒素检查法及其应用[M].北京:气象出版社,2005:221-229.

[3]美国药典[S].22版.1995:377.

[4]李卓,肖美珍.鲎试验检测甲硝唑葡萄糖注射液热原的实验观察[J].衡阳医学院学报,2000,28(4):391.