反相高效液相色谱法测定盐酸奥洛他定片的含量

崔志红，周庆英，王 颖，张健翔

（1.鲁南制药集团股份有限公司，山东 临沂 276006； 2.山东省临沂市药品检验所，山东 临沂 276001）

盐酸奥洛他定为选择性H1受体拮抗剂，对化学递质白三烯、凝血激肽、血小板活化因子的产生及游离均有抑制作用，对神经递质速激肽的游离也有抑制作用，用于治疗过敏性鼻炎、荨麻疹、湿疹、皮炎、痒疹、皮肤瘙痒症、寻常型干癣、多形性渗出性红斑伴发的瘙痒[1-2]。笔者拟建立一种测定盐酸奥洛他定片中盐酸奥洛他定含量的高效液相色谱法，使盐酸奥洛他定和分解产物得以分离，以保证结果的准确性。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；UV2401型紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）；FA1104型电子天平（上海天平仪器厂）。盐酸奥洛他定对照品（北京天衡药物研究院，含量为100%，批号为060826）；盐酸奥洛他定片（北京天衡药物研究院，批号为 061101，061102，061103）；乙腈（色谱纯，Fisher Chemicals，批号为 063507）；蒸馏水（自制）；其他试剂为色谱纯。所有试液使用前均经0.45μm微孔滤膜过滤。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[3]

色谱柱：Zorbax SB-C18柱（250 mm×4.5 mm，5μm，美国安捷伦公司）；流动相：0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液（含0.2%辛烷基磺酸钠，用浓磷酸调 pH 至 3.0）-乙腈（65 ∶35）；流速：1.5 mL/min；检测波长：210 nm；柱温：室温；进样量：10μL。在此条件下，盐酸奥洛他定的保留时间为9.29 min，理论板数约为9600。

2.2 溶液制备

精密称取经105℃干燥至恒重的盐酸奥洛他定对照品25 mg，加流动相溶解并稀释制成每1 mL含0.25 mg的溶液，作为对照品溶液。取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸奥洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：精密称取空白辅料适量（约相当于盐酸奥洛他定12.5 mg），置50 mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定。结果空白辅料溶液在盐酸奥洛他定主峰保留时间处不出峰，对盐酸奥洛他定的含量测定无干扰。空白辅料、供试品溶液色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：称取105℃干燥至恒重的盐酸奥洛他定对照品约50 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解，加流动相稀释至刻度，摇匀；分别精密量取 1，2，3，4，5，6，7 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中分别含 0.05，0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35 mg的对照品溶液，分别精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱峰峰面积（A）。将峰面积（A）对相应的质量浓度（C）进行回归处理，得回归方程 A=29.943 C+17.152，r=0.9999（ n=7）。结果表明，盐酸奥洛他定质量浓度在0.05～0.35 g/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：取线性关系考察项下质量浓度为0.20，0.25，0.30 mg的对照品溶液，按拟订的色谱条件，每个质量浓度连续重复进样5次。结果的 RSD分别为0.10%，0.10%，0.12% （n=5），表明方法精密度良好。

重现性试验：取同一批（批号为061101）样品，依法制备供试品溶液并测定峰面积，计算标示含量。结果平均标示百分含量为99.63%，RSD=0.55% （n=6）。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为061101，含量为2.51%）20片，研细，精密称取细粉适量（约相当于盐酸奥洛他定12.5 mg），置100 mL量瓶中，平行制备6份，同时精密加入105℃干燥至恒重的盐酸奥洛他定对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，并依法测定峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，分别取10 μL注入液相色谱仪，按拟订的色谱条件进行测定，以外标法计算标示百分含量。结果批号为061101，061102，061103的3批样品中，盐酸奥洛他定的标示百分含量分别为99.63%，99.22%，99.55%。

3 讨论

以流动相为溶剂，配制适当质量浓度的盐酸奥洛他定对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果最大吸收波长为206 nm，故选择检测波长为210 nm。试验中曾以C18柱为固定相，乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钠为流动相，通过调节流动相比例和水相的酸度进行了一系列试验，结果表明该流动相体系下主峰拖尾严重，理论板数低，主峰与最近杂质峰的分离度较小。因此，加入离子对试剂辛烷基磺酸钠，即以0.02 mol/L磷酸二氢钠溶液（含0.2%辛烷基磺酸钠，用浓磷酸调pH至3.0）-乙腈为流动相，当水相、有机相比例为65：35时，主峰保留时间适宜，柱效较高，最近杂质峰能够较好地分离，方法专属性强，线性范围宽，可以用于盐酸奥洛他定片的含量测定。

[1]孙晋瑞，孙 倩，于 静 .奥洛他定[J].齐鲁药事，2006，25（10）：636-638.

[2]徐维盛，牛长群.盐酸奥洛他定中有关物质的HPLC测定[J].中国医药工业杂志，2007，38（12）：870-871.

[3]梁 伟，周 辉，刘东阳，等.HPLC-MS/MS联用技术定量测定人血浆中奥洛他定浓度[J]. 质谱学报，2006，27（4）：193-197.