丹七片质量标准研究

廖名爱

（江西省吉安市妇幼保健院，江西 吉安 343000）

丹七片收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》（第1册），由丹参、三七组成，具有活血化瘀作用，临床用于血瘀气滞、心胸痹痛、眩晕头痛、经期腹痛等。丹参的化学成分包括脂溶性和水溶性两大部分，水溶性成分是主要活性成分，以丹酚酸B含量最高，是抗心肌缺血的主要成分[1-3]。原标准中无定性定量标准，为此笔者研究了方中三七的薄层色谱鉴别（TLC）法、丹参中丹参酚酸B含量的高效液相色谱（HPLC）法[4]，报道如下。

1 仪器与试药

HP-1100型高效液相色谱仪（美国），包括1322A在线脱气机、G1311A四元梯度泵、G1315A二极管阵列检测器、HP化学工作站；PBQ-Ⅰ型薄层自动铺板器（重庆南岸实验电器厂）；SPU-Ⅰ型自动喷雾显色仪（日本岛津）；CQ-250型超声波清洗器（上海船舶电子设备研究所）；定量毛细管（美国Drummond公司）；SimplicityTM型超纯水系统（Millipore公司）。丹参酚酸B、人参皂苷Rg1对照品均购于中国药品生物制品检定所；丹七片（江西心正药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 TLC法鉴别三七

取样品4片，研细，加甲醇30 mL，超声处理45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL溶解，用稀盐酸调节pH约为2，用醋酸乙酯20 mL振摇提取，弃去醋酸乙酯液，水层以水饱和正丁醇萃取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，再用氨试液40 mL洗涤，分取正丁醇液，以水40 mL洗涤2次，弃去水液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按处方取不含三七的其他药材，照样品制备工艺及上述方法制成阴性对照品溶液。取人参皂苷Rg1对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。分别吸取对照品溶液5"L、供试品溶液、阴性对照品溶液2"L，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G板上，以氯仿-醋酸乙酯 -甲醇 -水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置12 h的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点（图 1）。

图1 三七的薄层色谱图

2.2 丹参酚酸B含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Hypersil C18柱（250 mm ×4.0 mm，5"m）；流动相：甲醇 -0.15%甲酸（35 ∶65）；流速：1 mL/min；检测波长：286 nm；进样量：10"L。在此条件下，对照品溶液、供试品溶液均在保留时间约7 min处有一色谱峰，见图2。

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取丹参酚酸B对照品适量，加50%乙醇制成每1 mL含568"g丹参酚酸B的对照品溶液。取样品10片，研细，取约0.3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，称定质量，超声提取30 min，放冷，再称定质量，加50%乙醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45"m）滤过，取滤液，即得供试品溶液。取不含丹参的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：取对照品溶液适量，稀释成质量浓度分别为284.00，113.60，56.80，28.40，11.36"g/mL 的溶液，分别注入液相色谱仪测定峰面积，以进样量对峰面积进行线性回归，得回归方程 Y=16.5393075 X+44.1243，r=0.9999（ n=6）。结果表明丹参酚酸B进样量在0.114～5.68"g范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液，重复进样6次。结果峰面积的 RSD为1.20%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，每隔0.5 h或1 h，于8 h内依法测定。结果峰面积的 RSD为1.96%（n=6），表明供试品溶液在8 h内稳定。

重现性试验：取同一批样品，依法制成供试品溶液并测定。结果含量的 RSD为0.52%（n=6），表明方法重现性好。

加样回收试验：取样品适量，研细，取约0.15 g，精密称定，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入质量浓度为50.6"g/mL的丹参酚酸B对照品溶液15，20，25 mL各2份，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表1。

表1 丹参酚酸B加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取不同批次的样品，依法制备供试品溶液并测定，以外标法计算含量。结果批号为 040201，040202，040203，040501，040502，040503，040304，050101，050102，050103 的样品中丹参酚酸 B 的含量分别为 2.699，2.578，2.631，2.596，2.641，2.386，2.961，3.448，3.295，3.087 mg/片。

3 讨论

本制剂中丹参是经水提取干燥后制成片剂，因此用超声提取方法进行含量测定操作简便，经与回流提取比较，提取效果无差别；提取溶剂选择了50%甲醇、甲醇、50%乙醇、75%甲醇进行比较，50%乙醇的提取效果较好；对溶剂用量和提取时间也分别进行了比较，确定用25 mL 50%乙醇超声提取30 min。

[1]范英昌，赵桂峰，张文治.丹酚酸B对大鼠心肌梗死过程中病理形态学的影响[J]. 天津中医学院学报，2004，23（1）：12.

[2]刘 杰，高秀梅，王 怡.丹酚酸B对急性心肌缺血大鼠血流动力学的影响及作用分子机制研究[J]. 中草药，2006，37（3）：409.

[3]武 骏，徐 立，许 立.丹酚酸B对兔离体心脏缺氧再复氧损伤的保护作用[J]. 中国药理学与毒理学杂志，2007，21（3）：212.

[4]蒋万浪，袁祥慧.高效液相色谱法测定通脉颗粒中丹酚酸B含量[J].中国药业，2006，15（18）：27.