胃癌中Hsp90α和p53的表达及意义

余 慧

（长沙市第三医院老干科，湖南长沙 410015）

热休克蛋白（heat shock protein，Hsp）是一类在生物进化过程中高度保守并广泛存在于原核及真核生物中的蛋白，目前研究较多的是Hsp90。Hsp90根据是否含有丰富的谷氨酰胺片段，分为Hsp90α和Hsp90β[1]。Hsp90α有许多生物学功能，与肿瘤关系密切，在一些癌基因及其产物诱导的转化细胞核以及许多肿瘤细胞中Hsp90α表达增高[2]。p53基因是与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因。变异的p53受Hsp90保护[3]。本研究为了解Hsp90α及p53与胃癌发生及发展的关系，以及胃癌组织中Hsp90α及p53基因表达的相互关系，采用免疫组化S-P法检测胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中Hsp90α及p53的表达。

1 材料与方法

1.1 材料

70例标本来源于长沙市第三医院1998～2008年胃黏膜活检及手术标本，均经病理学证实。其中，慢性浅表性胃炎20例，慢性萎缩性胃炎20例，胃癌30例。

1.2 方法

标本经常规石蜡切片，厚4 μm，采用S-P法进行免疫组化染色。兔抗人Hsp90α多克隆抗体购自武汉博士德生物制品公司，抗p53蛋白单克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，S-P试剂盒购自福州迈新生物技术公司。

1.3 判断标准

光镜下观察Hsp90α阳性反应物为棕黄色颗粒，主要位于细胞质，少量位于细胞核。根据阳性颗粒多少及深浅程度分为：0级无表达；1级为浅黄色少量颗粒，阳性细胞比例≤25%；2级为浅黄色少量颗粒，阳性细胞比例为26%～50%；3级为棕黄色较多颗粒，阳性细胞比例为51%～75%；4级为棕黄色较多颗粒，阳性细胞比例＞75%。p53阳性定位于细胞核，低倍镜下观察棕黄色为阳性，按一个视野中阳性细胞的比例将表达强度分为5级：0级无表达；1级为阳性细胞比例≤25%；2级为阳性细胞比例为26%～50%；3级为阳性细胞比例为51%～75%；4级为阳性细胞比例＞75%。

1.4 统计学方法

以SPSS 10.0软件采用χ2检验进行统计学分析，P＜0.05为有显著性差异。

2 结果

2.1 Hsp90α及p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的表达

Hsp90α在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的阳性率分别为 70.0%（21/30）、60.0%（12/20）、30.0%（6/20）。p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的阳性率分别为 63.3%（19/30）、10.0%（2/20）、5.0%（1/20）。胃癌中 Hsp90α及p53的表达明显高于慢性浅表性胃炎（P＜0.05）；慢性萎缩性胃炎中Hsp90α的表达高于慢性浅表性胃炎（P＜0.05）；慢性萎缩性胃炎和慢性浅表性胃炎中p53表达无显著性差异（P＞0.05）；胃癌和慢性萎缩性胃炎中Hsp90α的表达无显著性差异（P＞005）；胃癌和慢性萎缩性胃炎中p53表达有显著性差异（P＜0.05）（表 1）。

表1 Hsp90α及p53在胃癌、慢性萎缩性胃炎及慢性浅表性胃炎中的表达（例）

2.2 胃癌中Hsp90α及p53表达的关系

对30例胃癌配对标本进行比较分析，其中，56.7%（17/30）的胃癌 Hsp90α、p53 均为阳性，23.3%（7/30）的胃癌 Hsp90α、p53均为阴性，13.3%（4/30）的胃癌Hsp90α阳性但p53阴性，6.7%（2/30）的胃癌 p53阳性但 Hsp90α阴性，Hsp90α及 p53表达呈正相关（P＜0.05）（表 2）。

表2 胃癌中Hsp90α及p53表达的关系（例）

3 讨论

热休克蛋白为生物体内普遍存在的蛋白质，在受到各种因素刺激诱导下，细胞内热休克蛋白表达增加，以抵御有害物质对组织细胞的损伤[4]。肿瘤为组织细胞在致癌物质刺激下发生恶性增殖的结果。胃是易受热刺激及感染诸因素刺激的一个器官，胃腺颈部增殖细胞亦即多分化潜能干细胞及胃黏膜上皮尚未分化，细胞最易受各种刺激因素的作用而损伤致癌[5-6]。胃黏膜在持续有害因素作用下发生癌变，此过程中热休克蛋白合成不断增加。Hsp90α是一类非常重要的热休克蛋白，具有很多生物学功能，其对细胞凋亡的影响和免疫作用与肿瘤关系密切。在肿瘤细胞中，Hsp90α呈现持续的高诱导表达，其表达比正常细胞高2～10倍，而且在病毒转化和化学诱导的肿瘤细胞中可明显看到Hsp90α水平升高。在胰腺癌中，Hsp90α呈选择性高表达，细胞中存在大量的Hsp90α mRNA[7]。Hsp90α的高表达增强了肿瘤细胞的抗杀伤能力，使细胞的抑制效应和死亡减弱[8]。本研究发现，从慢性浅表性胃炎到慢性萎缩性胃炎再到胃癌，Hsp90α表达呈递增趋势，表明Hsp90α高表达在细胞增殖中具有重要意义。

p53基因是目前研究得最为广泛和系统的抑癌基因之一，分为野生型和突变型。在细胞接受多种应激（如DNA损伤、药物、射线、癌基因作用等）信号后，DNA双链断裂，从而激活ATM激酶，进一步磷酸化p53，活化的p53可以激活p21等多种编码蛋白基因，参与DNA损伤修复、细胞周期调节、老化及凋亡，发挥抑制肿瘤的作用[9]。p53基因的突变使上述功能丧失，从而导致肿瘤形成。在大约50%的人类肿瘤中发现p53基因的突变。野生型p53蛋白的半衰期短，S-P法难以检测。突变型p53基因产物的半衰期长，可用S-P法检测。本研究发现从慢性浅表性胃炎到慢性萎缩性胃炎再到胃癌，p53基因表达递增，尤其是p53在胃癌中与在慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎中的表达有显著性差异，表明p53基因突变与胃黏膜病变的进一步恶化有关，提示p53可作为判断癌前病变恶变的一项敏感的客观指标，成为区分良恶性胃黏膜病变的一个显著标志物。

Hsp90α作为分子伴侣参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能，以帮助细胞在应激环境刺激下正常生长。Hsp90在细胞处于正常生理情况时是一个重要的调节者，在细胞突变过程中也是一个重要的缓冲因子，推测它可能同样可以纠正突变蛋白所发生的错误折叠[10]。目前已知它调控着大约40种蛋白的空间结构和突变，其中包括突变型p53[11]。本研究发现，Hsp90α及p53在胃癌中的表达呈正相关。Hsp90α与突变型和野生型p53均可形成较稳定的复合物。Hsp90α与突变型p53以复合物形式存在具有以下意义[12]：①Hsp90α的伴侣作用可使p53构象稳定，以保护p53免受蛋白酶降解，并参与p53的胞质装配及核转运，从而调控p53的功能。②Hsp90α可使p53在胞质中的半衰期延长，这可能是由于Hsp90α的构象改变，需要高浓度的ATP才能使p53与其解离。③突变的p53构象的改变可暴露出与Hsp90α结合的高亲和力位点，亦可能使p53在胞内积聚。胞核中Hsp90α与p53 DNA结构域结合，可封闭p53结合DNA的功能，使其失去调控蛋白作用，从而促进肿瘤的发生及发展。

Hsp90α及p53的表达与胃癌的发生及发展有关，胃癌组织中Hsp90α及p53表达呈正相关。对胃癌患者进行Hsp90α及p53联合检测，将有助于对胃癌的诊断及预后的判定。

4 结论

目前关于胃癌中Hsp90α及p53的表达及关系的研究较少，本研究提示，Hsp90α及p53的表达与胃癌的发生及发展有关，胃癌组织中Hsp90α及p53表达呈正相关。对胃癌患者进行Hsp90α及p53联合检测，将有助于对胃癌的诊断及预后的判定。

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