血脉健对动脉粥样硬化家兔血脂及血管形态学的影响

龚考玲，许宏伟，刘卫平

（1.湖南石门县人民医院神经内科，湖南 常德 415300；2.中南大学湘雅一医院神经内科，湖南 长沙 410008）

动脉粥样硬化（ Atherosclerosis，AS）是心脑血管疾病的共同病理基础，是危害人类健康的最严重疾病之一，其患病率和死亡率均居各类疾病之首。探讨AS的发病机理，从而更有效地防治AS是世界各国共同关注的重大课题。随着现代医学对动脉粥样硬化的认识不断深入，抗动脉粥样硬化的治疗方法和治疗药物均取得了较大的进展，但疗效满意的阻止AS进展的药物尚未发现。大量研究证明中医药在防治AS方面有明显的临床疗效，其作用机制通过多靶点而实现。本研究采用食饵性动脉粥样硬化家兔为受试对象，观察中药复方血脉健对血脂及血管病理形态学的影响。

1 资料与方法

1.1 实验动物

健康日本大白耳兔50只，体重1.5～2 kg，雌雄各半，分笼喂养，室温18～22 ℃，自由摄食、饮水，购于武汉市万千佳实验动物养殖有限公司，动物合格证SCXK（鄂）2004-0006。

1.2 主要药品及试剂

血脉健：由黄精、山茱萸、泽泻、三七等组成，药材购自湖南中医药大学第二附属医院，经鉴定后得水煎液备用；阿托伐他汀钙：Pfizer Ireland Pharmaceuticals生产，辉瑞制药有限公司进口分装，规格: 20 mg/粒，产品批号：95837030；牛血清白蛋白： Roche公司，批号：20082012；卵血清白蛋白: Sigma公司；胆固醇：北京鼎国生物技术有限责任公司；猪油：由市售新鲜猪板油炼制而成；蛋黄粉：安徽毫州市众意蛋业有限责任公司生产；总胆固醇（TC）试剂：Roche公司；甘油三脂（TG）试剂：Roche 公司；高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂: Roche公司。

1.3 高脂饲料配方

高脂饲料：按普通饲料79%、胆固醇1%、猪油5%、蛋黄粉15%比例配制，由湖南中医药大学实验动物中心加工成高脂颗粒饲料备用。普通饲料：玉米20%、麸皮22%、豆粕18%、苜蓿草粉38%、磷酸氢钙1.5%、食盐0.5%。

1.4 分组及造模方法

将健康日本大白耳兔50只，随机分为空白对照组（10只）和造模组（40只）。空白对照组予基础饲料饲养，不进行任何处理；造模方法参照文献[1]，通过高脂饲料喂养及血管内皮细胞免疫损伤复制兔动脉粥样硬化模型，以高脂饲料饲养，120 g/d，不足部分补充基础饲料，自由饮水，在造模的第1天从兔耳缘静脉注射牛血清白蛋白进行免疫刺激（25 mg/kg，1次/w，共注射3次），同时用卵清白蛋白进行皮下注射（2.5 mg/kg，1次/2d，共注射5次）。模型复制成功的家兔随机分为3组，即模型组、阿托伐他汀组、血脉健组，每组10只。

1.5 给药方法

分组后开始灌胃给药，CG和MG予冷开水灌胃，AG和XG组给予相应的药物灌胃，1 次/d，灌胃体积5 mL/kg，灌胃疗程1月。用药剂量阿托伐他汀0.45 mg/（kg·d），血脉健剂量0.4 g/（kg·d）。

1.6 观察指标及测定方法

分别于实验开始前第1天，实验开始后第60天和第90天末取血液标本。禁食12 h，不禁水，分别从兔耳中动脉采血2 mL，试管斜放，血液顺管壁缓慢流入，防止溶血。待血液完全凝固、血块收缩释出血清后，3000 rmp离心15 min，收取上清液（血清）。采用酶比色法在MODULAR P800全自动生化分析仪测定血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）由Friedewald公式（LDL-C=TC－HDL-CTG/2.2）计算所得。动物由空气栓塞法处死，迅速开胸，完整剥离主动脉（从主动脉起始部至髂总动脉分叉处），清除外膜附着组织。主动脉弓部分用生理盐水冲洗干净后，平铺于滤纸上并摄像，用作肉眼观察主动脉内膜面病变情况及斑块形成情况，并用4%的多聚甲醛固定。常规石蜡包埋，4 μm厚的切片，行苏木素-伊红（HE）染色，在光学显微镜下观察。

1.7 统计学分析

2 结果

2.1 各组家兔血清TC、TG、HDL-C、LDL-C的水平

给药前，与空白组比较，模型组、阿托伐他汀组和血脉健组TC、HDL-C和LDL-C含量均升高（P＜0.01），但三组之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；TG在各组变化不明显（P＞0.05）；如表1所示。

表1 给药前各组家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

表1 给药前各组家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C

注：与空白组比较，▲示P≤0.01。

group n TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.47±0.47 1.07±0.32 0.42±0.14 0.56±0.21 MG 10 30.97±2.11▲ 1.26±0.39 5.23±1.38▲ 25.17±4.18▲AG 10 30.66±2.71▲ 1.21±0.56 5.42±1.27▲ 24.69±4.27▲XG 10 30.91±2.59▲ 1.18±0.48 5.18±1.34▲ 25.19±3.710▲

经治疗1个月后，模型组血脂四项变化差异无统计学意义（P＞0.05）；而阿托伐他汀组和血脉健组TC、HDL-C和LDL-C均下降，与模型组比较差异有统计学意义（P＜0.01），高于空白对照组（P＜0.01）；血脉健组与阿托伐他汀组各项指标变化基本一致，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 治疗1月后各组家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比较

表2 治疗1月后各组家兔血脂TC、TG、HDL-C、LDL-C比较

注 ：与模型组比较，★示P＜0.01；与空白组比较，▲示P ＜0.01。

groupn TCmmoL/L TGmmoL/L HDLmmoL/L LDL-CmmoL/L CG 10 1.43±0.35 0.99±0.28 0.46±0.16 0.52±0.16 MG 9 30.36±2.9▲ 1.22±0.35 5.21±1.31▲ 24.60±4.47▲AG 9 14.34±2.32★▲ 1.14±0.46 2.46±1.11★▲ 11.36±3.17★▲XG 9 13.28±2.08★▲ 1.15±0.34 2.25±0.95★▲ 10.51±3.62★▲

2.2 主动脉弓病理形态学变化

空白对照组主动脉弓内膜光滑平整，未见粥样斑块及脂质点；血管壁三层结构清晰，血管内皮完整，无增厚及粥样斑块形成，中膜可见梭形平滑肌细胞，弹力纤维层结构清晰完整，外膜为薄层疏松结缔组织。模型组动脉内膜粗糙、不平，可见大小不等的乳白色斑块，部分可融合成片的大斑块，重者整条主动脉内膜见弥散分布脂质斑块，以主动脉起始部为重；动脉内膜明显增厚，脂质斑块弥漫，内有泡沫细胞大量积聚，内皮下大量脂质和泡沫细胞堆积，并可见破裂的斑块，中层结构紊乱，中膜平滑肌细胞排列紊乱，内弹性纤维断裂，排列紊乱，并有炎性细胞浸润。阿托伐他汀组和血脉健组较模型组病变减轻，以小片状、条索状斑块散在于主动脉起始部；血管内膜略增厚，结构基本完整，内皮下仅见少量泡沫细胞，血管平滑肌细胞增生不明显；中层内弹力纤维膜连续，有少量炎性细胞浸润，外膜未见脂肪细胞。见图1。

图1 各组家兔主动脉弓HE染色图（×400）

2.3 主动脉弓斑块厚度及斑块面积

正常组血管内膜无斑块；阿托伐他汀组和血脉健组斑块面积和斑块厚度低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.01）；与阿托伐他汀组比较，血脉健组斑块厚度和斑块面积差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 各组家兔斑块厚度及斑块面积情况

表3 各组家兔斑块厚度及斑块面积情况

注：与模型组比较，★示P＜0.01。

group n 斑块厚度(μm)斑块面积(μm2)CG 10 0 0 MG 9 155.26±33.45 103497.12±36247.65 AG 9 129.05±41.30★ 71511.13±26379.40★XG 9 119.52±33.56★ 69170.82±28143.88★

3 讨论

祖国医学没有动脉粥样硬化这一病名记载，一般认为属“血瘀”、“真心痛”、“眩晕”、“胸痹”等范畴。《素问·痹论》云：“心痹者，脉不通”，“痹在于骨则重，在于脉则血凝而不流”,《金匮要略》载：“胸痹之病，喘急、咳唾、胸背痛、短气、寸口脉沉而迟，关上小紧数……”，以上都符合现代医学对高脂血症和冠心病心绞痛及脑动脉粥样硬化临床症状的描述。祖国医学有关类似动脉粥样硬化治疗的论述也很多，《素问·至真要大论》中提出：“疏其血气，令其调达”。《金匮要略》曰：“胸痹不得卧，……瓜蒌薤白半夏汤主之”。朱丹溪重视解郁散结，创气、血、湿、痰、食、热六郁之说。王清任创活血化瘀方剂血府逐瘀汤，专治“胸中血瘀证”。

现代中医研究认为，高脂血症、动脉粥样硬化属痰、湿、浊阻、血瘀范畴，为肝肾不足，脾失健运，痰瘀同病，主要表现为本虚标实、虚实夹杂。本虚可累及心、脾、肝、肾四脏，为病之本，以痰瘀互阻为病之标。正虚邪实相互影响，致使病变不断发展。其病在血脉，根在脏腑。认为肾精亏损，淤血阻络是本病的基本病机[2]；脾失健运，痰凝瘀停是该病的病机关键[3]；亦有认为肝郁气滞，痰浊内生之病机[4]。对AS防治的辨证论治原则一般归纳为健脾益气、滋阴养血、补益肝肾以治其本，活血化瘀，软坚散结，消食化痰，通脉化浊以治其标。张大宁[2]等于70年代末首先提出的补肾活血法治疗AS取得一定的疗效；赵学军[3]等运用健脾益气化痰法在一定程度上阻抑家兔早期AS病变的形成；赵玉霞[5]等注重活血化瘀通络，以水蛭为主药活血化瘀，对AS患者有明显的疗效；张柏丽[4]等运用调肝导浊法治疗AS取得明显的疗效。笔者认为，随着人们生活水平的提高，青少年肥胖，高脂血症越来越多，AS发病年龄逐渐前移。青少年素体阳盛，加之恣饮酒浆，喜食辛辣厚味，则易形成胃肠积热，燥热内结，以致火盛水亏，津液不生，损及脾阴，而胃阳独旺。滞热积聚，熏蒸上炎，损及心阴，阴血亏虚，心神失养而致心悸胸闷。加之所食之水谷化生精微过多，脾之运化功能负荷过重，常会引起湿困脾阳，脾失健运，水谷肥甘之物无以化生气血精微，脾之清气不能化浊，血中脂质增高，阻遏经行，脉络不畅，心络阻于痰浊。胃强脾弱，痰瘀阻络是其病机关键，治宜平胃健脾，化痰祛瘀，乃组建血脉健处方，方中黄精、云苓补脾益气，黄连、漏芦泻胃火，同时黄精与山茱萸配伍补益肝肾，使脾阳得肾阳温煦而运化水谷精微和水湿，脾土赖肾水之濡养而健运不息。郁金辛散苦泄，能芳香解郁，凉血清心，宣化痰浊；泽泻消痰、利水、泄热之效；蒲黄、地龙化痰、祛瘀、通络的作用，俱药合用，标本兼治，补泻并施，行滞通脉。

本研究所用AS模型通过牛血清白蛋白和卵清蛋白免疫刺激损伤血管内皮，再饲以高脂饲料而成，模型家兔主动脉内膜和基层均符合AS病理改变；总胆固醇和HDL-C、LDL-C均显著升高，并且LDL-C升高幅度显著高于HDL-C，甘油三酯变化不显著，以上结果提示，该模型与Ⅱa型高脂血症相似，符合AS主动脉病理学变化特征[6]，可以用于AS的防治研究。该实验性AS模型经血脉健治疗1月后，对血脂和主动脉斑块有明显的改善作用，0.4 g/（kg·d）的作用效果与0.45 mg/（kg·d）阿托伐他汀的作用效果基本一致，提示血脉健是一个治疗AS的有效中药复方，其作用机制有待进一步研究。

[1]郭爱桃,韦立新,李向红. 冠状动脉粥样硬化斑块组成成分与斑块破裂的关系[J]. 中国动脉硬化杂志,1999,7: 357-359.

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[3]赵学军,等. 理脾化痰方抗家兔早期食饵性动脉粥样硬化症实验研究[J].山东中医药大学学报,2001,25(6):461-462.

[4]张柏丽.调肝导浊中药对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及胞内钙离子影响的实验研究[J]. 北京中医药大学学报,2002,25 (2):25-27.

[5]赵玉霞. 祛瘀消斑胶囊对动脉粥样硬化组织学构成的临床研究[J]. 上海中医药杂志,2001,12:13-14.

[6]王园园,龙民慧.兔动脉粥样硬化动物模型的建立和评价[J].实验动物科学,2008, 25(3):18-21.