乳酸菌在青贮饲料中的应用

罗 璠，郭艳峰

（1.西南民族大学生命科学与技术学院，四川 成都 610041；2.深圳出入境检验检疫局，广东 深圳 518045）

由于抗生素在饲料中添加后引发的药物残留问题严重影响到了食品安全，因此世界各国对抗生素在饲料中的使用已有了越来越严格的限制，开发新型的抗菌剂及助长剂成为近年来的研究热点。微生态制剂因其具有无毒、无害、无污染、无残留等优良特性，成了抗生素的重要替代品之一，其中乳酸菌等微生态制剂的作用引人关注。添加动物乳杆菌可以确保青贮发酵初期有充足的乳酸菌促进乳酸发酵，从而抑制杂菌生长。本试验利用一株分离自猪肠道的动物乳杆菌来处理黑麦草，探讨其对黑麦草青贮发酵品质的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 青贮原料 黑麦草：一年生黑麦草，采自红原草场。

1.1.2 菌种 动物乳杆菌（Lactobacillus animalis），四川省资源微生物及微生物技术重点实验室惠赠。

1.1.3 培养基 发酵培养基（改良MRS培养基）：大豆蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0 g，酵母提取物5.0 g，葡萄糖20.0 g，乙酸钠5.0g，K2HPO42.0 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，柠檬酸二胺 2.0 g，Mn2SO4·H2O 0.25g，琼脂 15.0 g，蒸馏水1.0L，pH自然。

乳酸杆菌计数培养基：酪蛋白水解物10.0g，酵母提取物5.0 g，柠檬酸胺2.0 g；乙酸钠（CH3COONaO3H2O)25.0g，MgSO4·7H2O 0.58g，琼脂15 g，葡萄糖 20.0 g，吐温 80 1.0mL，磷酸氢二钾 6.0 g，FeSO4·7H2O 0.03g，MnSO4·4H2O 0.15g。

霉菌计数培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）：马铃薯块200～300 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，pH值在5.5～5.7。

1.2 方法

1.2.1 动物乳杆菌的培养 将动物乳杆菌接种于MRS液体培养基中，30℃静置培养48h，4000 r/min离心10min，收集菌体，用无菌生理盐水配制成4×105CFU/mL的菌悬液。

1.2.2 黑麦草的调制 将预干的黑麦草分为两组，一组作为空白对照组（CK），一组作为试验组，加入乳酸菌制剂。将两组黑麦草切割至2～5 cm长，按每克干黑麦草加入105CFU/mL乳酸菌的量喷洒菌悬液，混合均匀后称500 g黑麦草装入密封的塑料袋中；空白对照组喷洒等量的水，称500g装袋密封。每组样品做3个重复。两组样品置常温下（25±2）℃避光存放。

1.2.3 菌种计数 在存放过程中，分别于1、2、3、7、10、15、30 d从密封袋中取10g样品进行菌种计数。

1.2.4 pH 测定 在存放过程中，分别于 1、2、3、7、10、15、30d从密封袋中取10g样品，加入15mL无菌水充分混匀，浸泡10min后过滤，用精密pH计测定pH值。

2 结果与分析

2.1 青贮过程中乳杆菌的变化 随着青贮的进行，乳杆菌的数量快速增加，如图1所示。在第15 d达到高峰，随后数量缓慢下降。与空白对照组相比，动物乳杆菌菌数的增加量是对照组的3倍。

图1 青贮过程中乳酸菌的变化

2.2 青贮过程中霉菌的变化 随着青贮的进行，霉菌的生长明显受到抑制，试验组的霉菌在第1 d就急剧减少，而空白对照组的霉菌增殖延续到第3 d。在算20 d时，试验组的霉菌数量少于10个。详见图2。

图2 青贮过程中霉菌的变化

2.3 青贮过程中pH的变化 如图3所示，青贮过程中pH有一定的变化，在空白组中pH有略微下降，而试验组的pH值下降明显。

图3 青贮过程中pH的变化

3 结论

由试验结果明显看出，在青贮饲料中添加动物乳杆菌能显著抑制霉菌的生长，延长青贮饲料的保藏期，这可能与乳酸菌能产生大量的乳酸等有机酸有关，也可能与动物乳杆菌产生的其它抑制霉菌生长的物质有关，具体抑菌机制还需深入探讨。

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