内皮素在梗阻性黄疸大鼠肾损伤中的作用及丹参的影响

秦琦瑜 李勇 陈进军 范立侨 张庆富 赵群 陈虎 石鑫 王威

梗阻性黄疸(obstructive jaundice，OJ)患者术后易并发急性肾衰竭。OJ引起肾功能损害的原因是多方面的，目前认为微循环障碍及一些炎性介质可能起重要作用。内皮素(ET－1)是极强的缩血管活性因子，常导致脏器微循环障碍［1］，而丹参常用于防治与微循环障碍相关的疾病。本实验复制大鼠OJ模型，通过观测OJ大鼠血浆ET－1及肾皮质微循环的变化，探讨OJ肾损伤的机制及丹参的治疗作用。为临床防治OJ引起的肾损害提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验对象及分组 雄性健康SD大鼠90只(河北医科大学实验动物中心提供)，体重(210±30)g。随机分为假手术组(SO组)，胆总管结扎组(BDL组)，丹参干预组(SM组)，每组又分为3、7、10 d 3个时相，每个时相10只。

1.2 实验仪器及药品 WX－9型微循环显微镜及其微循环图像分析系统，WX恒温恒湿灌流系统，均为徐州光学仪器总厂产品。2%戊巴比妥钠注射液(丹参注射液，正大青春宝药业)。ET－1试剂盒，由解放军总医院科技开发中心放免所提供。

1.3 模型建立 术前禁食12 h，自由饮水，予2%戊巴比妥钠注射液，0.25 ml/100 g腹腔注射麻醉，自上腹正中切口进腹。SO组仅分离胆总管，不结扎;BDL、SM组在分离胆总管后，于胆总管中上段用0号丝线双重结扎，然后关腹。3组大鼠从手术当日开始，每日腹腔内注射药物干预至预设定时相的前1 d。SO、BDL 2组注射0.9%氯化钠溶液，0.5 ml/100 g，SM组大鼠注射丹参注射液(0.5 ml/100 g)，1次d。

1.4 肾皮质微循环观测 3组在相应时相点，按上述方法麻醉后，右肋缘下斜切口开腹，暴露右肾，稍加以分离，温0.9%氯化钠溶液持续灌注右肾表面，温度23～25℃，室内湿度维持在29%～31%。用WX－9型微循环显微镜及其微循环图像分析系统，观测右肾皮质微血管的管径。

1.5 血指标检测 血清总胆红素(TB)，尿素氮(BUN)，肌酐(Cr)，使用全自动生化分析仪测定。ET－1采用放射免疫分析法测定，按照说明书操作。

1.6 统计学分析应用SPSS 11.5统计软件，计量资料以表示，采用t检验或方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 血清胆红素测定 BDL、SM组血清总胆红素水平明显高于SO组，差异有统计学意义(P＜0.05)。BDL组TB水平随胆总管结扎时间延长而增高明显(P＜0.05)。见表1。

表1 3组不同时相TB水平比较 μmol/L，

表1 3组不同时相TB水平比较 μmol/L，

注:与SO组比较，*P ＜0.05;与3 d比较，#P ＜0.05;与7 d比较，△P ＜0.05

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2.2 ET－1的测定 与SO组比较，BDL组各时相ET－1水平显著升高(P＜0.05)。BDL组ET－1水平随着胆总管结扎时间的延长升高更加明显(P＜0.05)。与BDL组比较，SM组各时相的ET－1水平显著降低(P ＜0.05)。见表2。

表2 3组不同时相血浆ET－1水平比较 pg/ml，

表2 3组不同时相血浆ET－1水平比较 pg/ml，

注:与SO组比较，*P ＜0.05;与BDL组比较，#P ＜0.05;与3 d比较，△P ＜0.05;与7 d比较，☆P ＜0.05

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2.3 肾皮质微血管管径的观测 与SO组比较，BDL组各时相微血管管径变小，差异有统计学意义(P＜0.05)。BDL组随着胆总管结扎时间的延长管径变小更加明显(P＜0.05)。与BDL组比较，SM组3 d无明显变化，7、10 d微血管管径增大(P＜0.05)。见表3。

表3 3组不同时相肾皮质微血管管径比较 μm，

表3 3组不同时相肾皮质微血管管径比较 μm，

注:与SO组比较，*P ＜0.05;与BDL组比较，#P ＜0.05;与3 d比较，△P ＜0.05;与7 d比较，☆P ＜0.05

组别 3 d(n=10) 7 d(n=10) 10 d(n=10)SO组11.6±1.1 11.2±1.5 11.7±2.1 BDL组 10.3±2.3* 8.8±2.1*△ 7.5±1.9*☆SM组 10.3±3.7 10.6±2.9# 11.2±3.3#

2.4 血清BUN测定 与SO组比较，BDL组3 d无明显变化，7、10 d BUN水平升高(P＜0.05)。BDL组随着胆总管结扎时间的延长BUN水平升高(P＜0.05)。与BDL组比较，SM组3、7 d无明显变化(P ＞0.05)，10 d BUN水平下降(P ＜0.05)。见表4。

表4 3组不同时相血清BUN水平比较 mmol/L，

表4 3组不同时相血清BUN水平比较 mmol/L，

注:与SO组比较，*P ＜0.05;与BDL组比较，#P ＜0.05;与3 d比较，△P ＜0.05;与7 d比较，☆P ＜0.05

组别 3 d(n=10) 7 d(n=10) 10 d(n=10)SO组6.2±0.5 6.3±0.9 5.8±0.6 BDL组 5.9±0.8 8.3±1.2*△ 10.9±1.3*☆SM组 6.4±0.8 7.8±1.0 8.7±1.2#

2.5 血清Cr测定 与SO组比较，BDL组3 d无明显变化，7、10 d Cr水平升高(P＜0.05)。BDL组随着胆总管结扎时间的延长Cr水平升高(P ＜0.05)。与BDL组比较，3、7 d无明显变化(P＞0.05)，SM组10 d Cr水平下降(P ＜0.05)。见表5。

表5 3组大鼠不同时相血清Cr水平比较

3 讨论

OT常引起诸多脏器、组织不同程度的损害，OJ患者术后肾功能损害较常见，研究发现许多因素参与OJ后肾损害的发生，如:循环血量不足，肾血流量减少，血浆内毒素水平升高，高胆红素血症等。并认为内毒素很可能通过ET的介导而致肝肾功能损害。Foitzik等［2］发现ET可使水肿性胰腺炎小鼠血管收缩、胰腺毛细血管血流量减少，说明ET是促进微循环衰竭的重要因子。脏器微循环障碍可以导致机体相应组织器官有效血液灌流不足，缺血、缺氧，出现功能紊乱和形态学改变。

本实验结果显示:BDL组3 d后血浆ET－1含量即升高，随着胆道梗阻时间的延长ET－1呈进行性升高，并且肾皮质微血管收缩，管径变小，OJ 7、10 d后反映肾功能的重要指标血清BUN、Cr水平升高，肾功能受损。ET－1的升高与TB、肾皮质微血管的管径变化及肾功能改变呈同步趋势。提示血浆ET－1水平升高及肾皮质微循环障碍，可能是OJ时肾功能损害的重要因素。以往也有实验显示OJ时血浆、肾组织中ET－1含量明显升高［3］，肝内 ET－1含量也明显升高，且与肝脏损害成正相关［4］。可能是OJ时血液中的高结合胆红素、内毒素及手术因素共同作用使ET－1含量升高。其中内毒素可以在ET－1 mRNA的转录和翻译水平直接调节ET－1的合成和释放［5］。也有学者认为某些胆盐成分刺激血管内皮细胞和肾内毛细血管可以使ET－1合成与释放增多。ET－1是目前发现的作用最强和作用时间最持久的内源性缩血管活性肽［2］，通过作用于血管平滑肌的ET－1受体，诱导细胞外钙离子内流，导致细胞内钙超载引起血管强烈收缩。根据本实验结果推断OJ时肾皮质微血管收缩可能与ET－1水平升高有密切关系。造成OJ时肾皮质微血管强烈收缩，微循环障碍，从而影响肾皮质的血液灌注，加上手术失血等因素，肾脏缺血、缺氧致肾脏损伤。

丹参注射液可以降低肠道通透性，减少内毒素和细菌移位，降低血内毒素水平。抑制氧化酶活性，减轻氧自由基脂质过氧化作用。能够抑制ET－1的合成。研究证明丹参与生脉联合应用可明显降低 OJ患者术后内毒素、ET－1水平［6］，其机制可能与丹参和生脉注射液能抑制和抵抗内毒素，进而降低内毒素诱导的ET升高有关。丹参治疗急性胰腺炎，胰腺ET－1 mRNA表达明显下调，血中ET－1水平显著降低，说明丹参注射液通过抑制ET－1 mRNA过度表达，减少ET－1的大量生成，从而发挥其保护作用［7，8］。以上研究均证实丹参可以降低血浆ET－1水平，与本实验结果一致。本实验中给予丹参注射液治疗3 d后，OJ大鼠血浆ET－1水平即开始下降，各时相ET－1水平与胆总管结扎组比较均明显降低，7、10 d后肾皮质微血管扩张、管径增大，血清BUN、Cr水平明显降低，肾功能指标显著改善。说明丹参注射液能够降低OJ大鼠血浆ET－1水平，扩张肾皮质微血管、改善肾皮质微循环，进而改善肾功能。本实验提示丹参注射液对OJ引起的肾损害具有保护作用。

1 周晓娜，常丽丽，时晓冬，等.急性胰腺炎患者血浆内皮素和P－选择素的变化及丹参对其的影响.中国医师进修杂志，2006，29:37－38.

2 Foitzik T，Faulhaber J，Hotz HG，et al.Endothelin mediates local and systemic disease sequelae in severe experimental pancreatitis.Pancreas，2001，22:248－254.

3 柏楠，蔺锡候，王宇，等.梗阻性黄疸大鼠血浆和肾组织内皮素含量的变化及与肾功能关系的研究.中华肝胆外科杂志，2002，8:228－231.

4 李小刚，刘青光，潘承恩，等.丹参注射液对梗阻性黄疸大鼠肝内NO、MDA、ET的影响及其意义.西安医科大学学报，2002，23:93.

5 Housset C，Rockey DC，Bisseum，et al，Endothel in receptorin the liver:lipocytes as a contractile target for endothelia－1.Proc Natl Acad Sci USA，1993，90:9266.

6 王向东，彭兵，贾乾斌，等.丹参与生脉合用对阻塞性黄疸术后内毒素、内皮素及细胞因子影响的研究.现代预防医学，2006，33:265－266.

7 石承先，张莹，李玉祥，等.急性胰腺炎胰腺内皮素mRNA表达与肠壁通透性的关系及丹参的影响.贵州医药，2009，33:14－16.

8 赵军，白秋江，胡跃民，等.内皮素受体拮抗剂临床研究进展.河北医药，2009，31:1242－1243.