孟秀芹 张善辉
近年来C反应蛋白(CRP)作为一种敏感的急性时相蛋白,颇受临床的重视。本室近期引进一台由芬兰Orion Diaqnostica公司提供的小型QuikRead CRP分析仪。根据临床实验室质量管理的要求,临床实验室采用新的检测系统,必须对该系统的性能进行测试验证[1]。我们以目前检测血清CRP较为成熟的ARRAY360特定蛋白分析仪作为比对系统,对QuikRead CRP分析仪的精密度、线性、可比性等进行评价。
1.1 仪器 芬兰QuikRead 101 CRP分析仪,检测原理:人血清或全血中的CRP与包被在微球颗粒上的抗人CRP抗体结合,产生浊度,在QuikRead上可测得其浊度改变,根据随试剂配备磁卡上储存的预先设定的校正曲线,可直接读出其浓度值;美国ARRAY360特定蛋白分析仪,原理为速率散射比浊法。
1.2 试剂 QuikRead CRP分析仪采用Orion Diaqnostica公司提供的 CRP原装试剂和配套质控品;ARRAY360采用Beckman-Coulter公司提供的CRP原装试剂和配套质控品。
1.3 样本 收集50例无溶血、脂血及黄疸的新鲜血样各两管,一份不抗凝,一份用EDTA-K2抗凝。
1.4 方法
1.4.1 仪器定标 常规开机后用各自的配套定标系统对CRP进行定标。
1.4.2 质量控制 采用配套质控品分别在两台仪器上作室内质控,确保质控结果在允许范围内。
1.5 评价方法
1.5.1 重复性测定 将本院2008~2010年间由特定蛋白仪检测的1832例血清样本的CRP浓度进行分组(见表1);按照CRP浓度的分布情况,选取由QuikRead CRP分析仪测得的80 mg/L(高)、20 mg/L(中) 、3 mg/L(低)全血标本各1例,重复测定6次,记录结果;将样本在室温放置2 h后,重复上述操作,所得结果进行统计学分析,可观察到不同浓度水平的批内和批间精密度(见表2)。
1.5.2 线性检测 1份CRP浓度为140 mg/L的全血标本,用新鲜混合血浆(CR P<1 mg/L)稀释为以下8个浓度:140、120、100、80、60、40、20、10 mg/L,按常规方法测定 CRP,各个浓度测定3次,结果见表3,并用统计学方法进行测定值与理论值相关性分析。
1.5.3 对比实验 按照表1中CRP浓度分布比例,取CRP低值(<10 mg/L)、中值(10~50 mg/L)和高值(>50 mg/L)共50份血样,在QuikRead上检测每份标本全血和血浆的CRP浓度,在ARRAY360测定血清CRP浓度,比较3组结果的相关性。
1.6 统计学方法 线性回归和相关性分析均由SPSS 13.0统计软件完成。
见表 1、2、3、4。
表1 1832例血清样本的CRP浓度分组结果
表2 不同浓度水平的批内和批间精密度
表3 线性稀释结果
表4 比对实验结果
C反应蛋白(C reactiveprotein,CRP)是急性时相反应中重要的标志物之一,在各种急性和慢性感染、组织损伤、恶性肿瘤、手术创伤等时迅速升高,病变好转时又迅速降至正常[2]。新生儿期感染性疾病缺乏特异性表现,特别是新生儿败血症,病原菌的分离、培养时间长,阳性率低,使早期诊断受到限制,而CRP可为新生儿感染性疾病的早期诊断提供有效的客观依据[3]。连续、定量、快速测定CRP,有利于疾病早期诊断、监测疗效及预后判断,对抗生素应用是否有效,更有独特的重要作用。
目前检测CRP较为广泛和成熟的系统是特定蛋白分析仪,本科一直使用ARRAY360检测血清CRP,但因标本用量大、婴幼儿采血困难、报告不及时等因素,CRP作为急性时相反应蛋白的优势不能充分体现;而QuikRead CRP分析仪使用简便、用血量少(全血20 μl)、2.5分钟内即可检出结果。
QuikRead检测CRP时,如样本浓度>160 mg/L,则需对样本进行稀释;通过对近两年本院血清CRP浓度分布的分析,血清CRP浓度>160 mg/L的样本只占1.3%,可见常规工作中,需要稀释的样本很少;重复性试验结果显示QuikRead检测全血CRP浓度结果精确性较高;比对结果显示:CRP的QuikRead血浆浓度和ARRAY360血清浓度的相关性极好(r=0.998),优于QuikRead全血浓度和ARRAY360血清浓度的相关性(r=0.964),也优于QuikRead全血浓度和QuikRead血浆浓度的相关性(r=0.968),分析原因,QuikRead全血检定的试剂定标是在红细胞压积为40时测定的,因此全血CRP浓度受红细胞压积的影响;在进行全血CRP线性稀释试验时,按照仪器说明提供的红细胞压积校正公式将稀释结果进行了校正,结果显示,全血CRP有良好的稀释线性,线性范围亦较宽。
QuikRead可检测全血或血浆CRP,因实际工作中CRP通常与血常规联单,两个项目可共用一管EDTA-K2抗凝全血,我科首选检测全血CRP,简化操作,方便患者,亦可弥补红细胞压积对全血CRP浓度的影响。
[1]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程.第3版.东南大学出版社,2006:58.
[2]周宓,潘柏申.C反应蛋白在临床应用中的进展.国外医学临床生物化学与检验学分册,2005,26(1):56-57.
[3]昊苔,陈莉亚.血清C反应蛋白在新生儿感染时的变化.浙江预防医学,2001,13:46.